食用菌消毒与灭菌PPT课件

1、消毒与灭菌的概念 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的部分微生物。 灭菌：是指用物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。 防腐：是指用物理或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械的方法除去液体或气体中微生物的方法。第1页/共53页消毒、灭菌的方法 物理方法：热力灭菌、辐射灭菌、过滤除菌 化学方法：利用化学药品对器皿、工具等进行浸泡，对环境进行喷洒、熏蒸 生物方法：利用生物来抑制或杀灭有害生物，或利用生物制剂来抑制或杀灭微生物第2页/共53页 在食用菌生产过程中，必须对培养基、接种工具及其他用品、接种室、培养室等工作场所进行可靠的灭

2、菌或消毒。消毒、灭菌设备就是利用热力、射线等杀菌手段进行消毒或灭菌。目前，对培养基、工作衣等常用高压蒸气灭菌；金属接种工具采用火焰灭菌；玻璃器皿采用干热灭菌。而对一些不耐温、体积庞大的培养基和物品，常采用射线和紫外线等辐射灭菌。对热不稳定的生化药品如酶制剂、维生素的水溶液等，则采用过滤除菌。第3页/共53页第一节第一节 培养基质的消毒与灭菌培养基质的消毒与灭菌第4页/共53页培养基灭菌法：用热力或其他方法，使培养基达到培养基灭菌法：用热力或其他方法，使培养基达到无菌状态的方法。无菌状态的方法。 经过灭菌的培养基，要求养分不经过灭菌的培养基，要求养分不受破坏，并彻底灭菌。受破坏，并彻底灭菌。 这

3、就要根据其物理形态、容这就要根据其物理形态、容器和设备的不同，选用相应的方法灭菌。器和设备的不同，选用相应的方法灭菌。 高压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌沸水消毒法生物消毒法拌药消毒法第5页/共53页根据培养基的物理形态、容器和设备的不同，选用相应的方法灭菌。 1 1、固体培养基：可采用高压蒸汽或常压蒸汽灭菌。2 2、固化培养基：应采用高压蒸汽灭菌。3 3、液体培养基：瓶装液体培养基的灭菌方法与固化类型培养基相同；发酵罐的液体培养基是采用通高压蒸汽在罐内直接灭菌；含热不稳定物质的液体培养基，可采用过滤除菌法。第6页/共53页一、热力灭菌一、热力灭菌灭菌原理：利用高温使菌体蛋白质变性，从而使酶失去活性，达

4、到灭菌的目的。方式湿热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌沸水灭菌间歇灭菌火焰灭菌干热高温灭菌第7页/共53页1.高压蒸气灭菌 高压蒸汽灭菌是利用灭菌锅内的高压高温蒸汽进行灭菌高压蒸汽灭菌是利用灭菌锅内的高压高温蒸汽进行灭菌 压力指标：液体培养基或0.098 Mpa 30分钟 固体培养基：或0.147Mpa 2小时优点杀菌彻底，灭菌时间短，使用广泛缺点需要专门的设备，一次灭菌量少，成本高，过高的温度易破坏基质中的营养第8页/共53页第9页/共53页第10页/共53页第11页/共53页电热高压蒸汽灭菌锅电热高压蒸汽灭菌锅第12页/共53页高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅第13页/共53页蒸汽工作压力

5、与蒸汽温度的关系蒸汽工作压力与蒸汽温度的关系 高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：n，121；n，126；n，130；n，135； 常压蒸汽灭菌：常压蒸汽灭菌： 1atm ， 100 第14页/共53页2.常压灭菌常压灭菌：以自然压常压灭菌：以自然压力的蒸汽进行灭菌的力的蒸汽进行灭菌的方法。方法。灭菌时间：熟料灭菌时间：熟料100 624小时，半熟小时，半熟料料2小时。小时。第15页/共53页第16页/共53页第17页/共53页设计的主要技术要求是设计的主要技术要求是: : 灶体大小依生产规模而定，视需要配置灶体大小依生产规模而定，视需要配置1-21-2口口盛水锅。灶仓砌墙范围比锅的直径宽盛水锅。灶仓

6、砌墙范围比锅的直径宽20cm20cm左右，左右，灶仓内墙壁用水泥精细粉刷，灶顶圆拱形，以灶仓内墙壁用水泥精细粉刷，灶顶圆拱形，以使蒸汽冷凝水沿仓壁下流，防止打湿灭菌物品。使蒸汽冷凝水沿仓壁下流，防止打湿灭菌物品。q 灶仓内要有层架，以便分层装入灭菌物品。灶仓内要有层架，以便分层装入灭菌物品。q 具有湿度测试装置，一般放在灶体中部小门具有湿度测试装置，一般放在灶体中部小门中间。中间。q 具有加水装置及观察或测试灶内水量的装置。具有加水装置及观察或测试灶内水量的装置。第18页/共53页优点缺点灭菌灶可自行建造，容量大、结构简单、成本低灭菌时间长，能源消耗大，操作稍有失误就会有灭菌不彻底的情况发生第

7、19页/共53页3.常压间歇灭菌常压间歇灭菌指用常压蒸汽分阶段灭菌，中间间歇一指用常压蒸汽分阶段灭菌，中间间歇一定时间，连续灭菌几次才达到灭菌效果定时间，连续灭菌几次才达到灭菌效果的方法。用于没有高压蒸汽灭菌设备，的方法。用于没有高压蒸汽灭菌设备，或者对一些不宜用或者对一些不宜用100 以上高温灭菌以上高温灭菌的培养基。的培养基。方法方法 100 热蒸气热蒸气30 120分钟，分钟，20 25 条件培养条件培养24小时，诱发菌丝，再灭小时，诱发菌丝，再灭菌菌30分钟，连续分钟，连续3次。次。第20页/共53页4.沸水消毒法 将使用物品或培养基放入沸水中煮沸一段时间的消毒方法，多用在食用菌接种工

8、具、器材的消毒。可在几分钟内杀死不耐高温的微生物营养体；可在几分钟内杀死不耐高温的微生物营养体；第21页/共53页二.生物消毒法（发酵杀菌法）原理：根据巴氏消毒的原理，采用培养料堆制发酵的方法进行灭菌，即大多数微生物在60 -70 温度下，经过一段时间失活，从而达到消毒的目的。对蘑菇培养料后期的巴氏消毒，在对蘑菇培养料后期的巴氏消毒，在60606262下维持下维持4 47 7小时，不仅能杀死培养料中大部小时，不仅能杀死培养料中大部分有害的虫卵和杂菌，而且可提高蘑菇对培分有害的虫卵和杂菌，而且可提高蘑菇对培养料的选择性。养料的选择性。第22页/共53页三、拌药消毒 常用药物 0.1%的多菌灵，

9、0.1%甲基托布津，1 2%的生石灰。第23页/共53页灭菌效果的检测 抽取几支灭菌后的斜面试管或几瓶固体培养基，置于25-30 下培养5天左右，如培养基表面和内部无任何变化则说明灭菌效果好，可直接使用。若培养基表面发生杂菌污染，则说明灭菌失败，必须重新灭菌或处理掉。第24页/共53页第二节 接种与培养环境的消毒与灭菌一、化学药剂消毒灭菌1.氧化剂杀菌机理：通过强烈的氧化作用，破坏微生物的原生质或酶蛋白质结构。常用药物：2-5%高锰酸钾、5%漂白粉、0.5-1%过氧乙酸第25页/共53页 过氧乙酸：通过破坏微生物的蛋白质分子结构杀死微生物。 漂白粉：易与蛋白质或酶发生氧化作用使菌类致死。 高锰

10、酸钾：使微生物蛋白质变性，酶失活，导致菌体的芽胞死亡。 应用于环境及物品消毒。 第26页/共53页3.还原剂 甲醛：与微生物细胞蛋白质的氨基酸结合，引起蛋白质变性，使细胞原生质失去生理活性。应用：环境消毒4.表面活性剂杀菌机理是改变细胞透性。常用药物是乙醇 石炭酸 来苏儿 新洁尔灭等第27页/共53页 石炭酸（苯酚）：在高浓度下可裂解并穿透细胞壁，使菌体蛋白凝聚沉淀，在低浓度下可使细胞的主要酶系统失去活性，达到杀菌作用。 5%的水溶液喷洒消毒。 来苏水：1-2%溶液用于皮肤浸泡，3%用于喷洒消毒。第28页/共53页 5.其它消毒剂 石灰 硫磺 气雾消毒 石灰：提高培养料或环境的pH，抑制大多数

11、酵母菌及霉菌的生长繁殖而达到消毒目的。 硫磺：二氧化硫与水生成亚硫酸，亚硫酸能夺取菌体细胞中的氧，导致细胞代谢功能障碍而死，具有杀菌作用。用于空间密闭室内消毒。 气雾消毒：利用某些化学药物加热或燃烧产生的具有强烈杀菌作用的气体，对食用菌生产中常见的木霉、根霉、黄曲霉等杂菌有强烈杀灭作用。应用在对空间和物体表面进行消毒和灭菌。第29页/共53页二、室内空间杀菌1.紫外线杀菌 原理：利用辐射能量进行杀菌的方法。紫外线波长在260nm左右可导致细胞内核酸和酶发生光化学变化而使细胞死亡。另外，紫外线可使空气中氧气产生臭氧，臭氧也具有杀菌作用。 紫外线灯：杀菌有效范围半径内，时间30分钟。使用于空气和物

12、体表面消毒。 注意事项：2.药物薰蒸 甲醛和高锰酸钾多菌灵气雾消毒剂等第30页/共53页三、接种环境除菌n超净工作台和无菌箱第31页/共53页第32页/共53页接种箱是用木材与玻璃制成接种箱是用木材与玻璃制成密闭箱。有单人式或双人对接式。密闭箱。有单人式或双人对接式。接种箱前后斜面为玻璃窗，便于操接种箱前后斜面为玻璃窗，便于操作时观察，可开启，以便取放物品。作时观察，可开启，以便取放物品。玻璃窗下的木板有一对椭圆形开孔，玻璃窗下的木板有一对椭圆形开孔，操作孔装有白布袖套，一端固定在操作孔装有白布袖套，一端固定在圆孔上，另一端套口用松紧带箍住圆孔上，另一端套口用松紧带箍住操作者的手腕操作者的手腕

13、，以防杂菌进入。箱，以防杂菌进入。箱内可安装内可安装20W日光灯和日光灯和30W紫外线紫外线灯管。灯管。 第33页/共53页四、室外环境消毒n喷洒杀菌药液消毒甲醛多菌灵n喷洒杀虫药液杀虫敌百虫磷化铝溴氰菊脂等n地面撒石灰消毒 第34页/共53页消毒效果的检验 平板检验法：用培养食用菌的常规PDA培养基或肉汤琼脂培养基作成数个平板，灭菌后放入测试场所，将其中的平板打开15min、20min、30min后再盖好，另外1-2个不开盖作对照。然后放在30 下培养48小时检验有无杂菌生长。 斜面检验法：第35页/共53页 紫外线强度的检验：碘化钾法 紫外线可将碘离子氧化成碘，碘与淀粉变兰色。将浸有淀粉和

14、碘化钾溶液的试纸置于紫外灯下照射，根据颜色变化的深浅判断紫外线的强弱。 紫外线对空气消毒效果检验：分别在不同位置和不同高度放置平板培养基。按平板检验法检验空气中的杂菌，以判断紫外线的消毒效果。第36页/共53页一、分离材料的表面消毒 重金属盐类杀菌机理：带阳电极易与带负电荷的蛋白质结合，使细胞内蛋白质凝固变性，低浓度重金属离子与酶或某些活性物质的活性基团如硫氢基结合，可使需要硫氢基团的酶失去活性，致使菌体死亡。第三节 分离材料和皮肤表面的消毒第37页/共53页升汞 将子实体或菇木在0.1%的升汞溶液中浸泡2分钟，取出后，用无菌水反复冲洗。 0.1-0.2%的升汞溶液对玻璃器皿及非金属器械进行消

15、毒。第38页/共53页二、表面消毒杀灭 酒精 降低表面张力，改变细胞膜的透性及原生质的结构状态，干扰微生物的新陈代谢，使蛋白质凝固变性，抑制其迅速繁殖。 应用：75%的水溶液浸泡或涂擦物品表面，作用时间5-6分钟。第39页/共53页 新洁尔灭 改变细胞的渗透性，使菌体破裂、蛋白质变性，破坏菌体内的各种酶系统，影响细菌的新陈代谢。应用：0.25%的水溶液用于皮肤及物品表面消毒；0.1-0.5%的溶液进行喷洒，浸泡擦抹，用于环境消毒。特点：快速、彻底、高效第40页/共53页n墙壁、台面、菇床的表面消毒墙壁、台面、菇床的表面消毒 2% 5%的的 漂漂白粉洗刷或白粉洗刷或2% 3%的来苏儿、的来苏儿、

16、0.25%新洁尔新洁尔灭洗刷，生石灰涂洒。灭洗刷，生石灰涂洒。第41页/共53页三、干热灭菌 火焰灭菌法：将能耐高温的物品放在火焰上灼烧，使附在物体表面的微生物死亡的方法。 用于接种工具和试管口、瓶口的消毒杀菌 干热灭菌法：利用高温干热的空气使微生物死亡，从而达到灭菌的目的。用于固体材料的灭菌，如器皿的杀菌，160 170 ，2小时 。第42页/共53页其他灭菌法 XX射线、射线、射线等电离射线虽可用于灭菌，但因这类射线的产生需要昂射线等电离射线虽可用于灭菌，但因这类射线的产生需要昂贵的专用设备，无法在菌种生产中应用。贵的专用设备，无法在菌种生产中应用。第43页/共53页n微波灭菌技术微波灭菌

17、技术 近年，在蕈菌生产中，还出出了一些用新的方法近年，在蕈菌生产中，还出出了一些用新的方法进行灭菌的尝试。进行灭菌的尝试。 例如，波长例如，波长1000 m1000 mm1000 m1000 mm电磁波（微波）电磁波（微波）的电场对微生物细胞中的水分子能产生极化作的电场对微生物细胞中的水分子能产生极化作用，极化后的水分子会随微波电场方向的改变用，极化后的水分子会随微波电场方向的改变而转动，在转动过程中分于之间的高速摩擦产而转动，在转动过程中分于之间的高速摩擦产生热能，这种热能不同于外部加热，可在物体生热能，这种热能不同于外部加热，可在物体本身的温度权略微增加的情况下使微生物细胞本身的温度权略微

18、增加的情况下使微生物细胞暴破，从而达到灭菌的目的。暴破，从而达到灭菌的目的。第44页/共53页n电子消毒、灭菌技术电子消毒、灭菌技术 以以“高效臭氧发生管高效臭氧发生管”为核心部件的所谓电子消为核心部件的所谓电子消毒、灭菌器，利用高压放电原理，使空气中的氧毒、灭菌器，利用高压放电原理，使空气中的氧电离，生成游离的氧原于，并与空气中的氧结合电离，生成游离的氧原于，并与空气中的氧结合形成臭氧气体。臭氧是一种强氧化剂，具有强烈形成臭氧气体。臭氧是一种强氧化剂，具有强烈的氧化作用的臭氧迅速扩散并深入掺透到微生物的氧化作用的臭氧迅速扩散并深入掺透到微生物细胞壁内之后，能使菌体蛋白变性并破坏菌体的细胞壁内

19、之后，能使菌体蛋白变性并破坏菌体的酶系统，从而使微生物细胞失去活力。酶系统，从而使微生物细胞失去活力。 第45页/共53页n从理论上讲，上述灭菌方法均不无道理，但从理论上讲，上述灭菌方法均不无道理，但总的说来，这些新的消毒、灭菌方法尚处于总的说来，这些新的消毒、灭菌方法尚处于试验、探索阶段。一系列实际问题，例如，试验、探索阶段。一系列实际问题，例如，其实际使用效果及适合范围究竟如何，设备其实际使用效果及适合范围究竟如何，设备的结构及功能应作哪些改进等等，都有待在的结构及功能应作哪些改进等等，都有待在今后的实践中研究解决。今后的实践中研究解决。第46页/共53页消毒剂：消毒剂：具有杀菌能力的化学

20、药物叫做消毒剂，亦称具有杀菌能力的化学药物叫做消毒剂，亦称杀菌剂。食用菌生产中常用的消毒剂如下：杀菌剂。食用菌生产中常用的消毒剂如下：q乙醇乙醇( (酒精酒精) ) 常用浓度：常用浓度：7070 q福尔马林福尔马林(40(40的甲醛水溶液的甲醛水溶液) )q苯酚苯酚( (石炭酸石炭酸) ) 5 5 q煤酚皂溶液煤酚皂溶液( (来苏尔来苏尔) )1 13 3 q新洁尔灭新洁尔灭0.250.25 q波尔多液波尔多液q漂白粉漂白粉( (次氯酸钙次氯酸钙) ) 2 25 5 n消毒剂一般只对细菌的繁殖体有效，而对于芽孢很消毒剂一般只对细菌的繁殖体有效，而对于芽孢很少有杀死作用。少有杀死作用。 q硫磺硫

21、磺q高锰酸钾高锰酸钾 q过氧化氢过氧化氢( (双氧水）双氧水）q过氧乙酸过氧乙酸( (过氧醋酸过氧醋酸) ) （喷雾），（喷雾），5ml/m （熏蒸）熏蒸） 第47页/共53页消毒剂名称消毒剂名称用途用途用量和使用方用量和使用方法法注意事项注意事项甲醛溶液甲醛溶液（HCHOHCHO）FormalinFormalin空间或表空间或表面消面消毒毒熏蒸熏蒸8 81010ml/mml/m3 3喷雾喷雾2%2%溶液溶液1 1有白色沉淀时加几滴硫酸有白色沉淀时加几滴硫酸溶解溶解2 2注意皮肤和眼睛的防护注意皮肤和眼睛的防护3 3先用来苏尔溶液空间喷雾先用来苏尔溶液空间喷雾再用甲醛熏蒸效果更好再用甲醛熏蒸效

22、果更好硫磺（硫磺（S S）sulphursulphur空间消毒空间消毒151520 20 g/mg/m3 3燃燃烧熏蒸烧熏蒸1 1消毒空间时先喷水预湿消毒空间时先喷水预湿2 2金属用具易锈蚀应防护金属用具易锈蚀应防护酒精酒精（C C2 2H H5 5OHOH）AlcoholAlcohol手及器皿手及器皿表面表面消毒消毒70%75%70%75%易燃，注意按实验室操作方法易燃，注意按实验室操作方法使用使用常用消毒剂使用方法常用消毒剂使用方法第48页/共53页高锰酸钾高锰酸钾（KMnOKMnO4 4）potassium potassium permangpermanganateanate1 1甲醛熏

23、蒸助甲醛熏蒸助蒸剂蒸剂2 2用品器具表用品器具表面消毒面消毒1 15 5 ml/mml/m3 32 20.1%0.2%0.1%0.2%水溶液水溶液随用随取随配随用随取随配来苏尔来苏尔（C C6 6H H4 4CHCH3 3OHOH）lysollysol手和器皿表面手和器皿表面消毒，空消毒，空间喷雾间喷雾1 1浸泡容器用浸泡容器用3%3%水溶液水溶液时间时间1 1h h2 2洗手和空间洗手和空间喷雾用喷雾用2%2%水溶液水溶液亦称煤酚皂亦称煤酚皂新洁尔灭新洁尔灭（C C2222H H4040BrNBrN）Bromo-Bromo-geramingeraminumum皮肤和不耐热皮肤和不耐热的器皿表

24、的器皿表面消毒面消毒0.1%0.25%0.1%0.25%水水溶液溶液亦称苯扎溴铵，系阳亦称苯扎溴铵，系阳离子表面活性剂。离子表面活性剂。避免与阴离子表避免与阴离子表面活性剂（如肥面活性剂（如肥皂、合成洗涤剂皂、合成洗涤剂等）合用等）合用第49页/共53页洗必泰洗必泰（C C1212H H3030ClCl2 2N N1010）chlorhexidinchlorhexidin皮肤和不耐热皮肤和不耐热的器皿表的器皿表面消毒面消毒0.5%1.0%0.5%1.0%水溶水溶液液亦称氯已定，系阳离子亦称氯已定，系阳离子表面活性剂。避免表面活性剂。避免与阴离子表面活性与阴离子表面活性剂（如肥皂、合成剂（如肥皂、合成洗涤剂等）合用洗涤剂等）合用石碳酸石碳酸（C C6 6H H5 5OHOH）phenolphenol空间和表面消空间和表面消毒毒5%5%水溶液水溶液亦称苯酚，对皮肤有腐亦称苯酚，对皮肤有腐蚀作用蚀作用过氧乙酸过氧乙酸（CHCH3 3COOOHCOOOH）Peracetic Peracetic AcidAcid1 1手和器械手和器械表面消毒表面消毒2 2空间消毒空间消毒（优于甲（优于甲醛）醛）1