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1、第一页,共33页幻灯片第二页,共33页幻灯片第三页,共33页幻灯片第四页,共33页幻灯片第五页,共33页幻灯片已分化的细胞导入病毒基因Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4病毒逆转录胚胎干细胞培养条件和筛选Ips细胞第六页,共33页幻灯片第七页,共33页幻灯片第八页,共33页幻灯片第九页,共33页幻灯片第十页,共33页幻灯片第十一页,共33页幻灯片第十二页,共33页幻灯片第十三页,共33页幻灯片第十四页,共33页幻灯片第十五页,共33页幻灯片第十六页,共33页幻灯片第十七页,共33页幻灯片病毒慢病毒,逆转录病毒:共同缺陷1.病毒的随机插入及病毒表达不可调控2。病毒如果不能沉默就会导致外源
2、基因的持续表达3.病毒的重新激活会导致肿瘤相关基因c-Mycj及Klf4的重新表达。可诱导病毒表达系统:这个系统无法避免病毒对宿主细胞基因组的随机组合多顺反子及剪切体系:减少病毒的插入位点,保障所有转录因子在同一受染细胞内的同时表达,且表达量可以实现一定的平衡。Cre-LoxP重组剪切系统:实现对外源基因表达的调控及切除外源的原癌基因腺病毒:避免病毒载体插入宿主细胞基因组可能引起的基因突变等后果。但是编程效率低。第十八页,共33页幻灯片质粒普通质粒载体:需要反复多次的质粒转染来实现质粒携带基因的持续表达,效率比逆转录病毒载体低。转座子:能够携带较的整合片段,可以通过转座子酶切除转座子携带的外源
3、基因。附着体:提高重编程效率,可以获得不含质粒的宿主细胞。第十九页,共33页幻灯片蛋白质:安全性高,穿越细胞膜的能力有限。小分子化合物:有可能带来细胞毒性和无法检测得微小变化microRNA:替代了原癌基因,提高了编程效率IPS第二十页,共33页幻灯片第二十一页,共33页幻灯片第二十二页,共33页幻灯片第二十三页,共33页幻灯片第二十四页,共33页幻灯片第二十五页,共33页幻灯片信号通路TGF-P信号通路MEK和GSK3信号通路Wnt信号通路是维持人类ES细胞多能性的主要信号通路。MEK信号通路:促进肝细胞分化。GSK3信号通路:抑制细胞增值。提高无c-Myc参与的OSK介导的IPS的效率。第二十六页,共33页幻灯片第二十七页,共33页幻灯片第二十八页,共33页幻灯片第二十九页,共33页幻灯片第三十页,共33页幻灯片第
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