高温热应激对公猪的影响及预防措施

1、精选优质文档-倾情为你奉上精选优质文档-倾情为你奉上专心-专注-专业专心-专注-专业精选优质文档-倾情为你奉上专心-专注-专业高温热应激对公猪的影响及预防措施王志军 周伟良 朱荣昌（天津市宁河原种猪场 宁河 ）1 高温热应激及其对公猪性能的影响热应激（Heat Stress）是指动物机体对热应激源的非特异性防御应答的生理反应，其实质是指环境温度超过等热区中的舒适区上限温度所致的非特异性反应的总和。夏季持续高温造成的热应激通过改变猪的生理生化反应，降低猪的采食量、日增重和饲料利用率，使种公猪血液生化指标（激素、血糖、酶、矿物质等）发生改变。公猪最适宜饲养在1824环境中，睾丸温度只有低于公猪体内

2、正常温度才能产生正常精子，当环境温度高于2730时，公猪就会发生热应激，炎热使公猪血液中的促肾上腺皮质激素升高，从而抑制睾丸产生类固醇，致使公猪的交配欲减退；高温使精细胞发生变性，精液中会出现受害的细胞融合而成的多核巨型细胞，多核巨型细胞随温度上升而增多，致使精液品质（射精量、活力、畸形率、密度等）降低，从而使种公猪的生产性能受到严重影响甚至失去生育能力。高温对公猪精液品质的影响甚至可以延续到3个月后。每年下半年的母猪返情和产仔数下降很大的原因是高温所导致的精液品质下降。种公猪受精率在20时为85%90%，在33下曝晒72小时后为50%60%。近年来，随着养猪业集约化规模化的发展和全球性气温的

3、普遍升高，热应激也越来越严重。因此探索热应激发生机理与有效解决方案对指导生产实践有十分重要的意义。下面从内外环境控制、营养调控、管理三个方面提出减小热应激对公猪生产性能影响的方法。2 改善内外环境减小热应激2.1 改善猪舍外部环境猪场的位置及取向：根据地理位置的不同，猪舍应选择地势高、地形宽敞、通风良好的地方，以避免阳光直射猪舍内。种树绿化，改善场区小气候：在猪舍周围可以多栽一些树木，场区种植牧草，减少水泥地面所占比例，净化猪场空气，改善场区小气候。加强隔热设计：猪舍上部应设有天棚等隔热材料，加强隔热和通风效果，并选择屋顶涂料，防止太阳辐射。搭设遮荫棚，防止阳光直射：特别是半开放式猪舍，更应采

4、取遮阳措施来防止阳光照射（如防晒网等），降低猪舍地面温度和环境温度。2.2 改善猪舍内部环境通风：打开门窗自然通风或采取机械通风，促进空气流动，不但可将猪舍内污浊的空气向外排出，还可有效降低空气湿度，带走舍内热量。喷雾降温：猪舍内安装自动消毒喷雾设备，每间隔30min连续喷雾20s，喷雾时不关闭风扇，通过风的流动降低猪舍内的局部温度。湿帘风机降温：湿帘风机降温系统是效果比较理想的一种降温方法，当湿帘厚度为12cm，过帘风速为1.01.2m/s时，湿帘降温效率为81%87%，可使舍温降低57。空气越干燥，温度越高，经过湿帘的空气降温幅度越大，效果越显著，最好配上温度调控装置并采用深井低温水。空调

5、降温：在猪舍内安装空调，不仅可以降低温度，还可以控制湿度，是目前最好的一种降温措施，其缺点是成本较高。但对于集中管理的种公猪舍，安装空调还是划算的。戏水池：对公猪的降温也可用戏水池。戏水池的水深以2040cm左右为宜。每天更换2次地下水，水温以25左右为宜。3 缓解公猪热应激的营养调控3.1 提高公猪饲料能量浓度及其消化率由于夏天天气炎热导致公猪采食量下降，通过在饲料中添加脂肪来提高能量浓度对热应激的公猪有利，但是夏天一定要注意添加的油脂不被氧化或酸败。提高饲料的消化率也是增加能量摄入的有效方法，如添加酶制剂（如木聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、植酸酶等）。3.2 提供优质蛋白质，保证氨基酸平衡公猪

6、日粮中的蛋白质和赖氨酸是影响其繁殖性能的关键因素，热应激状态下猪对蛋白质的需要量增加，但是，粗蛋白过高又会增加公猪的体增热，使公猪感觉更热。所以在炎热的夏季，应给公猪提供优质的蛋白质来源并补充必须氨基酸。蛋白质和氨基酸的来源：除了豆粕之外，好的蛋白质来源无非就是鱼粉，但鱼粉的质量良莠不齐，夏季高温变质的风险也很高，需要对鱼粉的质量进行严格的控制，同时也可用一些功能性蛋白。3.3 调节电解质与酸碱平衡碳酸氢钠具有溶解粘液、健胃、抑酸和增进食欲的作用，吸收到体内能补充机体所需的钠，并作为血液和组织中主要的缓冲物质，减缓呼吸性碱中毒，提高抗应激能力。饲料中添加0.5%碳酸氢钠是克服热应激造成的酸碱平

7、衡和生产性能受阻的最成功的方法。热应激时呼吸频率增加，血液中CO2和HCO3水平下降，导致PH值升高，严重时可发生呼吸性碱中毒。在饲料和饮水中添加酸化剂，可使血液中升高的PH值下降，调节酸碱平衡（如安息香酸、乳酸、柠檬酸、延胡索酸等）。3.4 强化关键维生素水平，选择易于吸收的微量元素来源在热应激情况下对维生素C的需求量增加，可通过饲料和饮水添加。维生素C缓解热应激的功能有：应激时皮质类固醇的产量增加，而皮质类固醇的合成需要维生素C；维生素C为合成肉毒碱所必须，肉毒碱是肌肉的能量供应中必不可少的一种代谢因子，而在高温应激时通过喘气散热消耗大量的能量；在应激过程中，维生素C有助于维持较高的采食量

8、，从而保证足够的营养供给抵抗热应激的不利影响。维生素E在抗热应激中也有一定的作用：添加维生素E能刺激免疫器官，增强机体免疫力，有利于提高抗应激能力。3.5 甘露寡糖甘露寡糖可耐高温、稳定、无毒，大部分不能被动物消化酶所消化。在肠道可作为有益微生物的底物，促进有益菌的增殖，还能吸附肠道沙门氏菌、大肠杆菌及魏氏梭菌等病原菌随粪便排出；改善肠道形态，促进养分吸收，可缓解因热应激引起种公猪采食量下降的不利影响。3.6 其它添加剂中草药饲料添加剂具有安全无害、无抗药性、无药物残留和无毒副作用的特点，已经成为种猪抗应激添加剂的研究热点之一。大量研究表明，选用具有开胃健脾、清热消暑功能的中草药添加剂如：山楂

9、、苍术、陈皮、黄芩等喂猪，可以缓解炎热环境对猪的影响，改善增重和饲料利用率。4加强饲养管理4.1保证充足的饮水 在高温情况下，猪以蒸发散热为主，保证充足而清凉的饮水，是有效的防暑措施之一，一方面是保障蒸发散热的水分需要，另一方面清凉饮水在消化道内升温也可使机体降温。在不采用自动饮水器饮水时，水糟内要保持充足清洁水，不能断水，最好有流动的清凉水供猪饮用。使用自动饮水器供水的，应确保饮水压力和饮水器的位置，经常检查饮水器的水流情况，因为水压不够、水流速度慢、饮水器高度等都会影响猪的饮水量。4.2 科学饲喂 猪生活在最适温度范围之外时，其食欲与采食将受到影响。为此，夏季喂猪应合理调整饲喂时间、饲喂次

10、数和饲喂方式。早上提前饲喂、下午推后饲喂，并适当增加饲喂次数，改干料为湿拌料，以增加猪的采食量。青绿饲料中含有较高的维生素，在炎热的夏季对公猪每天投放一定量的青饲料，可提高猪群的食欲和抗应激能力。4.3 防饲料霉变 猪对霉菌毒素、变质饲料敏感。在高温高湿季节，应尽量保证饲料的新鲜与好的适口性，建议添加霉菌毒素吸附剂以减轻霉菌毒素的危害。同时饲养员饲喂前应对公猪食槽的残留饲料进行清理，以防公猪采食酸化变质饲料。4.4 适当调整公猪活动规程将公猪的运动时间控制在比较凉爽的时间段，如清晨7点以前，安排公猪运动。或者在阴凉天气里延长运动时间，炎热天气缩短运动时间。调整公猪配种采精时间和频率，公猪采精或

11、配种应在凉爽时间段。4.5 减少其他应激避免突然改变饲料、饲养人员和猪舍内外的环境，疫苗注射应安排在早晚气温较低时进行；尽可能减少和避免其他应激，以减轻猪的负担，有利于改善猪的热应激。4.6 卫生消毒夏季高温高湿环境有利于病原微生物的大量繁殖，增加感染猪病的机会。因此，夏季必须重视猪舍内外及猪体表的清洁卫生和消毒工作，及时清除粪尿、减少氨气。4.7 喷（洒）水降温猪舍温度过高时可采用喷雾或水管直接冲洗猪体，帮助猪体散热，必要时定时冲洗睾丸。但用水冲洗猪体时，应安排在饲喂前，喂后30min内不能洗，更不能用水突然冲洗猪头部，以防头部血管强烈收缩休克。当舍内温度超过30时应每小时冲1次。高温时段可

12、用清凉深井水冲洗舍内地面和墙壁降温，每天中、下午冲洗几次。由于喷（洒）水降温会增大舍内的湿度，因此喷（洒）水后应使用风扇吹走湿气、降低湿度。5 小结热应激处理不当会给养猪业造成巨大损失。因此，当前夏季，要加强饲养管理及采取营养调控措施来降低猪的热应激，这对猪的健康养殖、提高动物福利及养殖经济效益都具有非常重要的意义。但是，在防治种猪热应激的过程中，要从实际出发，因地制宜采取相应的措施，给种猪生产和生长创造一个适宜生长的环境，最大程度地挖掘种猪生产潜力。精子密度和平衡时间对0.25mL细管猪精液冷冻效果的影响梁鸿斌资金项目：“十一五国家科技支撑计划”项目“荣昌猪资源保护体系及关键技术研究”【项目

13、批准号： 2007BAD51B01-1-2】作者简介：梁鸿斌(1979-)，男，硕士生，研究方向：动物产科及胚胎工程。 李晶 李伯函 郭勇 刘云海 倪和民（北京农学院动物科学技术系，北京 ）摘 要：为摸索一种较实用的猪精子冷冻方法，探讨了不同精子密度（0.2109、0.5109、0.7109和1109个/mL）和不同平衡时间（0.5、1、2、3h）对猪精液冷冻效果的影响。试验采用0.25mL细管进行精液冷冻，以精子活力、畸形率、质膜完整率和顶体完整率作为解冻后精子检验指标。结果显示，0.5109个/mL猪精子冷冻解冻后，精子活力、质膜完整率和顶体完整率均显著高于密度为0.7109个/mL、11

14、09个/mL两组（P0.05）。平衡2h组在精子活力和顶体完整率上明显高于平衡0.5h、1h和3h组（P0.05）。由此得出如下结论，猪精子密度为0.5109个/mL，适宜的平衡时间为2h，用0.25mL细管冷冻可获得较好的冷冻效果。关键词：猪精子 精子密度 平衡时间 精液冷冻Effects of Sperm Concentration and Equilibration Time on Cryopreservation of Boar Spermatozoa in 0.25mL StrawsLiang Hong-bin Li Jing Li Bo Han Guo Yong Liu Yun-h

15、ai Ni He-min(Department of Animal Science & Technology, Beijing University of Agriculture, Beijing, , China)Abstract：The effects of different sperm concentrations (0.2109spz/m、0.5109 spz/m、0.7109 spz/m、1109 spz/m) and equilibration time (0.5、1、2、3h) on cryopreservation of spermatozoa of boar were st

16、udied. Cryopreservation of boar semen in 0.25 mL straws, the sperm motility, morphology, membrane integrity and acrosome integrity were examined before freezing and post-thawing. When the concentration of 0.5109 spz/m was applied, the post-thawing motility, membrane integrity and acrosome integrity

17、of spermatozoa were significantly higher than the group of 0.7109 spz/m and 1109 spz/m (P0.05). The post-thawing motility and acrosome integrity of spermatozoa were significantly higher (P0.05).These results suggest that the concentration of 0.5109 spz/m and 2h equilibration are beneficial for freez

18、ing boar spermatozoa in 0.25mL straws.Key words: Boar semen, Sperm concentration, Equilibration time,semen frozen 精液冷冻和人工输精技术的应用及推广，是上个世纪以来家畜繁殖领域的重大创新和革命，对于充分发挥良种公畜的遗传品质以及保护公畜遗传资源均具有极其重要的应用价值。但到目前为止，猪冷冻精液生产由于解冻后精子活力低、受胎率低等原因，使得猪冷冻精液技术一直停留于实验室阶段，难在生产中大范围推广应用。因此，深入系统地研究猪精液冷冻机理和生产的关键技术，已经成为国内外养猪业生产中亟待解

19、决的问题，对于丰富家畜精液冷冻研究的知识也具有重要意义。精子密度的研究是精液冷冻保存技术关键技术之一，通常精子密度分为高密度、中密度、低密度三种。在猪精液冷冻的研究中，精子冻存密度一般为（510）108个/mL ，人工授精所需液态保存精子数为2030亿，冷精则需要更多，一般为5060亿。Roca1等用0.5mL细管冷冻精液，含精子量1109个/mL，解冻后进行人工授精，获得了较好的繁殖效果。Saravia2研究报道，以2109个/mL的密度冻存猪精子，冻后活力为37%46%。精子密度受冷冻承载工具体积的限制，很难到达输精量的需要，因此研究猪高密度冷冻将很有意义，高密度精液使其精子活动空间变小，

20、降低了精子的活动量和耗氧量，增加了精子营养需求。这将有可能缓解冷冻过程中对精子的损伤，提高冷冻效果。目前国内外对于这方面的报道很少，还需更多的研究来证明。平衡时间是猪精液冷冻前必要的冷冻程序，目的是使精子有一段适应低温的过程，同时使甘油充分渗透进精子体内，达到抗冻保护作用。在所有家畜中，公猪的精子对冷休克最敏感，低温打击严重影响精子的活力。缓慢的降温有利于提高精子对低温的耐受性。在室温下将精液静止一段时间对解冻后精子活力有显著提高（P0.01） 3。随着平衡时间的延长，对低温打击的抵抗能力逐渐增强，Butler4通过实验认为，猪的精子在室温放置几个小时可获得对抗冷休克的能力，在平衡27h后，大

21、部分精子提高了抗冻力。Guthrie HD5等（2005）发现平衡时间从3h增加到24h对使用冷冻解冻精液进行人工授精的23d妊娠率没有明显的影响，但是胚胎的数量从15枚降低到9枚，回收可用胚胎的比率从73%降到47%。鉴于以上现状，本试验在0.25mL细管猪精液冷冻基础上，研究了不同精子密度和不同平衡时间对猪精液冷冻解冻效果的影响，旨在探索优化猪精液冷冻程序，提高冷冻效果。1 材料与方法1.1 猪精液来源采自北京顺义浩邦种猪场的皮特兰种公猪。1.2 主要试剂 葡萄糖、柠檬酸钠、甘氨酸等，试验所用试剂，除特别指明外，均购自国内。Tris（Sigma），BSA（Sigma）。1.3 精液的采集采

22、用手握法或假阴道法采精，用4层灭菌纱布或专业滤纸过滤胶状物，采精后进行常规检查，并根据精液浓度用稀释液稀释，精液在17条件下1h内运抵实验室，并检测精子的活力、质膜完整率和顶体完整率。最后取活力在0.7以上，密度“中”，畸形率15%以下的精液用于冷冻保存试验。1.4 精液的稀释与平衡精液在室温静置lh，然后1500r/min离心10min，弃上清液。采用二次稀释法进行稀释，先在室温下用稀释液（2.1g葡萄糖、3g乳糖、0.31g柠檬酸钠、0.8g甘氨酸与20mL卵黄以三蒸水定容至100 mL）作1:1（V/V）稀释，然后将稀释精液和稀释液液一起放入4冰箱内，缓慢降温到4（约2h）。用稀释液液（

23、在稀释液液的基础上添加甘油冷冻保护剂，甘油最终浓度为3%）做1:1（V/V）稀释，保持精液最终稀释比例为1:3，再进行平衡数小时，检查精子活率，取活率在0.6以上的精液直接进行冷冻。1.5 精液的冷冻向广口塑料泡沫盒内倒入约1/3容积液氮，再放入自制的铁架，加盖后平衡 15min左右，至液面上无白色液氮蒸汽。将预处理后的精液装入经5预平衡的 0.25mL塑料细管，封口并放置于液氮面上适当高度处，加盖后使样品在液氮面上熏蒸，然后直接投入液氮保存。1.6 精液的解冻从液氮中取出精液细管，迅速浸入37 30s，轻轻摇动至融化。室温下将精液和解冻液（5g葡萄糖、0.5g柠檬酸钠、10IU青链霉素以三蒸

24、水定容至100mL）按1：3（V/V）比例混合，在37水浴孵育 30 min后，镜检精子活率。1.7 解冻后精液品质的检测1.7.1 精子活力的检测把待检精子样本稀释到1107mL，取5ul精液滴在温热的载玻片上，迅速盖上盖玻片，放在相差显微镜下计数，至少计数200个精子，计算精子活力直线运动的精子/总精子数。1.7.2 顶体完整率的检查把待检精子样本稀释到1107mL，取大约10ul精液滴在载玻片上，用另一个载玻片把精滴轻柔地涂满盖玻片，自然风干，然后用中性福尔马林固定15min，冲去固定液，风干后投入姬姆萨染缸中，染色90min，用细水冲去多余染液，风干在100油镜下观察。至少计数100个

25、精子。1.7.3 质膜完整性的检查用低渗肿胀实验（HOST） 6测定精子样本的弯尾率即是质膜的完整率。把精子样本稀释到1106mL，取500ul加入 1mL的低渗液中，37水浴温浴 60min。取5uL精液滴在温热的载玻片上，迅速盖上盖玻片，放在相差显微镜下计数，至少计数100个精子。1.7.4 冷冻后精子的体外受精实验自屠宰场采集猪卵巢，用抽吸法采集直径在25mm卵泡卵母细胞。选择胞质均匀，含有3层及以上致密卵丘细胞的卵丘-卵母细胞复合体（COC），成熟培养时，将COC以15枚一组，置于覆盖有石蜡油的成熟培养液（TCM199、10%pFF、10IU/ml hCG、10IU/ml PMSG、0

26、.1mg/ml L-半胱氨酸）滴中，于38.5、5%CO2和饱和湿度的CO2培养箱中培养。卵母细胞在成熟培养4446h后，用0.1%透明质酸酶处理体外成熟卵母细胞12min，轻轻吹打，脱去卵丘细胞，再用mTBM液清洗2次，15枚一组放入平衡的50uLmTBM中，等待受精。冻精解冻后，37水浴锅中平衡10min后，离心洗涤（1500rpm，5min），弃上清；再加入2mLDPBS液，重新悬浮精子后再离心、弃上清；加入2mLmTBM液，悬浮精子，离心弃上清；用添加肝素（200ug/mL）的mTBM液调节精子密度至1107个/mL，取50uL加入含卵母细胞的mTBM液中进行受精，受精液中精子密度为5

27、.0106个/mL。精卵共同孵育6h后，转入经隔夜平衡的PZM3培养液中洗34次。将受精卵以15枚一组，移入隔夜平衡的50uLPZM3培养液中培养。培养条件为38.5、5%CO2气相和饱和湿度；培养3d后检查卵裂率，6d观察胚胎发育情况。1.8 实验设计实验一：不同精子密度对猪精子冷冻效果的影响，通过两次不同比例的稀释，将精液分为4组，冷冻前最终精子密度为：0.2109个/mL、0.5109个/mL、0.7109个/mL、1109个/mL。实验二：不同平衡时间对猪精子冷冻效果的影响，根据实验一的结果，将精液分为4组，冷冻前平衡不同时间（0.5、1、2、3h）。1.9 数据分析采用DPS 7.0

28、5分析软件对数据进行显著性检验, 每一指标之间做差异显著性分析。相关数据采用t检验进行统计学处理。P0.05视为存在显著性差异。2 结果2.1 不同精子密度对猪精子冷冻效果的影响表1 不同密度精子冷冻后效果Table 1 Results of boar semen freezing in different sperm concentration精子密度（109个/mL）Sperm conccentration活力Motility质膜完整率/%Plasma integrity顶体完整率/%Normal acrosome畸形率/%Abnormality0.20.340.05a 27.94.0b4

29、9.94.1b35.24.2a0.50.350.04a 35.44.2a58.11.6a33.33.0a0.70.240.03b 22.01.2bc40.83.5c38.03.0a1.00.140.05c 20.21.3c38.92.3c39.52.0a注：上标含不同字母表示差异显著（P0.05） (Note: The different letters indicate the significant differences among them, P0.05)由表1可知，猪精子密度为0.2109个/mL 和0.5109个/mL时，解冻后精子活力优于密度为0.7109个/mL和1.0109个

30、/mL两组，差异显著（P0.05）。猪精子密度为0.5109个/mL时，质膜完整率和顶体完整率高于其它三组，差异显著（P0.05）。猪精子密度为0.5109个/mL时，畸形率与其它三组差异不显著。结果表明：猪精子密度为0.5109个/mL时，冷冻效果较好。2.2 不同平衡时间对猪精子冷冻效果的影响表2 不同平衡时间对猪精子冷冻效果的影响Table 2 Effects of boar semen freezing in different equilibration time平衡时间（h）Equilibration time活力Motility质膜完整率/%Plasma integrity顶体完

31、整率/%Normal acrosome畸形率/%Abnormality0.50.200.04b 26.25.7a44.46.7b33.84.6a10.270.04b 29.13.1a43.65.0b33.83.4a20.350.04a 33.08.9a 51.86.8a 32.25.6a 30.220.04b 26.44.2a41.24.6b34.45.5a注：上标含不同字母表示差异显著（P0.05） (Note: The different letters indicate the significant differences among them, P0.05)由表2可见，在活力上平衡2

32、h组明显高于平衡0.5h、1h和3h组，差异显著（P0.05），而平衡0.5h、1h和3h组之间无明显差异。顶体完整率以平衡2h组最高（51.86.8%），与平衡0.5h、1h和3h组之间存在差异（P0.05）。平衡2h组的质膜完整率和畸形率均好于平衡0.5h、1h、和3h组，但差异不显著。2.3 体外受精结果表3 冷冻和新鲜精液体外受精能力的比较Table 3 Compare between the frozen and fresh semen on the developmental ability after IVF 组别 Group活力Motility 卵母细胞数 No.treatme

33、nted oocytes 卵裂率/% Cleavagerate鲜精0.75 327 42.84.0a（141/327）冻精5 226 37.71.8a（86/226）注：上标含不同字母表示差异显著（P0.05） (Note: The different letters indicate the significant differences among them, P0.05)结果表明，新鲜精液和冷冻精液经体外受精后在卵裂率上无显著差异（P0.05）。3 讨论 3.1不同精子密度对猪精子冷冻效果的影响在精液冷冻过程中，调整精子密度是一个必要的过程，但精子密度的高低是否对冷冻效果产生影响，高密度

34、冷冻是否可以提高冷冻效果，还不是很清楚。Woelders7等用猪精液进行冷冻，冷冻密度为1.5109个/mL组，解冻后精子活力、活率和顶体完整率低于密度为0.15109个/mL的组。本试验用0.25mL细管冷冻精子密度为0.5109个/mL时，解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率、畸形率均获得了良好的效果，优于精子密度为1109个/mL。这与文献报道的基本一致。但与芮荣8等用0.25mL细管高密度精液冷冻结果存在差异。原因可能是冷冻程序或冷冻液不同。从本试验结果看，高密度的猪精液冷冻可以提高冷冻效果，但对高密度精液的范围问题，是否是密度越高冷冻效果越好，以及高密度精液提高冷冻效果的机制问题还

35、未系统的研究，今后还需要更加深入的研究从而提高和稳定冷冻效果。3.2不同平衡时间对猪精子冷冻效果的影响平衡时间是影响冷冻复苏精子存活率的一个重要因素。对于不同动物来说, 甘油透过精子细胞膜的速度是不同的，对低温耐受性也是不同的。在所有家畜中，猪精子对低温打击和冷冻都很敏感，但随着平衡时间的延长，对低温打击的抵抗能力逐渐增强，所以目前多采用2h4h平衡。实验证明，延长平衡时间可进一步增加对低温打击的抵抗力。Marco F9等的研究表明，牛精子平衡120min可获得较高的精子运动度。李亚辉10等在对食蟹猴精子冷冻平衡时间的研究表明，30min平衡可获得比较高的精子运动度。在猪精子方面大部分研究者采

36、用120 min平衡时间。这与本试验的研究结果相一致。另外，平衡时间受冷冻载体的容积和精子密度的影响，容积越大或密度越高，精液平衡时间越长，反之，平衡时间越短11。在实际生产过程中应根据冷冻载体的容积或精子密度的变化，调整平衡时间适宜的范围，从而达到最佳的精液冷冻效果。试验结果表明，猪精子密度为0.5109个/mL，用0.25mL细管冷冻适宜的平衡时间为2h。参考文献1 Roca J,Carvajal G,Lucas X,et al.Fertil-ity of weaned sows after deep intrauterine insemination with a reduced number of frozen-thawed sperm-atozoa.Theriogenolo-gy,2003,60:77-87 2 Saravia F,Wallgren M, Nagy S, et al. Deep freezing