全盟自愿咨询检测培训班概要

1、全盟自愿咨询检测培训班概要全盟自愿咨询检测培训班概要 HIV实验室诊断方法实验室诊断方法 病原学检测病原学检测 血清抗体检测血清抗体检测靶细胞的检测靶细胞的检测 病毒载量检测病毒载量检测特异性实验诊断特异性实验诊断 HIV抗体测定抗体测定 抗原测定抗原测定核酸测定核酸测定病毒分离病毒分离 CD4淋巴细胞计数淋巴细胞计数HIV抗体筛查检测抗体筛查检测 程序程序筛查、复检、确认筛查、复检、确认 原理原理酶联免疫、凝集、层析酶联免疫、凝集、层析 标本标本血液、唾液、尿液、组织液血液、唾液、尿液、组织液 产品产品ELISA、快速、快速常用常用HIV抗体检测方法抗体检测方法 明胶颗粒凝集试验（明胶颗粒凝

2、集试验（PA) 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISA） 快速快速HIV检测检测 免疫印记法免疫印记法 （ Western Blot） 其他方法：免疫荧光法（其他方法：免疫荧光法（IFA）、放）、放 射射免疫沉淀实验免疫沉淀实验艾滋病的检测艾滋病的检测艾滋病的检测主要是抗体检测、抗原监测和核酸检测，一般艾滋病的检测主要是抗体检测、抗原监测和核酸检测，一般实验室主要进行抗体检测，主要是需要条件比较简单；实验室主要进行抗体检测，主要是需要条件比较简单； 艾滋病初筛检测是不能直接告诉被检者，必须经过确认艾滋病初筛检测是不能直接告诉被检者，必须经过确认后才可以告知；后才可以告知； 目前，每个省

3、市自治区一般只有一家艾滋病确认实验室。目前，每个省市自治区一般只有一家艾滋病确认实验室。 “艾滋病病毒抗体初筛实验室、采供血机构或其它进行艾滋病艾滋病病毒抗体初筛实验室、采供血机构或其它进行艾滋病病毒检验的机构检测发现的艾滋病病毒抗体阳性结果的标本应病毒检验的机构检测发现的艾滋病病毒抗体阳性结果的标本应尽快送确认实验室确认。在确认之前，不得通知受检者。尽快送确认实验室确认。在确认之前，不得通知受检者。”酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISA） 如果待测血浆中出现如果待测血浆中出现HIV 抗体，则它会抗体，则它会与固定于试验孔内的与固定于试验孔内的HIV 抗原以及随血抗原以及随血浆加入的

4、同类酶联抗原形成夹心浆加入的同类酶联抗原形成夹心; 试验孔经过彻底洗涤后除去未结合的酶。试验孔经过彻底洗涤后除去未结合的酶。加入一种显色剂；加入一种显色剂； 结合形式的酶会催化显色反应；结合形式的酶会催化显色反应； 血浆中出现的抗体就会由于颜色变化而血浆中出现的抗体就会由于颜色变化而被显示出来被显示出来ELISA酶联免疫吸附实验 ELISA Enzyme linked immuno sorbent assayHIV 抗原包被平板病人抗体显色剂酶+ ve- ve对照阴性阳性? 结果ELISA 平板平板（PA）检测的基本原理）检测的基本原理检测检测HIV1/2抗体的体外诊断试剂抗体的体外诊断试剂

5、将重组将重组HIV-1抗原抗原(HIV-1/gp41和和HIV-1/P24)和和HIV-2抗原（抗原（HIV-2/gp36)包被在人工载体明胶粒子上包被在人工载体明胶粒子上 这些致敏粒子和血中的这些致敏粒子和血中的HIV-1抗体或抗体或HIV-2抗体发生抗体发生凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的HIV-1/2的抗体的抗体（PA）检测结果的判定）检测结果的判定金标法（胶体硒法）基本原理金标法（胶体硒法）基本原理 本本HIV1/2快速测试试剂是用一种免疫层快速测试试剂是用一种免疫层析法原理定性测定血样中析法原理定性测定血样中HIV1/2抗体抗体 样品层析迁

6、移到硒胶体样品层析迁移到硒胶体-抗原结合物包被抗原结合物包被处，与之相结合，此结合物继续迁移通处，与之相结合，此结合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的病人过固相包被的合成肽和重组抗原的病人结果窗口结果窗口金标法（胶体硒法）结果判定金标法（胶体硒法）结果判定快速诊断试验（RT） Rapid Tests 优点优点: 操作快操作快; 不需定量不需定量; 不需专门设备和人员培训不需专门设备和人员培训; 同一天出结果。同一天出结果。 为保证试验质量必须用为保证试验质量必须用WHO 推荐的快推荐的快速速HIV 抗体试验抗体试验。免疫印迹实验（免疫印迹实验（WB） Western Blot Assa

7、y检测血浆中能与各种的病毒蛋白反应检测血浆中能与各种的病毒蛋白反应HIV 抗体；抗体；不同的病毒蛋白根据其分子量不同在电泳凝胶上被分成不同的条带；不同的病毒蛋白根据其分子量不同在电泳凝胶上被分成不同的条带；然后将这些蛋白质转移或点到硝酸纤维膜上，与病人血浆共同孵育。然后将这些蛋白质转移或点到硝酸纤维膜上，与病人血浆共同孵育。HIV 抗体与特异抗原蛋白反应，并结合到纤维膜目标蛋白移动的相同位置上；抗体与特异抗原蛋白反应，并结合到纤维膜目标蛋白移动的相同位置上；用测色技术检测结合的抗体。用测色技术检测结合的抗体。不同情况下的抗体试验不同情况下的抗体试验An Assay for Every Occa

8、sion抗体试验选择视具体情况而定抗体试验选择视具体情况而定，主要取主要取决于三个因素：决于三个因素： 试试验目的；验目的； 试试验的灵敏度和特异度验的灵敏度和特异度; 检测人群中检测人群中HIV 感染率感染率。HIV抗体检测的目的抗体检测的目的HIVHIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 以监测为目的的检测是为了解不同人群以监测为目的的检测是为了解不同人群HIVHIV感染感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。各类高危人群和一般人群。 以诊断为目的的检测是为了确定个体以诊断为目的的

9、检测是为了确定个体HIVHIV感染状况感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIVHIV而而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。明确明确HIV抗体检测的要点抗体检测的要点 1 1 筛查试验阳性不能出阳性报告。筛查试验阳性不能出阳性报告。 2 2 严格遵守实验室标准操作程序严格遵守实验室标准操作程序（SOPSOP）。）。 3 3 严格按照试剂盒

10、说明书操作。严格按照试剂盒说明书操作。 4 4 注意防止样品间交叉污染。注意防止样品间交叉污染。试试验特征验特征 Test Characteristics 每一个生物学试验都有可能产生假阳性每一个生物学试验都有可能产生假阳性和假阴性结果；和假阴性结果； 生物学试验的精确度可用三个指标来描生物学试验的精确度可用三个指标来描述述: 灵敏度；灵敏度； 特异度；特异度； 预测值预测值。灵敏度、特异度灵敏度、特异度灵敏度是一个试验检出真阳性的能力灵敏度是一个试验检出真阳性的能力；高灵敏度的试验很少产生假阴性结果高灵敏度的试验很少产生假阴性结果；高灵敏度的试验用于绝对避免假阴性结果的情况，如输血服高灵敏度

11、的试验用于绝对避免假阴性结果的情况，如输血服务。务。特异度一个实验检出真阴性能力特异度一个实验检出真阴性能力；高特异度的实验很少产生假阳性结果高特异度的实验很少产生假阳性结果； 高特异度的实验用于绝对避免假阳性结果的情况，如个体高特异度的实验用于绝对避免假阳性结果的情况，如个体的的HIV 感染的诊断。感染的诊断。 预测值预测值 Predictive Value 一个具体试验准确地测定个体感染一个具体试验准确地测定个体感染HIV 可能性随着人群可能性随着人群HIV 感染率的不同而变感染率的不同而变化。化。 假阴性结果在低流行人群中少见；假阴性结果在低流行人群中少见； 假阳性结果在高流行区域少见；

12、假阳性结果在高流行区域少见； 假阴性结果在高流行区域常见；假阴性结果在高流行区域常见； 假阳性结果在低流行区域常见。假阳性结果在低流行区域常见。数学表达数学表达 Mathematical expressionHIV真实状况真实状况+-检测结果检测结果+aba + b真阳性真阳性假阳性假阳性-cdc + d假阴性假阴性真阴性真阴性a + cb + d灵敏灵敏度度 = a/a+c 阳阳性预测值性预测值= a/a+b特异度特异度 = d/b+d 阴阴性预测值性预测值= d/c+dWHO 推荐的灵敏度和特异度的最低标准分别是推荐的灵敏度和特异度的最低标准分别是 99 %和和 95 % 。检测策略检测策

13、略 Testing Strategies 首选敏感性高的试剂首选敏感性高的试剂 主张重复检测所有阳性结果，尽可能主张重复检测所有阳性结果，尽可能避免假阳性产生；避免假阳性产生； 必须权衡重复必须权衡重复HIV 检测在准确度方面的检测在准确度方面的收益与增加的成本；收益与增加的成本；系列试验和平行试验系列试验和平行试验 Serial Versus Parallel Testing 系列试验（最常见）系列试验（最常见）： 第一次试验用高灵敏度的试验以减少假阴性第一次试验用高灵敏度的试验以减少假阴性结果结果； 第二次试验在第一个试验为阳性时才做第二次试验在第一个试验为阳性时才做 平行试验：平行试验：

14、 进行两个抗体的检测进行两个抗体的检测； 两个试验的靶抗原和原理不同两个试验的靶抗原和原理不同； 一个试验高度灵敏，而另一试验高度特异。一个试验高度灵敏，而另一试验高度特异。平行试验的优缺点平行试验的优缺点 平行试验的优点：平行试验的优点： 降低高感染率人群假阴性结果风险降低高感染率人群假阴性结果风险； 只需一次指尖取血只需一次指尖取血； 二个试验比一个试验的感觉好二个试验比一个试验的感觉好； 降低病人被叫回做第二次试验的耻辱感。降低病人被叫回做第二次试验的耻辱感。 缺点：费用高缺点：费用高HIV快检程序框图快检程序框图 Serial HIV rapid testing schema第一次检测

15、第一次检测/筛查实验：筛查实验：高灵敏度 阴性检测结果阴性检测结果 报告阴性结果检测后咨询包括讨论窗口期和6周后重复检测阳性结果阳性结果第二次实验第二次实验/确认实验确认实验 ：高特异度，：高特异度，最好用与第一次不同原理方法阳性检测结果阳性检测结果报告阳性检测结果（建议确认）阴性结果阴性结果第三次实验第三次实验/对不一致结果对不一致结果或送往参比实验室的样本进行的确诊实验 阳性检测结果阳性检测结果报告检测结果阴性检测结果阴性检测结果 报告检测结果HIVHIV抗体检测的替代策略抗体检测的替代策略目的目的地区地区人群人群替代策略替代策略艾滋病疫情艾滋病疫情报告报告任何地区任何地区任何人群任何人群

16、替代策略替代策略 VCT高流行地区高流行地区高危人群高危人群替代策略替代策略高流行地区高流行地区高危人群高危人群替代策略替代策略其它地区其它地区任何人群任何人群替代策略替代策略检测程序检测程序 重复检测重复检测 筛查试验筛查试验 确认试验确认试验实验室诊断实验室诊断检测方法检测方法 临床意义临床意义 含义含义 CD4 + T 细胞计数衡量疾病进展程度与尚衡量疾病进展程度与尚存的免疫功能存的免疫功能血液中的血液中的 CD4+ T 淋巴淋巴细胞细胞 (细胞数细胞数/立方毫米立方毫米) 病毒载量 疾病进展速度疾病进展速度.快速进展的危险性快速进展的危险性.抗体窗口期的诊断抗体窗口期的诊断 血浆中血浆

17、中HIV病毒基因数病毒基因数量量 (拷贝数拷贝数/毫升毫升)病毒耐药基因型 确定流行株中与耐药性确定流行株中与耐药性有关的突变有关的突变病毒基因组中的突变点病毒基因组中的突变点 病毒耐药表型流行株的耐药性流行株的耐药性体外在抗逆转录病毒药体外在抗逆转录病毒药物存在时病毒复制能力物存在时病毒复制能力 HIV ELISA初步筛查初步筛查HIV感染感染宿主针对宿主针对HIV的抗体的抗体 Western杂交或免疫荧光染色 确证确证HIV感染感染 宿主针对宿主针对HIV的抗体的抗体HIV p24 抗原抗体窗口期抗体窗口期 测定测定HIV感感染染血液中血液中p24抗原抗原 检测的质量保证检测的质量保证开展

18、工作前开展工作前 人员培训人员培训； 实验室安全实验室安全； 样品收集样品收集； 试剂盒选择和可用性试剂盒选择和可用性； 有效期有效期； 贮存贮存。检测的质量保证检测的质量保证工作阶段工作阶段书面的操作程序手册；书面的操作程序手册；检测操作检测操作；正确使用试剂正确使用试剂；包含内对照包含内对照；质量监控质量监控。检测的质量保证检测的质量保证结果分析阶段结果分析阶段解释结果解释结果；抄录结果抄录结果；结果录入数据库；结果录入数据库；记录维护记录维护；回顾质控。回顾质控。检测结果的报告和处理检测结果的报告和处理 筛查试验呈阴性反应出具筛查试验呈阴性反应出具HIVHIV抗体阴性报抗体阴性报告。告。 筛查试验呈阳性反应，可出具筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗抗体待复查体待复查”报告，不能出阳性报告。同报告，不能