吉林大学生物实验三

1、1.学习斯氏离体蛙心灌流法。学习斯氏离体蛙心灌流法。2.了解心肌的生理特性。了解心肌的生理特性。3.观察观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素及肾上腺素 (Adr)，乙酰胆碱，乙酰胆碱(ACh) 等对离体心脏的影响。等对离体心脏的影响。【动物与器材【动物与器材】 蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、滴管、培养皿、污物缸、采集系统、张力传感器、滴管、培养皿、污物缸、纱布、棉线、任氏液、纱布、棉线、任氏液、0.65% NaCl、5% NaCl、2%

2、CaCl2、1% KCl、1:5000肾上腺、肾上腺、1:10000乙酰乙酰胆碱、胆碱、300U/ml肝素。肝素。 【基本原理【基本原理】 心肌具有自动节律收缩的特性，可用人工灌流的心肌具有自动节律收缩的特性，可用人工灌流的方法，观察心脏活动的规律及特点，还可用灌流液成分方法，观察心脏活动的规律及特点，还可用灌流液成分（ Na+、K+、Ca2+、肾上腺素、乙酰胆碱、肾上腺素、乙酰胆碱）的改变对离体）的改变对离体心脏活动的影响。心脏活动的影响。心肌收缩原理心肌收缩原理 乙酰胆碱与心肌细胞膜乙酰胆碱与心肌细胞膜M受体结合，提高心肌细胞膜受体结合，提高心肌细胞膜K+通通道的通透性，促使道的通透性，促

3、使K+外流，将引起：外流，将引起：窦房结细胞复极时窦房结细胞复极时K+外流增多，最大复极电位绝对值增大；衰减过外流增多，最大复极电位绝对值增大；衰减过程减弱，自动除极速度减慢。程减弱，自动除极速度减慢。复极过程中复极过程中K+外流增加，动作电位外流增加，动作电位23期短，期短，Ca2+进人细胞内减少，进人细胞内减少，使心肌收缩减弱；另一方面乙酰胆碱可直接抑制使心肌收缩减弱；另一方面乙酰胆碱可直接抑制Ca2+通道，减少通道，减少Ca2+内流，进而使心肌收缩减弱。内流，进而使心肌收缩减弱。 其机理为肾上腺素与心肌细胞膜的其机理为肾上腺素与心肌细胞膜的受体结合，提高心肌细胞受体结合，提高心肌细胞和肌

4、浆网膜和肌浆网膜Ca2+通透性导致肌浆中通透性导致肌浆中Ca2+浓度增高，使心肌改缩增浓度增高，使心肌改缩增强。强。 另外，肾上腺素还有降低肌钙蛋白与另外，肾上腺素还有降低肌钙蛋白与Ca2+亲和力，促使肌钙蛋亲和力，促使肌钙蛋白对白对Ca2+的释放速率增加；提高肌浆网膜摄取的释放速率增加；提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度，刺激的速度，刺激Na+- Ca2+交换使复极期向细胞外排出交换使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速的作用加速,使心肌舒张使心肌舒张速度增快，整个舒张过程明显加强。速度增快，整个舒张过程明显加强。 【方法与步骤【方法与步骤】1. 双毁髓处死蟾蜍，并暴露心脏。双毁髓处死蟾蜍，并暴

5、露心脏。2. 心脏套管由动脉圆锥插入心室内。心脏套管由动脉圆锥插入心室内。3. 将离体心脏套管固定在支架上，连接实验装置。将离体心脏套管固定在支架上，连接实验装置。4. (1) 记录正常心搏曲线。记录正常心搏曲线。 (2) 改用改用0.65%NaCl 溶液灌流溶液灌流, 观察心搏变化。观察心搏变化。 (3) 加入加入2-6滴滴5%NaCl 溶液溶液,观察心搏曲线变化。观察心搏曲线变化。 (4) 加入加入1-3滴滴1%CaCl2 溶液溶液,观察心搏曲线变化。观察心搏曲线变化。 (5) 加入加入1-2滴滴1%KCl 溶液溶液,观察心搏曲线变化。观察心搏曲线变化。 (6) 加入加入1-2滴滴Adr(1:5000) 后观察心搏曲线变化。后观察心搏曲线变化。 (7) 加入加入1-2滴滴Ach(1:10000) 后观察心搏曲线变化。后观察心搏曲线变化。4. 整理实验记录。整理实验记录。【注意事项【注意事项】1. 套管经由左动脉插入动脉圆锥后要调整姿态后再套管经由左动脉插入动脉圆锥后要调整姿态后再