HbA1c基础知识培训ppt课件

1、糖化血红蛋白的根底知识培训HbA1c定义 HbA1c: 葡萄糖与血红蛋白链氨基酸末端的6个氨基酸结合产生的一种特定的糖化血红蛋白血红蛋白被糖化后，氨基酸末端所带负电荷会添加 HbA0：没有结合葡萄糖的血红蛋白链氨基酸末端的6个氨基酸 HbA1c以百分比表示，即以和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例正常参考范围：4%-6%NGSP/DCCT标化的方法糖化血红蛋白-血红蛋白的糖基化产物葡萄糖进入红细胞，在内部与血红蛋青丝生反响血红蛋白葡萄糖红细胞糖化血红蛋白的生物合成过程两步血红蛋白葡萄糖中间产物-LA1c Schiff碱HbA1c第一部：快速反响，生成不稳定A1cLA1c第二步：缓慢反响，

2、生成稳定的A1cHbA1c糖化和非糖化的血红蛋白HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA()HbA2()HbF()95%2%1-3.5%成人血红蛋白分三种HbA为主要成人Hb非糖化Hb糖化Hb6-8%87-89%血红蛋白HbA1c是如何计算的？A1c%=A1c/A0+HbA1离子交换色谱所分别的组分解释非糖尿病样本Hb的组成 % of Hb Hb与糖类的结合HbA1a 1% HbA1与1,6-二磷酸果糖结合而成 HbA1b 1% 丙酮酸与链氨基末端缬氨酸结合而成 HbF 1% 胎儿血红蛋白LA1c 1% 血红蛋白形成HbA1c之前的中间产物HbA1c 46% 链氨基酸端与葡萄糖

3、结合的产物HbA0 90% 非糖化血红蛋白 胎儿血红蛋白在胎儿及出生6个月以内的新生儿体内为高浓度，6个月后根本降为成人程度妇产科 HbA1c主要用于糖尿病妊娠的筛查色谱图举例 HbA1a & HbA1b HbA的次要组分LA1c (希夫碱) 和氨甲基乙酰化的 Hb HbA1c A0总面积为 100万-500万 A1c 结果小结什么是HbA1c和HbA0？A1c被糖化后什么电荷添加了？为什么糖化血红蛋白在A0峰之前被洗脱下来？丈量糖化血红蛋白为什么要先对样本溶血？HbA1c是如何计算的？成人血红蛋白包括哪几种？HbF是什么？浓度高时能否会对A1c呵斥干扰？为什么？伯乐的糖化试剂能报告HbF吗？

4、为什么？糖化的血红蛋白包括哪几种？HbA1c实验室检测方法常见的HbA1c检测方法 主要有三种检测方法: 1.离子交换高压液相色谱HPLC 直接分别HbA1c2.硼酸亲和高压液相色谱 检测产物为总糖化血红蛋白3. 免疫法 检测产物为HbA1c各检测方法的精细度 方法 精细度 电泳 +免疫法 +低压液相色谱LPLC +高压液相色谱HPLC + 各检测方法的分析物HbA (a2b2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成分糖化成分离子交换色谱和免疫法检测物硼酸亲和色谱检测物离子交换HPLC检测糖化血红蛋白HbA1c的金规范方法 DCCT研讨中独一所采用的HbA1c检测方法 NGSP

5、规范化的参考方法 检测原理： 基于HbA1c 与其它血红蛋白组分所带电荷不同，在一定的缓冲液离子强度下可与分析柱树脂外表偶联的离子基团有不同程度的结合，从而将HbA1c与其它组分(HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0) 区分开而得到分别。离子交换HPLC检测原理色谱图的横坐标是时间，纵坐标是信号强度，反映Hb各分析峰浓度的高低被校准的峰被阴影化被校准的峰被阴影化离子交换HPLC的特点采用离子交换原理基于HPLC的平台HPLC方法的试剂组成包括：分析柱、缓冲液、校准品采用分析柱内填充的离子交换树脂作为固定相，树脂上面偶联了带电荷基团以可构成不同离子强度洗脱梯度的缓冲试剂作为流动相。溯源性由

6、试剂盒配套的校准品保证分别效果的影响要素分析柱内的填充物颗粒越小，分别效果越好，速度越慢分析柱柱长越长，分别效果越好，速度越慢离子交换HPLC的优缺陷优点： 1.全自动 2.结果准确，可靠 分析物为HbA1c。 高分辨率方法可同时区分常见血红蛋白变异体，给临床医生已额外的医疗提示 3. 精细度好 CV5%只报HbA1c一个数值，不能检测血红蛋白变异体高血红蛋白F样本的HbA1c检测结果偏低严重的黄疸和高脂血影响比色结果国产糖化试剂的非规范化问题小结糖化血红蛋白的主要检测方法有什么？检测产物分别是什么？HPLC的中文全称是什么？HbA1c检测的金规范方法是？为什么？离子交换HPLC的检测原理是基

7、于什么的不同？检测试剂应该包括哪些主要的组分？分析柱中填充的是什么？上面偶联了什么？不同缓冲液的区别是什么？不同离子交换HPLC方法的分辨率一样吗？分辨率的关键影响要素是什么？糖化血红蛋白检测结果的溯源性由哪种试剂保证？伯乐糖化产品的色谱图横坐标是什么？纵坐标是什么？硼酸亲和色谱法的检测原理是基于什么？色谱图有几个峰？分别是什么？硼酸亲和色谱法是怎样检测HbA1c的？免疫法检测糖化血红蛋白的原理是基于什么反响？国产免疫法试剂的缺陷有哪些？HbA1c实验室检测干扰要素常见检测干扰要素非方法学特异的干扰要素改动红细胞寿命的生理条件可影响 HbA1c结果导致检测结果假性偏低 镰刀细胞性贫血和溶血性贫

8、血 维他命 C和 E 抑制糖化作用导致检测结果假性偏高 铁缺乏性贫血，脾切除术后 真性红细胞增多症高原地域妊娠期 Hb浓度偏低，HbA1c比正常人偏低 方法学特异的干扰要素血红蛋白变异体 (如.HbS, HbC， HbD, HbE)血红蛋白衍生物 (乙酰化、甲酰化衍生物等) 长期服用阿斯匹林的病人，体内乙酰化Hb高，结果偏高 肾衰病人的氨甲酰基化，导致结果偏高Schiff碱A1c中间产物 某些血糖浓度急剧变化的1型糖尿病人，Schiff碱升高，胎儿血红蛋白HbF严重的黄疸、高血脂血红蛋白变异体的发生率全世界曾经发现了超越一千种血红蛋白变异体全球的血红蛋白变异体发生率的最新数据是7%*非洲裔美国

9、人：HbS 7.8%；HbC 2.3%1988年,2.5 ,河南*2001年,3.2 ,丝绸之路*云南：4%云南省的阿昌族HbE的发病率为41.2%*Kohne E. Hemoglobinopathies: clinical manifestations, diagnosis, and treatment. 1. Dtsch Arztebl Int. 2021;108(31-32):532-540.*河南省异常血红蛋白的调查与化学构造的分析研讨,新乡医学院学报, 1988, (02) 9-12*中国丝绸之路地域血红蛋白病的遗传流行病学的特点，人类学学报，2001，V20变异体对HbA1c准确性

10、的影响Ross J.Molinaro,Targeting HbA1c:standardization and clinical laboratory measurement. MLO Jan,2021,血红蛋白变异体对HbA1c结果准确性的影响对部分方法的检测结果准确性有影响例：A0后有变异体的糖尿病人样本，HbF正常G8规范方式试剂的检测结果偏低1%G8 Variant 方式试剂1.6分钟/testG8 规范方式试剂1.0分钟/test血红蛋白变异体与血糖监控血红蛋白变异领会影响红细胞的寿命，红细胞的寿命会影响糖化血红蛋白的生成这些病人或许应该有不同的糖化血红蛋白的监控时间或者改用其他目的来

11、评价血糖小结影响HbA1c检测结果的非方法学特异的干扰要素影响HbA1c检测的方法学特异的干扰要素有哪些？变异体与A0没有别分开的情况下会导致检测结果偏高还是偏低？为什么？变异体与A1c没有别分开的情况下会导致检测结果偏高还是偏低？为什么？血红蛋白变异领会经过两个方面影响糖化血红蛋白，请详述。临床上对于有血红蛋白变异体的病人有什么建议？实验室应该怎样满足临床的这一需求？糖化血红蛋白实验室检测指南的要求2021年中国糖尿病杂志8月刊分析系统的要求测定方法要求溯源到IFCC参考方法，如NGSP认证方法 NGSP认证的有效期是1年2. 实验室要知晓所选分析系统能够存在的干扰要素3. POCT方法的准

12、确性不能满足临床要求，目前不能用于糖尿病的诊断中国三级医院的实验室检测情况数据统计于NCCL历年室间质评数据采用NGSP规范化方法的实验室占比81%HbA1cTotalGHBHbA1在DCCT和UKPD结果发表之前，美国有800个实验室在做A1c检测，CAP实验调查显示在不同的实验室，用不同的检测方法得出的A1c结果存有宏大的差别。HbA1c检测的规范化美国从1996年起开展国家糖化血红蛋白规范化方案NGSP，在HbA1c的检测值一致性方面获得了宏大胜利在NGSP的中心实验室所采用的参考方法是 离子交换HPLC NGSP 由指点委员会和实验室网络组成。实验室网络包括一级中心参考实验室CPRL、

13、一级参考实验室PRL和二级参考实验室SRL目的: 1. 糖化血红蛋白检测工程实现规范化2. 以使各临床实验室的检测结果与DCCT的报告结果具有可比性( 该DCCT实验建立了平均血糖与糖尿病并发症的发病风险之间的关系) 临床实验室NGSP 网络 厂商 校准品1 新颖血NGSP 程序(精细度与偏向) 认证2 新颖血才干比对测试3 新颖血NGSP规范化对A1c检测的奉献从无序到有序2021年调查显示2000多家CAP实验室间运用不同的检测方法的CVs在1.3-7.1%之间，基于A1c检测结果曾经可以有效的规范化 IFCC规范化2002年IFCC发表文件，正式引荐 HbA1c检测的参考

14、方法为HPLC-MS(质谱)或HPLC-CE(毛细管电泳)校准品为纯化的 HbAo 和 HbA1c 混合物，共 6 个浓度室内CV0.472.07%；室间CV1.352.27%但是，NGSP和IFCC方法检测HbA1c值存在1%-2%的差别IFCC%HbA1c2.13.2 4.3 5.4 6.4 7.5 8.6 9.710.7 NGSP%HbA1c456789101112偏向 1.9 1.8 1.7 1.6 1.6 1.5 1.4 1.3 1.3非糖尿病范围控制目的需采取治疗措施各个规范与IFCC之间的转换JDS/JSCC% = 0.927*IFCC% + 1.73NGSP% = 0.915

15、* IFCC% + 2.15Sweden% = 0.989 * IFCC% + 0.88IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.09.610.811.6NGSP%HbA1c4681012HbA1c的检测必需在世界范围内规范化，包括参考系统和数值报告 IFCC的参考系统是独一的规范化参考系统HbA1c以IFCC单位(mmol/mol)以及转换的NGSP units (%)报告，运用IFCC-NGSP换算公式 需求确保基层糖尿病容易获得IFCC和NGSP转换公式 杂志编辑和出版物建议采用SI (IFCC) 和NGSP双重单位报告HbA1c 糖化血红蛋白的规范化

16、称谓为HbA1c，在指南或教育资料中也可以简写为A1C 2021年HbA1c规范化第二次全球共识 (ADA、EASD、IDF、IFCC和ISPAD) 2021 in Annals of Clinical Biochemistry, Clinical Chemistry, Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, Diabetes Care, Diabetes Research and Clinical Practice, Diabetologia, Diabetic Medicine and Pediatric Diabetes. NGSP = 0

17、.09148 * IFCC + 2.152 NGSP和IFCC之间的转换NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152 糖化血红蛋白HbA1c HbA1c的临床运用与实验室检测相符相承实验室检测规范化血糖监控目的 糖尿病筛查与诊断19932021分析系统性能目的要求报告结果：以HbA1c相当于HbA1c报告结果，由于只需这一个分析工程才有评价并发症发生的优良数据库。精细度：室内CV3%, 以小于2%为宜；测定质量目的：0.5% HbA1c准确度：与可接受参考值的差值在0.5%HbA1c范围内准确度验证方法： 1参与室间质评活动 2检测有证参考物质； 3与运转经过认证系统的有资质实验

18、室的测定结果进展比对留意：没有直接的证据显示其它检查的数据与糖尿病长期并发症风险有关(例如：总糖化血红蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白)实验室不精细度对检测结果变异性的影响6.5%的 HbA1c在不同分析不精细度程度下的95.5%离散程度不同室内CV对 A1C 分析的影响95%的可信区间CV %6.0% A1C6.5% A1C7.0% A1C25.76-6.246.24 - 6.766.72 - 7.2835.64-6.366.11 - 6.896.58 - 7.4255.4-6.65.85 7.156.3 7.7正常人和病人无法区分血糖控制好坏无法区分HbA1c结果不准确对临床医生判别的影响正常值与医学决议程度差值小HbA1c