职业院校技能大赛“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程

1、职业院校技能大赛 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程一、赛项名称赛项编号：GZ-108赛项名称：鸡新城疫 HI 抗体水平测定。英语翻译： Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus赛项组别：高职组赛项归属产业：农林牧渔大类二、竞赛目的本赛项考核的核心技能是鸡的采血方法、 1%鸡红细胞悬液配制、红血球凝集（ hemagglutination，HA）试验操作与结果判定、四个血凝单位（ HAU）病毒溶液配制、红血球凝集抑制（hemagglutination inhibiion，HI）试验操作与结果判定、HI 抗

2、体滴度报告撰写等技能。本赛项考核的核心知识是动物微生物学、兽医免疫学、兽医临床诊疗技术、动物传染病学等专业课程理论知识。本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台， 加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医等专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。三、竞赛内容该项目由两人配合完成，按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放；之后进行采血、离心、洗涤，配制 1% 鸡红细胞悬液；用微量移液器在 96 孔 V 形微量反应

3、板上进行红血球凝集试验，测定新城疫标准抗原的血凝价；根据血凝试验测定的新城疫标准抗原的血凝效价，配制 4 个血凝单位病毒溶液； 进行被检血清的血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取 HI 抗体滴度结果，并完成试验相关记录和测定结果报告。四、竞赛方式本赛项为团体赛。每组参赛学生 2 名，比赛由 2 名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生。每组选手限 2 名指导教师，指导教师须为本校专兼职教师。五、竞赛流程本项目竞赛日程与流程安排见表 1。3 月 29日时间14：0014:3014:3015:0015:0016:007:00主要工作地点7:303 月 30日7:

4、458:0011:0011:0011:3012:3012:4513:0016:0016:0016:3016:3017:30报到场次抽签领队会议全体参赛选手比赛检录及参赛编号抽签开始第一场比赛工位号抽签，选手进入技能比赛场，按工位号就位技能裁判组成员进入技能比赛场选手操作，裁判评分裁判组评分汇总第二场比赛工位号抽签，选手进入技能比赛场，按工位号就位技能裁判组成员进入技能比赛场选手操作，裁判评分裁判组评分汇总成绩汇总、公布表 1 项目竞赛日程安排表六、竞赛试题本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的竞赛内容。七、竞赛规则1.2018 年在籍全日制高职学生均

5、可报名参赛（五年制高职学生须为四、五年级学生，本科院校高职学生也可报名参赛），选手年龄限制在 25 周岁（当年）以下，年龄截止时间为 2018 年 3 月 31 日。参赛选手必须持本人身份证和参赛证参加操作技能考核。在往届全国职业院校技能大赛中获一等奖的选手，不能参加今年同一赛项比赛。2.参赛选手和指导教师报名获得确认后不得随意更换。3.参赛选手出场顺序、位置、比赛所用工具等均由抽签决定，不得擅自变更、调整。参赛选手提前 15 分钟检录进入赛场，按照抽签工位号参加比赛。迟到15 分钟以上者取消比赛资格；开赛15 分钟后，选手方可离开赛场。选手进入赛场后须检查实验用品是否齐全，如有疑问向裁判询问

6、。选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场，如有特殊情况，需经裁判同意，选手若需休息、饮水或去洗手间等，耗用时间计算在比赛时间内。选手应在竞赛试卷或实物标签上填写比赛号。试卷（或实物标签）上不得有任何暗示选手身份的记号和符号，否则取消成绩。比赛过程中如果动物出现死亡等意外情况，举手示意，可更换实验动物。各参赛选手要按照规定做好详细记录；判定试验结果时要举手示意裁判。竞赛在规定时间结束时，选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延。结束后举手示意，由志愿者记录结束时间，经确认后离开比赛现场。八、竞赛环境竞赛赛场在传染病实验室进行，赛场面积达 100 m2，赛场照明、控温良好，能提供稳定的水、电。赛场内设有

7、12 张相对独立的工作台位（1.5m0.6m），每组选手根据抽签分为不同实验台，每个实验台标明编号。为了保证赛场免受干扰，赛场不开放，不允许除裁判、选手以外的任何人员进入操作比赛区内。比赛期间，不允许相关人员与参赛选手和裁判员进行任何形式的交流。比赛期间不允许相关人员观赛。 九、技术规范本赛项的专业教育教学要求为：实验器材摆放有序，能合理进行 相关标识；熟练掌握鸡的采血方法，要求采血方法规范，采血量适量； 掌握离心机的使用方法，要求离心机使用规范，转速适宜；掌握 1% 鸡红细胞悬液的配制方法，要求压积红细胞吸取正确、洗涤次数适宜； 掌握微量移液器的使用方法，要求微量移液器使用规范，吸头更换操

8、作规范；正确操作血凝试验，会判定血凝试验结果，能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为 1 个血凝单位；掌握四单位病毒的配制方法， 要求稀释液体积加入得当、操作规范，四单位病毒配制量适宜；正确操作血凝抑制试验，准确判定血凝抑制试验结果，要求能在生理盐水 对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到孔底时判定结果，能把完全不凝集（RBC 完全流下）作为被检血清的最高稀释倍数，阴性血清与标准对照的HI 滴度不大于 2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI 滴度相差1 个稀释度范围内；在规定时间内完成样本数量，场地整洁；记录填写规范、完整，抗体滴度报告方式正确。为满足上述要求，本赛项以教育部颁布的职业学校相关专业教学

9、指导方案和国家职业标准动物疫病防治员（三级）规定的知识和技能要求为基础，依据新城疫诊断技术（GB/T16550-2008）标准及技能型人才培养要求，确定比赛内容及方式。十、技术平台本竞赛项目需要的仪器设备符合各高职农业类院校畜牧兽医专 业建设要求。仪器设备按新城疫诊断技术（GB/T16550-2008）标准要求配制，且竞赛所用仪器、设备与材料（血凝试验和血凝抑制实序号123456器材或设备名称普通托盘天平普通离心机微型振荡器（MH-2） Thermo 微量移液器Thermo 微量移液器Thermo 微量移液器7微量移液器吸头数量1 台1 台1 台1 支1 支1 支150 个20 个10 个规格

10、100g上海泸湘仪 TDZ4-WS0.0050.05 mL0.11 mL210 mL0.0050.05 mL0.11 mL210 mL8910微量移液器吸头盒11板式微量移液器架96 孔 V 型血凝反应板烧杯121314禽用采血器具盖塑料离心管指型离心管验反应介质不一定是PBS 液）。本赛项所用仪器、设备与材料见表 2。表 2 项目竞赛用仪器、设备与材料（每队）2 个0.0050.05 mL1 个0.11 mL1 个5 块5 个50 mL2 个500 mL2 支5 mL2 支10mL6 支15 mL6 支1.5 mL15试管架1 个16指型离心管架1 个17细记号笔1 支18实验白大褂2 件1

11、9生理盐水（兽用）500 mL20柠檬酸钠溶液20mL3.8%21鸡新城疫标准抗原1 份22被检血清样本20 个23鸡新城疫标准阳性血清1 份24鸡新城疫标准阴性血清1 份25酒精棉球若干75%26干棉球若干27非免疫公鸡1 只28橡胶手套4 副29医用防护口罩2 只30实验报告单1 张31标签纸若干33A4 纸2 张34签字笔2 支十一、成绩评定（一）裁判组成项目组设裁判成员 5 名，由大赛组委会专家库抽取产生。（二）评分方法本赛项采取过程分段评分的方式评分，结果评定采用百分制。竞赛现场每位裁判对每一组选手分别打分，由项目裁判组统一评分，得分的算术平均值作为参赛队伍的最后得分。各裁判员首先审

12、核选手原始打分成绩，并签名；赛项裁判长对所有裁判员的打分成绩进行审核，并签名。（三）成绩审核为保障成绩评判的准确性，监督组将对赛项总成绩排名前30%的所有参赛队伍（选手）的成绩进行复核；对其余成绩进行抽检复核， 抽检覆盖率不得低于 15%。如发现成绩错误以书面方式及时告知裁判长，由裁判长更正成绩并签字确认。复核、抽检错误率超过 5%的，裁判组将对所有成绩进行复核。（四）成绩公布最终成绩经复核无误，由裁判长、监督人员和仲裁人员签字确认后公布。项目技能竞赛评分标准见表 3。表 3 项目技能竞赛评分标准序号考核内容考核要点分值评分标准仪器使用与材料准备2仪器正确使用，1 分；材料准备到位，1 分。参

13、考评分要点：未检查清点仪器材料，仪器使用不正确，材料准备不到位，口罩、乳胶手套穿戴不规范，酌情扣分。一试验器材准备标识合理，2 分；制作标签，标识清晰（注明参赛队序号、血凝板编及日期），2 分。（8 分）物品标识4参考评分要点：(1) 使用的烧杯、离心管（包括管盖） 和血凝反应板均要标记，不标识不得分；实桌面整洁度2(2) 标识遗漏或标识不清，酌情扣分。5. 摆放合理，2 分；参考评分要点：试验器材无序摆放，不得分。抗凝剂适量，2 分；采血方法规范、熟练， 2 分；采血量控制在 2-4mL 之间，2 分。参考评分要点：二配 制 1% 鸡红细胞悬液（18 分）采血方法和采血量6血液与抗凝剂比例

14、4:1；采血时，鸡放置于鸡笼上保定采血；采血局部合理消毒；采血时一针见血；采血量控制在 2-4mL 之间用干棉球按压止血；采血后采血局部未见明显血肿；采血未成功的，该项不得分。* 以上细节未规范操作，酌情扣分， 累加 6 分扣完为止。序号考核内容考核要点分值评分标准9. 离心机使用规范，4 分。参考评分要点：离心机使用4离心前做好平衡，对称放入转头孔内；规范使用天平，离心机自动停止，机门打开；* 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完 4 分为止。稀释液倍数正确，2 分；离心机转数、离心时间正确，2 分；血球洗涤次数适宜，2 分；压积红细胞吸取正确，2 分。参考评分要点：红细胞悬液配制方法8红

15、细胞洗涤时，灭菌生理盐水为抗凝血的 2-3 倍稀释，稀释后每离心管最液体体积大不可超过 12mL；红细胞洗涤时灭菌生理盐水与红细胞用大量程移液器充分混匀；(3) 离心参数设定：2000 r/m，5-10 min；(4) 红细胞洗涤时吸除白细胞及血小板等杂质；红细胞洗涤 35 次；最后配置 1%红细胞为 10-20 mL；* 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完 8 分为止。微量移液器使用规范，2 分；吸头更换操作符合规范，2 分。参考评分要点：器材使用4加吸头时操作规范，不可用力撞击枪盒；微量移液器设置准确；三血凝试验（20 分）(3) 微量移液器吸取和打出液体操作规范，移液器垂直加样为规范

16、，倾斜角度不要过大；* 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完 4 分为止。操作程序6吸取试剂更换吸头，2 分；加样顺序正确，1 分；倍比稀释操作规范，2 分；19.震荡及感作时间得当，1 分。参考评分要点：序号考核内容考核要点分值(1)评分标准稀释液加样完成后，在吸取待检品前需更换吸头；(2)加 1%红细胞时，按由病毒低浓度往高浓度的方向加样；(3)倍比稀释时不产生大量气泡；(4)倍比稀释时混匀充分，移液正确；(5)加样时，吸头与液面不接触；(6)试剂滴加孔内；(7)可以使用振荡器，以液体不震出来为准；(8)固液废弃物分。* 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完 6 分为止。20.能依据生

17、理盐水对照孔的 RBC 呈明显钮扣状沉到孔底时判定结果，4 分；21.对照孔结果正确时，能确定完全凝集的新城疫标准抗原最高稀释倍数为病毒的血凝价，4 分；结果判定准确1022.能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为 1 个血凝单位，2 分。参考评分要点：(1) 判断血凝价，做好记录；未做记录扣分 2 分；(2) 读数时，结果有跳孔现象的，每跳1 孔扣 2 分。器材选择合理，2 分；使用规范、熟练，2 分。参考评分要点：四配制 4 个血凝单位病毒溶液（10 分）器材选择4加吸头时操作规范，不可用力撞击枪盒；选择合适量程微量移液器移取样品；微量移液器吸取和打出液体操作规范；* 以上细节未规范操作，酌

18、情扣分，累加扣完 4 分为止。稀释倍数计算正确，2 分；稀释液加入得当、操作规范，2 分。配制方法4参考评分要点：(1) 根据血凝价，正确计算稀释倍数；计算错误扣 2 分(2) 微量移液器设置准确；未规范操作序号考核内容考核要点分值评分标准酌情扣分。27.配制量适宜，2 分；配制量适宜2注评分要点：配置量 10-20 mL 为适量，每超过 10mL 扣 1 分，最多扣 2 分。28.器材使用规范、熟练，4 分；参考评分要点：(1) 加吸头时操作规范，不可用力撞击枪盒；器材使用4微量移液器设置准确；微量移液器吸取和打出液体操作规范，移液器垂直加样为规范，倾斜角度不要过大；* 以上细节未规范操，作

19、酌情扣分，累加扣完 4 分为止。29.96 孔 V 型微量反应板各孔加入的稀释剂正确，1 分；30.被检血清、新城疫标准阴性血清对照、标准阳性血清对照加入正确，2分；五血凝抑制试验（20 分）操作程序6感作时间适宜，2 分；吸头更换正确，1 分。参考评分要点：参照国标，对照设立完整，每缺一个对照扣 1 分；稀释液加样完成后，在吸取待检品前需更换吸头；倍比稀释时不产生大量气泡；加样时，吸头与液面不接触；试剂不滴加到孔外；加 1%红细胞时边滴加边震荡混匀；感作时间正确；固液废弃物分开。结果判定准确10* 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完 6 分为止。能在生理盐水对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到

20、孔底时判定结果，2 分；在对照孔结果正确情况下，能从背侧观察 RBC 有无呈泪珠样流淌，2 分；能把完全不凝集（RBC 完全流下）被检血清的最高稀释倍数作为该血清的 HI 滴度，3 分；序号考核内容考核要点分值评分标准36.阴性血清与标准对照的 HI 滴度不大于 2log2，阳性血清与标准抗原对照的 HI 滴度与已知滴度相差 1 个稀释度范围内，3 分。参考评分要点：(1) 读数时，有跳孔现象的，每跳 1 孔扣 2 分。(2) 判断血清 HI 滴度，做好记录；未做记录扣分 2 分；抗体滴度报告方式正确，1 分；试验记录清晰，1 分参考评分要点：抗体滴度报告2抗体滴度用以 2 为底的负对数（-l

21、og2）表示；试验记录和报告书写整洁，不乱涂改。* 以上细节未规范书写，酌情扣分，累加扣完 2 分为止。六抗体滴度报告（24 分）结果误差2039.每个样本 1 分，共 20 个样本参考评分要点：结果误差1，得 1 分；误差超过1，0 分。40.场地整洁，2 分参考评分要点：场地整洁度2移液枪调到最大量程；其他仪器和器皿未复位；注射器未放入废物缸等，每错 1 项扣 1 分，扣完为止。* 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完 2 分为止。总分100十二、奖项设定本赛项设一、二、三等奖。以赛项实际参赛队（团体赛）总数为基数，一、二、三等奖获奖比例分别为10%、20%、30%（小数点后四舍五入）。

22、十三、赛项安全（一）比赛环境承办单位赛场的布置，赛场内的器材、设备符合国家有关安全规定。赛场周围设立警戒线，防止无关人员进入发生意外事件。 3. 参赛选手进入赛场、赛事裁判工作人员进入工作场所，严禁携带通讯、照相摄录设备，禁止携带记录用具。如确有需要，由赛场统一配置、统一管理。4.竞赛用生物制品均符合国家标准的企业生产与提供，实验动物符合生物安全规范。（二）生活条件比赛期间，原则上由各参赛单位自行安排食宿，承办单位协助联系食宿信息。大赛期间的交通安全由各参赛队会负责。各赛项的安全管理，除了采取必要的安全隔离措施外，应严格遵守国家相关法律法规，保护个人隐私和人身自由。（三）组队责任各学校组织代表

23、队时，须安排为参赛选手购买大赛期间的人身意外伤害保险。各学校代表队组成后，须制定相关管理制度，并对所有选手、指导教师进行安全教育。各参赛队伍须加强对参与比赛人员的安全管理，实现与赛场安全管理的对接。（四）应急处理比赛期间发生意外事故，发现者应第一时间报告组委会，同时采取措施避免事态扩大。赛项出现重大安全问题可以停赛，是否停赛由组委会决定。（五）处罚措施因参赛队伍原因造成重大安全事故的，取消其获奖资格。参赛队伍有发生重大安全事故隐患，经赛场工作人员提示、警告无效的，可取消其继续比赛的资格。赛事工作人员违规的，按照相应的制度追究责任。情节恶劣并造成重大安全事故的，由司法机关追究相应法律责任。十四、

24、竞赛须知（一）参赛队须知发扬良好的道德风尚，听从指挥，服从裁判，不弄虚作假。坚决执行竞赛的各项规定，对竞赛期间的意见和建议及时向组委会提出。各参赛队应可在竞赛前一天规定时间内进入赛场熟悉环境。（二）指导教师须知每组选手不超过 2 名指导教师。指导教师经报名并通过资格审查后确定，选手和指导教师的对应关系一经确定不得随意变更。比赛期间，指导教师不得进入竞赛场地内，发现违规取消该队参赛资格。各代表队领队以及指导教师要坚决执行竞赛的各项规定，加强对参赛人员的管理，指导选手做好赛前的一切技术准备和竞赛准备。对申诉的仲裁结果，领队以及指导教师要带头服从和执行，并做好选手工作。参赛选手不得因申诉或对处理意见不服而停止竞赛，否则以弃权处理。（三）参赛选手须知参赛选手严格遵守赛场规章、操作规程，保证人身及设备安全， 接受裁判员的监督和警示，文明竞赛。每批次参赛选手必须在