DB37T5962006医疗污染物排放标准

1、ICS13.030.99DB37山东省地方标准DB37/5962006医疗污染物排放标准Dischargestandardofmedicalpollutants2006-01-10实施2006-01-04发布山东省环境保护局君希山东省质量技术监督局友用DB37/5962006DB37/5962006 # I本标准的全部技术内容为强制性。为了贯彻中华人民共和国环境保护法、中华人民共和国水污染防治法中华人民共和国海洋环境保护法、中华人民共和国人气污染防治法、中华人民共和国固体废物污染环境防治法、中华人民共和国传染病防治法以及医疗废物管理条例，促进医疗废物处置系统的建设和管理，加强医疗卫生机构废物的

2、排放控制，保障人民身体健康，维护良好的生态坏境。特制定本地方标准。本标准的附录A、附录E、附录C、附录D为规范性附录。本标准由山东省环境保护局提出。本标准聂托济南市环境工程设计院、济南市环保局直属分局起草。本标准主要起草人：张成志、高旭光、迟智香、张建国、周蓬、徐書浩本标准于2006年1月4口首次发布。本标准由山东省环境保护局负责解释。DB37/5962006DB37/5962006 医疗污染物排放标准1范围本标准规定了山东省医疗卫生机构医疗污水排放和医疗废物处置（控制）的污染物限值。本标准适用山东省医疗卫生机构医疗污水排放和医疗废物处置（控制）的管理，也适用r兽医院的污水和医疗废物的排放管理

3、。2规范性引用文件卜列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB3097海水水质标准GB3838地表水环境质昴标准GB5085.3危险废物鉴别标准浸出毒性鉴别GB15981消毒与灭菌效呆的评价方法与标准GB15982医院消毒卫生标准GB18466医疗机构水污染物排放标准GB18484危险废物焚烧污染控制标准GB18598危险废物填埋污染控制标准GB18918城镇污水处理厂污染物排放标准G

4、B19218医疗废物焚烧炉技术要求（试行）町/T91地表水和污水监测技术规范医疗废物集中处置技术规范（试行）（环发20031206号）3术语及定义卜列术语及定义适用J：本标准。3.1医疗卫生机构从事与医疗、预防、保健以及其他相关活动的，由各级卫生行政主管部门负贵管理或监管的单位。3.2医疗污水医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、人平间等处排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医疗机构污水。3.3医疗废物医疗卫生机构在医疗、预防、保健以及其他相关活动中产生的具有直接或者间接感染性、毒性以及其他危害性的废物。具体分类名录依照国家危

5、险废物名录和国务院卫生行政主管部门和环境保护行政主管部门共同制定的医疗废物分类目录执行。3.4医疗废物集中处置中心具有坏境保护行政主管部门颁发的医疗废物处置资格的区域性医疗废物集中处置单位。4技术内容4.1水污染物排放标准4.1.1处理要求4.1.1.1医疗卫生机构应将传染病房的污水与其他污水分别收集。传染病医院（包括设传染病房的综合性医院）应设专用化粪池，进行预消毒处理。4.1.1.2医疗卫生机构的各种特殊排水，如含重金属废水、含油废水、洗印废水等应单独收集，分别采取不同的预处理措池后排入医疗污水处理系统。4.1.1.3同位素治疗和诊断产生的放射性废水，必须单独收集处理。4.1.1.4医疗污

6、水不得排入GB3838中的I、II类水域和1【1类水域的集中式生活饮用水地表水源地二级保护区、游泳区以及GB3097中的一、二类海域。4.1.2排放要求4.1.2.1根据水污染物的來源及性质，将水污染物控制项目分为必测项目和选测项目两类。必测项目为环境保护行政主管部门为了保护水坏境，在口常监测过程中必须监测的水污染物控制项目，主要包括影响水环境和污水处理系统一般处理工艺可以去除的基本控制项目及部分一类污染物，共15项。选测项目为地方环境保护行政主管部门根据当地医疗卫生机构的污染状况及水坏境保护状况对污水排放可以选择监测的控制项目，共计4项。4.1.2.2必测项目必须执行。选测项目由县级及其以上

7、人民政府环境保护行政主管部门根据当地医疗卫生机构的具体情况和水环境质量要求选择控制。4.1.3标准分级根据医疗卫生机构排入地表水域坏境功能和保护目标,将必测项目的常规污染物标准值分为一级标准、二级标准、三级标准、四级标准。一类重金属污染物和选测项目不分级。4.1.3.1排入GB3838III类水域中除集中式生活饮用水地表水源地二级保护区及游泳区Z外的区域，执行一级标准。4.1.3.2排入GB3838IV、V类水域或排入GB3097中三类海域以及排入未设置城镇污水处理厂的城镇污水排放系统的医疗污水，执行二级标准。4.1.3.3排入设置城镇污水处理厂的城镇污水排放系统的医疗污水，执行三级标准。4.

8、1.3.4床位小20床以及不设床位的医疗卫生机构产生的医疗污水，应当设消毒处理设施，执行四级标准。4.1.3.5传染病爆发期间，应当根据坏境保护行政主管部门和医疗卫生行政主管部门的要求执行应急处置措施要求。4.1.4标准值4.1.4.1医疗卫生机构水污染物排放，必测项目执行表1和表2的规定。4.1.4.2选测项目按表3的规定执行。表1一类污染物最高允许排放浓度（日均值）单位为亳克每升序号污染物最高允许排放浓度1总汞0.052总伽0.5表2基本控制项目最高允许排放浓度（日均值）单位为亳克毎升序号基本控制项13一级标准二级标准三级标准四级标准1粪大肠菌群数（MPN/L）5010050050002肠

9、道致病菌不得检出不得检出3肠道病毒不得检出不得检出4结核杆菌不得检出不得检出5化学需氧虽（CODc.）40601206生化需氧虽（bod5）1020307悬浮物（SS）a10(5)20608动植物油1.05159挥发酚0.10.50.510氨氮b5(8)15(20)25(30)11磷酸盐（以P计）0.50.51.012余氯0.50.5813PH69a括号内为用丁冲洗地面及洗车用水水质指标。b括号外数值为水温12C时的控制指标，括号内数值为水温W12C时的控制指标。c消毒接触池接触时间Mlh,接触池出口总余氯3mg/llOmg/1。表3选测项目最高允许排放浓度（日均值）单位为亳克每升序号污染物最

10、高允许排放浓度1氛化物102氯化物2503甲醛类1.04总有机碳仃0C）304.1.4,3污水处理过程中产生的废气按照GB18466执行4.1.5取样与监测4.1.5.1水质取样在污水处理站处理工艺末端排放II。其中一类污染物的取样按照HJ/T91执行。4.1.5.2检测取样频率为至少每2h次，取24h混合样，以口均值计。4.1.5.3监测分析方法按表4或国家环境保护总局认定的替代方法.等效方法执行。表4水污染物监测分析方法序号控制项目测定方法测定下限（mg/1）方法來源1总汞冷腹子吸收分光光度法0.0001GB7168双硫腺分光光度法0.002GB71692总种二乙基一硫代氨基甲酸银分光光度

11、法0.007GB74853粪大肠菌祥数多管发酵法附录A4沙门氏菌附录B5志贺氏菌附录C6结核杆菌附录D7化学需氧虽（C0%）重钻酸盐法30GB119148BODS稀释与接种法2GB7188微生物传感器快速测定法1HJ/T869悬浮物（SS）重虽法GB1190110动植物汕红外分光光度法0.1GB/T1648811挥发酚4-氨基安替比林分光光度法0.002GB749012总氮（以N计）碱性过硫酸钾-消解紫外分光光度法0.05GB1189413磷酸盐（以P计）创酸钱分光光度法0.01GB1189314pH玻璃电极法GB692015F离子选择电极法0.05GB7484茜索磺酸钳目视比色法GB7482

12、氟试剂分光光度法GB748316氯化物硝酸银滴定法GB1189617甲醛乙酰丙刖分光光度法0.05GB1319718TOC非红外吸收法0.5GB1318319余氯NN-二乙基-1，4-苯二胺滴定法GB11897N,N-二乙基-1.4-苯二胺分光光度法GB118984.2医疗废物控制标准4.2.1医疗卫生机构不得将医疗废物随意弃置。4.2.2医疗卫生机构应将医疗废物与生活垃圾分开收集；医疗废物应进行无害化集中处置，生活垃圾按城市生活垃圾处理原则进行处理。4.2.3医疗卫生机构应对医疗废物进行分类，并采用医疗废物集中处置技术规范（试行）中要求的容器、转运器械进行包装、转运，包装、转运期间应注意防护

13、措施。4.2.4医疗卫生机构应设置医疗废物的暂存场所。具有100张床位以上的医疗卫生机构应建立专门的医疗废物暂存库房，暂存库房必须满足医疗废物集中处置技术规范（试行）中关J：暂存库房的设计要求；具有100张床位以卜的医疗卫生机构及门诊、部、所应设立专门的医疗废物暂存场所，并满足医疗废物集中处置技术规范（试行）中暂存场所的要求。4.2.5医疗废物可以根据当地情况采用表5的处置方法进行处置。表5医疗废物处置方法序号医疗废物种类医疗废物处置方法备注1橋理性废物（包括人体组织、死胎、器官、肢体和动物F体、血液、体液）火化或焚烧按国家有关法律法规处代2感染性废物（包括传染病人手术或尸解后的废弃物，如污染

14、的材料和仪器；來|传染病房的废弃物，如排泄物、手术或感染伤口的敷料.严重污染的衣物：传染病人血透析中产生的废弃物：实验室感染的动物：传染病人或动物接触过的任何其他设备和材料；实验室所用的菌落及病凍株培养基和保菌液；使用过的一次性注射器、输液器.输血器等废弃物）焚烧或消毒3锋利物（锐器）（包括针头、手术丿J、解剖刀、针管、手术锯、玻璃制品等易对人体造成损伤的废物焚烧4药物性废物（包括过期、被淘汰、压碎或污染的药品、疫苗、血涓）焚烧5遗传牺毒性废弃物（包括C明确的抑制细胞的药物，化学或放射治疗病人的呕吐物、尿或粪便。如苯、环砲霉索、环磷酰胺等）焚烧对环磷醸胺、异环磷醸胺、硫酸长春新碱等可采用化学降

15、解法或封存或使之|动失效6化学性废弃物（包括在诊断、试验、清洁、管理、消毒过程中产生的，具有毒性、腐蚀性、易燃性、反应性或遗传毒性的物质。如甲醛、摄影用剂、有机化合物等）焚烧或化学处理对丁一般的化学废弃物，如糖、氨基酸和特定的盐类可按城市生活垃圾进行处芒或扌丰入下水道。7低放射性废物（包括诊断或治疗用的棉签、注射器、输液器等焚烧8污水处理过程中产生的污泥焚烧4.2.6医疗废物进行无害化处置的技术要求4.2.6.1采用高温热处理技术要求按GB19218执行。4.2.&2咼温蒸汽灭菌按GB15982执行4.2.&3其他处理技术采用微波处理法、化学消毒法、电热去活技术（EDT）等其它经环境保护行政主

16、管部门及卫生行政主管部门认可的医疗废物处理技术时，污染物的排放应当达到环境保护行政主管部门及卫生行政主管部门的要求。4.2.7无害化处置后的医疗废物应达到的排放标准4.2.7.1采用焚烧法处置医疗废物，其焚烧炉排放气体的排放限值不应高J-GB18484规定的限值。检测方法按GB18484执行。4.2.7.2采用焚烧法处置医疗废物，其焚烧残留物中的含菌量应为零。4.2.7.3医疗废物焚烧过程中除尘设备收集到的飞灰必须密闭收集贮存，并按照GB18598固化填埋处理；焚烧产生的炉渣可以送生活垃圾填埋场填埋处理；其他烟气净化装置产生的固体废物按GB5085.3进行鉴别，并确定是否属危险废物，如属危险废

17、物，按危险废物处置，否则可以送生活垃圾填埋场填埋处理，无法进行鉴别实验的，按危险废物处置。4.2.7.4采用高温蒸汽灭菌法处置医疗废物产生的固体废物将其粉碎后按城市生活垃圾进行处置。4.2.7.5采用高温蒸汽灭菌法处置医疗废物，生物指示剂应选择耐热的嗜热性脂肪杆菌芽m（Bacillusstearothermophilusspores）,检测方法按GB15981执行。4.2.7.6每批医疗废物进行高温蒸汽灭菌处置需用化学检测方法对灭菌效呆进行检测，可采用化学指示管（卡）检测方法或化学指示胶带检测法，检测需将化学指示管（卡）放入灭菌室内灭菌效果最难保证的空间位置，或将化学指示胶带粘贴J：每一待灭菌

18、物品包外，经一个灭菌周期后，观察所放置的指示管（卡）或胶带的性状或颜色，如果均变至规定的条件，判为灭菌合格：若未达到规定的条件，则灭菌过程不合格。5标准的实施与监督本标准由县级以上人民政府环境保护行政主管部门负责监替实施。DB37/5962006DB37/5962006 附录A（规范性附录）医疗污水中粪大肠菌群的检验方法A.1仪器和设备A.1.1高压蒸汽灭菌器A.1.2干燥灭菌箱A.1.3培养箱：37CA.1.4恒温水浴箱A.1.5电炉A.1.6天平A.1.7灭菌平皿A.1.8灭菌刻度吸管A.1.9酒精灯A.2培养基和试剂A.2.1乳糖胆盐培养液A.2.1.1成分蛋白豚20g猪胆盐（或牛、羊胆

19、盐）5g乳糖5g0.4%漠甲酚紫水溶液2.5mL蒸饰水lOOOmLA.2.1.2制法将蛋白月东、猪胆盐及乳糖溶解J-1000mL蒸饰水中，调整pH到7.4,加入指示剂，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。115C卜灭菌20min。贮存于冷喑处备用。A.2.2三倍浓度乳糖胆盐培养液A.2.2.1成分蛋白豚60g猪胆盐（或牛、羊胆盐）15g乳糖15g0.4%漠甲酚紫水溶液7.5mL蒸馆水lOOOmLA.2.2.2制法制法同附录A.2.1.2oA.2.3伊红美兰培养基（EMB培养基）A.2.3.1成分蛋白豚lOg乳糖lOg磷酸氢二钾2g琼脂20g2%伊红水溶液20mL0.5%美蓝水溶液13mL蒸馆水A

20、.2.3.2制法lOOOmL将琼脂加到900mL蒸饴水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白腺，混匀使溶解，再加入蒸饷水补足至1000mL，调整pH至7.27.4。趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖，混匀，定鼠分装丁烧瓶内，115C灭菌20mino作为储备培养基贮存于冷喑处备用。临用时，加热融化储备培养基，待冷至60C左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一定鼠的已灭菌的2%伊红水溶液和0.5%美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡）。倾注平皿备用。A.2.4乳糖蛋白豚培养液A.2.4.1成分蛋白腺牛肉膏乳糖氯化钠1.6%漠甲酚紫乙醇溶液蒸馆水A.2.4.2制法10g3g5g5gImLlOOOmL将蛋

21、白腺、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解J-1000mL蒸馆水中，调整pH至07.27.4,加入1.6%澳甲酚紫乙醇溶液ImL,充分混匀，分装J：内有倒管的试管中。115C卜灭菌20min。贮存冷喑处备用。A.2.5革兰氏染色液A.2.5.1结晶紫染色液结晶紫95%乙醇溶液1%草酸钱水溶液lg20mLlOOOmL将结晶紫溶乙醇中，然后与草酸钗水溶液混合。A.2.5.2革兰氏碘液碘碘化钾蒸馆冰lg2g300mL将碘与碘化钾混合，加入蒸怖水少许，充分摇匀，待完全溶解，再加入蒸馅水至300mL。A.2.5.3脱色液95%乙醇A.2.5.4沙黄复染液沙黄95%乙醇蒸馆水lg2g90mL将沙黄溶J-95%乙醇

22、中，然后用蒸饷水稀释。A.2.6染色法染色的基本步骤为：a）涂片：在载玻片上滴加一滴生理盐水，用灭菌的接种环取菌落少许，与生理盐水混匀，涂布成薄膜；b）干燥：在室温中使自然干燥；c）固定：将涂片迅速通过火焰23次，以载玻片反面接触皮肤，热而不烫为度；d）染色：滴加结晶紫染色液，染色lmin,水洗：e）媒染：滴加革兰氏碘液，作用lmin,水洗：f）脱色：滴加95%乙醇脱色，约30s,水洗；g）复染：滴加复染液，复染lmin,水洗。革兰氏阳性菌染色后呈紫色，革兰氏阴性菌染色后呈红色。亦可用1：10稀释的石炭酸复红染色液作复染剂，复染时间为10soA.3检验程序检验程序见图A.lo图A.1污水中粪大

23、肠菌群检验程序A.4操作步骤A.4.1样品准备污水样品应至少取200mL,使用前应充分混匀。若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。根据预计的污水样品中粪人肠菌群数确定污水样品接种粪人肠菌群数最相对较少的接种帚一般为10mL、ImL、0.ImL。粪大肠菌群数较多时接种量为ImL、0.ImL、0.OlmL或0.ImL、0.OlinL、0.OOlmL等。接种量少丁-lmL时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种鼠为0.ImL、0.OlmL时，取稀释比分别为1:10、1:100。其它接种量的稀释比依此类推。1:10稀释样品的制作方法为：吸取ImL水样，注入到盛有

24、9mL灭菌水的试管中，混匀，制成1:10稀释样品。因此，取lmLl:10稀释样品，等丁取0.ImL污水样品。其它稀释比的稀释样品同法制作。DB37/5962006DB37/5962006A.4.2发酵试验将样品接种J：装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，44C培养24h。样品接种体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以卜条件确定：取三个接种最、每个接种最的样品分别接种5个试管内，共需15个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种起确定。若接种駅为10mL,吸取10mL样品接种装有5mL三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种屋为ImL时，吸取ImL样品接种装有10mL普通浓度乳

25、糖胆盐培养液的试管内；若接种殖少J：lmL时，吸取ImL稀释样品接种装有10mL普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。A.4.3平板分离人肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h培养后，将产酸的试管内培养液分别划线接种J：EMB培养基上。置J：37C培养箱中，培养18h24h。A.4.4鉴定挑选可疑粪人肠菌群菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：a）深紫黑色，貝有金属光泽的菌落；b）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；c）淡紫红色，中心色较深的菌落。上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽抱杆菌，则挑取上述典型菌落13个接种盛有5mL乳糖蛋白丿陈培养液倒管和倒管的试管内，置J：4

26、4C培养箱中培养24h。产酸产气试管为粪人肠菌群阳性管。A.5计数根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表A.1可得lOOmL污水中粪大肠菌群值。由丁表A.1是按一定的三个10倍浓度差接种量设计的（接种量为10mL、ImL和0.ImL）,当采用其他三个10倍浓度差接种量时，需要修正表内MPN值，具体方法如卜：表内所列污水最人接种帛:増加10倍时表内MPN值相应降低10倍；污水最人接种最减少10倍时表内MPN值相应増加10倍。如污水接种量改为ImL、0.ImL和0.OlmL时，表A内MPN值相应増加10倍。其它的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。由丁表A.lrtMPN值的单位为每lOOm

27、L污水样品中MPN值，而污水以1L为报告单位，因此需将查表A.1得到的MPN值乘上10,换算成1L污水样品中的MPN值。表A.1污水中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表（污水样品接种量为5份10ml水样，5份lml水样和O.lml水样）阳性管数阳性管数阳性管数每接种接种接种100ml接种接种接种lOOinl接种接种接种100ml100m10mlO.lnil水样中100m10mlO.lnil水样中100m10mlO.lml水样中1水样水样水样MPN1水样水样水样MPN1水样水样水样MPN0000200540013001220174011700242029402210035203124032500

28、472041440430005920516405360102210741017011421194112101252121241226DB37/5962006DB37/5962006 # 表A.1（续）阳性管数每阳性管数行.阳性管数毎接种接种接种100ml接种接种接种100ml接种接种接种100ml100m10ml0.11111水样中100m10ml0.11111水样中100m10ml0.1ml水样中1水样水样水样MPN1水样水样水样MPN1水样水样水样MPN013721314413310149214174143601511215194154202042209420220216221124212

29、602272221442232023922317423380241122419424440251322522425500306230124302703172311443133032923217432390331123320433450341323422434520351523525435590408240154403404192411744140042112422044247043132432344354044152442544462045172452844569050925017450410511125120451480521325223452560531525326453640541725

30、429454720551925532455811002300850023101430111501311026302135024310383031650358104103042050476105123052350595110431011510331116311145114611283121751263113103132051384DB37/5962006DB37/5962006表A.1（续）阳性管数每阳性管数4阳性管数毎接种接种接种100ml接种接种接种100ml接种接种接种100ml100m10mlO.lnil水样中100m10mlO.lnil水样中100m10ml0.1ml水样中1水样水样水

31、样MPN1水样水样水样MPN1水样水样水样MPN114123142351411011514315275151301206320145204912183211752170122103222052294123123232452312012415324275241501251732531525180130833017530791311033121531110132123322453214013315333285331801341733432534210135193353653525014011340215401301411334124541170142153422854222014317343325

32、432S01441934436544350145223454054543015013350255502401511535129551350152173523255254015319353375539201542235441554160015524355455551600DB37/5962006DB37/5962006 附录B（规范性附录）医疗污水中沙门氏菌的检验B.1仪器和设备B.1.1高压蒸汽灭菌器B.1.2干燥灭菌箱B.1.3培养箱B.1.4恒温水浴箱B.1.5电炉B.1.6天平B.1.7灭菌平皿B.1.8灭菌刻度吸管B.1.9酒精灯B.2培养基和试剂B.2.1亚硒酸盐增菌液（SF增菌液）

33、B.2.1.1成分帧蛋白腺（或多价豚）10g磷酸氢二钠（Na2HP03）16g磷酸二氢钠（NaH2P03）2.5g乳糖4g亚硒酸氢钠4g蒸饰水lOOOmL2.1.2制法除亚硒酸氢钠外，将以上各成分放入蒸饴水中，加热溶化。再加入亚硒酸氢钠，待完全溶解后，调整pH到7.07.1,分装于三角烧杯内。12VCT灭菌15min备用。B.2.2二倍浓度亚硒酸盐增菌液（二倍浓度SF增菌液）2.2.1成分除蒸馅水改为500mL夕卜，其它成分同附录B.2.I.1。2.2.2制法制法同附录B.2.1.2o2.3SS培养基B.2.3.1基础培养基B.2.3.1.1成分牛肉膏5g示腺5g三号胆盐3.5g琼脂17g蒸馆

34、冰lOOOmLB.2.3.1.2制法将牛肉育、示關和胆盐溶解J-lOOmL蒸馅水中。将琼脂加到600mL蒸馆水中，煮沸使其溶解。再将二者混合，121C卜灭15min,保存备用。B.2.3.2完成培养基B.2.3.2.1成分基础培养基lOOOmL乳糖10g柠檬酸钠8.5g硫代硫酸钠8.5g10$柠檬酸铁溶液lOmL1%中性红溶液2.5mL0.1%煌绿溶液0.33mLB.2.3.2.2制法加热溶化基础培养基，按比例加入除中性红和煌绿溶液以外的各成分，允分混合均匀，调整pH到7.0,加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。制好的培养基宜当口使用，或保存J：冰箱内J18h内使用。煌绿溶液配好后应在10大以内使

35、用。B.2.4亚硫酸锤琼脂培养基（BS培养基）B.2.4.1基础培养基B.2.4.1.1成分蛋白腺10g牛肉膏5g氯化钠5g琼脂20g蒸馆水lOOOmLB.2.4.1.2制法加热溶解各成分,按每份100mL的量分装f-250mL三角瓶中,1219卜灭菌20min备用。B.2.4.2亚硫酸祕贮备液B.2.4.2.1成分柠檬酸蚀镂2g亚硫酸钠20g磷酸氯二钠lOg葡萄糖lOg蒸馆水200mLB.2.4.2.2制法将柠檬酸蚀钱溶解J-50mL沸水中，同时将压硫酸钠溶解J-lOOmL沸水中，混合两液并煮沸3min趁热加入磷酸氯二钠搅拌至溶解。冷却后，加入剩余的50mL葡萄糖水溶液，贮存丁冰箱中。B.2

36、.4.3柠檬酸铁煌绿贮备液B.2.4.3.1成分柠檬酸诜2g煌绿（1%水溶液）25mL蒸馆水200mLB.2.4.3.2制法将上述成分溶解水中，盛j:已灭菌的玻璃瓶内，贮存j:冰箱。B.2.4.4完成培养基B.2.4.4.1成分基础培养基lOOmL亚硫酸饨贮备液20mL柠檬酸诜煌绿贮备液4.5mLB.2.4.4.2制法加热融化基础培养某并冷却至50C,同时分别加热亚硫酸蚀贮备液和柠檬酸铁煌绿贮备液至50C。在无菌操作卜将后者加入到前者去，充分混合，无菌倾入已灭菌的培养皿中。B.2.5三糖铁琼脂培养基（TSI培养基）B.2.5.1成分蛋白腺20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖lg氯化钠5g

37、硫酸亚铁镂0.2g硫代硫酸钠0.2g琼脂12g酚红0.025g蒸饰水lOOOmLB.2.5.2制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解J：蒸饰水中，调pH到7.4。加入琼脂，加热煮沸，再加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121C卜灭菌15min放置高层斜面备用。B.2.6沙门氏菌诊断血清B.3检验程序检验程序见图Blo图B.1污水中沙门氏菌检验程序B.4操作步骤B.4.1样品处理和增菌取200mL污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用100mL二倍浓度SF增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶内，充公摇匀，置于37C恒温培养箱，增菌培养1224h。若样品为

38、经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。B.4.2平板分离取上述增菌培养液，分别接种J：SS培养基平板和BS培养基平板，置J：37C培养箱中，培养24h48h。观察各平板上生长的菌落形态。挑取在SS培养基平板上呈无色透明或中间有黑心，直径12mm的菌落；挑取在BS培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5个菌落，接种J-TSI培养基中，置于37C培养箱中，培养18h24hB.4.3鉴定B.4.3.1血清学试验在TSI培养基中，如不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，一般产生硫化氢，有动力者，先与沙门氏A-F群0多价血清作玻璃片凝集

39、，凡与多价0血清凝集者，再与0因子血清凝集，以确定所属群别，然后用H因子血清，确定血清型。双向菌株应证实两和的H抗原，有Vi抗原的菌型（伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌）应用Vi因子血清检验。B.4.3.2生化试验应进行葡萄糖、It露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门氏菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外，通过发酵葡萄糖、产气、均发酵卄露醇和麦芽糖（但猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基质为阴性，通常产生硫化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的0型菌株无动力外，通常均有动力。如遇多价0血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时，可加做侧金盏花醇

40、、水杨素和氛化钾试验,沙门氏菌均为阴性。5检验结果报告根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。DB37/5962006DB37/5962006附录c（规范性附录）医疗污水中志贺氏菌的检验方法C.1仪器和设备C.1.1高压蒸汽灭菌器C.1.2干燥灭菌箱C.1.3培养箱C.1.4恒温水浴箱1.5电炉C.1.6天平C.1.7灭菌平皿C.1.8灭菌刻度吸管C.1.9酒精灯C.2培养基和培养液C.2.1革兰氏阴性增菌液（GN增菌液）C.2.1.1成分帧蛋白腺（或多价腺）20g葡萄糖lg什露醇2g枸椽酸钠5g去氧胆酸钠0.5g磷酸氢二钾16g磷酸二氢钾2.5g氯化钠5g蒸馆水lOOOmLC

41、.2.1.2制法将以上各成分加入蒸饴水中溶化，调整pH至7.0,煮沸过滤，115C卜灭菌20mina贮存冷暗处备用。C.2.2二倍浓度革兰氏阴性增菌液（二倍浓度GN增菌液）2.2.1成分除蒸馅水改为500mL夕卜，其它成分同附录C2.1.1o2.2.2制法制法同附录C.2.1.2。2.3SS培养基同附录B.2.3。C.2.4伊红美蓝琼脂培养基（EMB培养基）同附录A.2.3。C.2.5三糖铁琼脂（TSI培养基）同附录B.2.5。C.2.6志贺氏菌诊断血清DB37/5962006DB37/5962006 C.3检验程序检验程序见图C.1。图C.1污水中志贺氏菌检验程序C.4操作步骤C.4.1样品

42、处理和增菌培养取200mL污水，用灭菌滤膜进行抽滤。若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。用100mL二倍浓度GN增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到已灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于37C恒温培养箱，增菌培养68hC.4.2分离取上述增菌培养液，分别接种SS培养基平板和EMB培养基平板，置J-37C培养箱中培养24h挑取在SS培养基平板和EHB培养基平板上呈无色透明，直径11.5mL的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5个菌落,接种J-TSI培养基,置于379培养箱中培养1824h。挑取在TSI中,葡萄糖产酸不产气，无动力，不产生硫化氢，上层斜而乳糖不分解的菌株，

43、可做血清学和生化试验。C.4.3鉴定C.4.3.1血清学试验志贺氏菌属分为四个群，先与多价血清作玻璃片凝集试验，如为阳性，再分别与A、B、C、D群血清凝集，并进一步与分型血清做玻璃片凝集，最后确定其血清型。C.4.3.2生化试验应进行葡萄糖、It露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。志贺氏菌属能分解葡萄糖，但不产气（福氏忐贺氏菌6型有时产生少最气体），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋内氏雷贺氏菌对乳糖和蔗糖迟缓发酵产酸。志贺氏菌属均不产生硫化氢，不分解尿素，无动力。対It鋸醇、麦芽糖的发酵及靛基质的产生，则因菌株不同而异。如遇多价血清玻璃片凝集试验为阴性，而生化反应符合上述情况时，可加做肌醇、水杨酸、V-P、椽酸盐、亂化钾等试验。志贺氏菌属均为阴性反应。5检验结果报告根据检齡结果，报告一定体积的样品中存在或不存在，忐贺氏菌。DB37/5962006DB37/5962006 附录D（规范性附录）医疗污水中结核杆菌的检验方法D.1仪器