细胞培养的设施与基本条件

1、第一章第一章 细胞培养的设施与基本条件细胞培养的设施与基本条件1.细胞工程实验室的设置细胞工程实验室的设置2.常用的仪器与设备常用的仪器与设备3.实验室的生物安全实验室的生物安全 动物细胞工程实验室的设置动物细胞工程实验室的设置 植物细胞工程实验室的设置植物细胞工程实验室的设置 无菌操作室无菌操作室：更衣间、缓冲间、操作间 培养与观察室：培养与观察室：培养箱、显微镜 制备室：制备室：天平、PH计、磁力搅拌器 储藏室：储藏室：冰箱、液氮罐、储物柜 清洗和灭菌室：清洗和灭菌室：消毒柜、干燥箱、纯水设备 无菌室操作室：无菌室操作室：超净工作台或接种箱 培养室培养室：培养架、摇床 鉴定室：鉴定室：各种

2、显微镜 清洗室：清洗室：干燥箱、清洗器械 灭菌室：灭菌室：灭菌装置、过滤器 制备室：制备室：冰箱、药品柜、器械柜 驯化移植室：驯化移植室：温室、弥雾装置、荫棚、移植床、 塑料布、粗沙等温度：温度：252522光照：散射光光照：散射光湿度：湿度：50%50% 动物与植物细胞工程实验动物与植物细胞工程实验 室通用的仪器设备室通用的仪器设备 动物细胞工程实验室的常动物细胞工程实验室的常用仪器设备用仪器设备 植物细胞工程实验室的常植物细胞工程实验室的常用仪器设备用仪器设备 超净工作台超净工作台 倒置显微镜倒置显微镜 电热干燥箱电热干燥箱 水纯化装置水纯化装置 冰箱冰箱 压力蒸汽消毒器压力蒸汽消毒器 细

3、胞记数板和电子细胞记数仪细胞记数板和电子细胞记数仪 过滤除菌装置过滤除菌装置 离心机（离心管）离心机（离心管） 移液管和吸管移液管和吸管 移液移液器器 天平天平n超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 烘干和干热灭菌玻璃烘干和干热灭菌玻璃器皿器皿 100度以下时再打度以下时再打开箱门开箱门 金属器械、塑料制金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥品、橡胶等不能

4、在干燥箱内消毒箱内消毒电子细胞计数仪电子细胞计数仪细胞记数板细胞记数板培养箱培养箱显微操作仪显微操作仪细胞融合仪细胞融合仪细胞冷冻储存器细胞冷冻储存器培养用器皿培养用器皿手术器械手术器械CO2培养箱设定的条件为培养箱设定的条件为37 ，5CO2 。 使用使用CO2培养箱培养细胞时应注意培养箱培养细胞时应注意的问题：的问题： 用螺旋口瓶培养细胞时，需将用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。瓶盖微松，以保证通气。 保持培养箱内空气干净。定期保持培养箱内空气干净。定期消毒（消毒（90 ，14 h)。 箱内灭菌蒸馏水箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避免培养水槽中以

5、保持箱内湿度，避免培养液蒸发。液蒸发。显微操作显微操作/注射仪注射仪 ：细胞核移植、细胞核移植、染色体操作、染色体操作、显微注射、显微注射、胚胎切割等胚胎切割等细胞电融合仪细胞电融合仪程序化冷冻仪程序化冷冻仪 液氮罐液氮罐光照培养箱光照培养箱人工气候室人工气候室摇床摇床培养瓶培养瓶人工气候室人工气候室根据密封程度分：根据密封程度分： P1 、 P2 、 P3 、 P4四个等级四个等级（P为为protect的缩写）的缩写）三不：培养物不被污染三不：培养物不被污染 实验人员不被污染实验人员不被污染 环境不被污染环境不被污染SARS实验室实验室生物安全一级生物安全一级(BSL-1)：适合于非常熟悉的

6、病源，：适合于非常熟悉的病源，不会经常引发健康成人疾病，对实验人员和环境不会经常引发健康成人疾病，对实验人员和环境潜在危险小。一般也不使用特殊的遏制设备和设潜在危险小。一般也不使用特殊的遏制设备和设施。施。 生物安全二级生物安全二级(BSL2)：适合于对人和环境有中度：适合于对人和环境有中度潜在危险的病源，应在生物安全柜中或其它物理潜在危险的病源，应在生物安全柜中或其它物理遏制设备中进行。遏制设备中进行。 生物安全三级生物安全三级(BSL3)：该会引发严重的、可能致：该会引发严重的、可能致死的疾病的病源。在生物安全柜或其他物理遏制死的疾病的病源。在生物安全柜或其他物理遏制装置中进行，或由穿戴合

7、适防护服及设施的实验装置中进行，或由穿戴合适防护服及设施的实验人员进行。实验室经过特殊设计和施工。人员进行。实验室经过特殊设计和施工。 n生物安全四级生物安全四级(BSL4)：处理特别危险的传染源：处理特别危险的传染源Pneumococcus: 肺炎球菌肺炎球菌Salmonella：沙门氏菌沙门氏菌Hepatitis: 肝炎肝炎Lyme Disease：莱姆病莱姆病Influenza: 流感流感Ebola: 埃博拉埃博拉Lassa：拉沙热拉沙热Hanta virus: 汉坦病毒汉坦病毒n无菌条件无菌条件：净化工作室，高效过滤器，生物安全柜，：净化工作室，高效过滤器，生物安全柜，n 超净工作台，

8、紫外灯，电热干燥箱，滤器，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，滤器，n 高压灭菌器，抗生素高压灭菌器，抗生素 n细胞生长条件细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， nCO2培养箱，培养基，血清培养箱，培养基，血清n细胞检测条件细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪：倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器，微孔板震荡器，n 高速离心机，移液器高速离心机，移液器 n细胞保存条件细胞保存条件：液氮罐：液氮罐n实验室安全实验室安全：生物实验室安全，：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全实验室安全Summary：细胞培养的基本条件Anthrax: 炭疽炭疽Typhus：斑疹伤寒斑疹伤寒HIV:培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角倒置显微镜倒置显微镜超低温冰箱超低温冰箱无菌培养室无菌培养室光照培养室光照培养室菌种培养