细菌诊断学ppt课件

1、细菌学诊断根底韩惠瑛第一部分 绪论微生物包括非构外型：体积小，不具备细胞构造，必需在活细胞内才干增殖，如病毒。原核细胞型：仅有核质，无核膜和核仁，缺乏完好细胞器，如细菌、螺旋体、支原体真核细胞型：细胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色体，完好的细胞器，如真菌微生物的分布广利与弊-能引起人和动物发病的细菌称为病原菌微生物的开展史19世纪中叶开展为一门科学，实践是从发明显微镜之后发现了微生物世界1、形状学时期，17世纪末至19世纪中叶近200年2、生理学及免疫学时期3、近代微生物时期一、细菌根本形状球菌：单球、双球、 链球、葡萄球菌杆菌：短杆、长杆、棒杆、梭杆等。螺菌：弧菌、螺旋菌等。第二部分 细

2、菌根本形状与构造1、球菌 链球菌：留意其链状陈列，链的长短，个体的形状。 葡萄球菌：留意其无一定次序，无一定数目，不规那么地堆放在一同的形状。双球菌：两辆相连，呈肾壮、扁豆状或毛尖状双球菌diplococcus脑膜炎萘瑟菌肺炎双球菌+葡萄球菌 Staphylococcus葡萄球菌电镜片葡萄球菌革兰氏染色+葡萄球菌Staphylococcus链球菌Streptococcus(Hemoculture)猪链球菌的形状+四联球菌Tetracoccus八叠球菌Sarcina2、杆菌bacillus，bacilli菌体呈圆柱形或近似卵圆形,杆菌的种类很多，其长短、粗细及显微镜下的笼统很不一致。大肠杆菌 E

3、.coli大肠杆菌 E.coli沙门氏菌 Salmonella.sp大肠杆菌(SEM)沙门氏菌salmonella(SEM)布氏杆菌Bacterium burgeri G- 铜铝假单胞杆菌绿脓杆菌G-产气荚膜梭菌Clostridium perfringens产气荚膜梭菌(SEM)乳酸杆菌lactobacilli结核杆菌Tbc (SEM)枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis (SEM)单核细胞增生性李氏杆菌(SEM)炭疽繁衍体(SEM)空肠弯曲杆菌(SEM)双歧杆菌鼻疽杆菌细直、微弯两端钝园的G-杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌在动物体内的形状炭疽杆菌蜡状杆菌炭疽杆菌禽分支杆菌结核分支杆菌

4、李氏杆菌鼠伤寒沙门氏菌 (x 20,800)肉毒杆菌C. botulinum白喉棒状杆菌大肠杆菌 E. coli (0157:H7志贺氏痢疾杆菌 (x 22,400)3、螺旋状菌spirillum菌体呈弯曲或螺旋状的园柱形，两端圆或尖突又可分弧菌和螺菌两种弧菌vibrio：菌体只需一个弯曲，呈弧形或逗点状，螺菌spirillum：菌体较长，有两个以上的弯曲，捻转呈螺旋状螺旋状菌spirillum螺菌弧菌霍乱弧菌 (x 15,575)梅毒螺旋体Microspironema pallidum钩端螺旋体二、细菌的构造内部构造细胞浆核蛋白体核体核质质粒间体内含物芽孢细胞膜菌毛表层构造外部附件鞭毛细胞壁

5、荚膜按分布部位大致可分为习惯上：细菌的构造根本构造特殊构造细胞壁、细胞膜、细胞浆、核物质、核糖体和内含物等细菌根本生命活动中所必需各种细菌都具有的构造 如荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等与根本生命活动没有多大关系并不是一切细菌都有这些构造细胞质间体菌毛荚膜细胞膜鞭毛内含颗粒核糖体核体细胞壁/外膜假设存在细胞壁(Cell wall)细胞壁位于细菌细胞最外层，贴近胞浆膜之外，是一层无色透明，坚韧而具有一定弹性的膜状构造。细菌细胞壁化学组成构造不同，将细菌分为 -革兰氏阳性菌 G+ -革兰氏阴性菌 G-革兰氏阳性菌细胞壁方式图革兰氏阴性菌的细胞壁方式图革兰氏阳性菌和阴性菌细胞壁电镜图革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌

6、Gram stain of Gram + Staphylococcus cellsGram stain of Gram - E. coli cells 细菌芽孢破伤风芽孢杆菌 Bacillus tetani细菌荚膜粘液层鞭毛荚膜普通染色光镜察看肺炎球菌荚膜三、细菌的营养细菌的化学组成：水70-90%、固形物10-30%细菌的营养物质：水、糖类、蛋白质、无机盐、生长因子四、细菌的生长繁衍条件：营养、温度、酸碱度、浸透压、气体环境繁衍方式与速度：简单的二分列式。缓慢期、对数期、稳定期、衰老期。五、细菌的新陈代谢酶在新陈代谢中作用：胞内酶、胞外酶呼吸类型，对氧的需求：专性需氧菌、专性厌氧菌、兼性厌氧

7、菌代谢产物：糖-糖发酵实验、甲基红实验、伏-普实验。蛋白质-吲哚实验、硫化氢实验、尿素实验、硝酸盐复原实验。其他代谢产物：无机酸、有机酸、氨基酸、醇类、脂类、维生素、抗生素、毒素。第三部分 细菌病的诊断程序 一、诊断的根据畜禽细菌性病少数可根据流行情况、临床病症做出诊断，如破伤风。畜禽细菌性病多数在流行情况调查、临床病症、病理剖解的根底，结合实验室诊断做出最后确诊。诊断方法有：显微镜检查光镜、电镜、病原的分别培育、血清学抗体检测、病原的分子生物学检测。 二、细菌实验室诊断内容流 程无菌操作贯穿一直病料的采集和运送病料处置细菌的分别与接种细菌的培育鉴定病料采集涂片、染色镜检染色及形状特征分别培育

8、察看培育特性挑取可疑菌落纯培育食物中毒的呕吐物或疑似剩余食物涂片、染色、镜检生化实验毒素检测细菌分别鉴定程序血清学实验动物实验血清学实验分子生物学动物实验病料的采集1、病料采集根本原那么采样所用器械应事先消毒。无菌操作贯穿一直。对急性死亡的动物，从耳尖或四肢末梢血管取血制成涂片，染色镜检，在排除炭疽后方能剖检取样。要分别病原菌，应采集到含菌最多的组织脏器。采集的病料要尽能够齐全，除了内脏、淋巴结和部分病变组织外，还应采取脑组织和骨髓，以防脱漏。病料应新颖，动物死后，应立刻采集，夏天不宜超越6-8小时，冬天不应迟于24小时。采集、包装和送检过程中要留意平安，做好个人防护和环境消毒，防止病原菌的分

9、散。做好记录和标志采集的病料内脏器官血液粪便浓汁皮肤和粘膜脑和脊髓胆汁肠和胃乳汁流产胎儿2、病料采集方法液体资料的采集内脏皮肤及羽毛胎儿检出形状与染色上具有特征性的病原菌，有助于病原的初步诊断或确诊，如痰液检出抗酸性分支杆菌形状学检查特定部位的标本直接涂片染色后镜检分别培育 在细菌学诊断中，分别培育是不可短少的一环。 主要是在含许多细菌的病料或培育物中挑选出某种细菌。 选择适宜于所分别细菌生长的培育基、培育温度、气体条件等。同时应严厉按无菌操作程序进展实验，并做好标志。分别培育的目的分别培育时应留意2、细菌的分别培育无菌采集的标本污染的标本选择或鉴别培育基选择适宜的培育基是分别出病原菌的重要环

10、节固体或液体培育基大多数细菌37经1624h可构成可见菌落少数生长缓慢的细菌需13周才干构成可见菌落。如布氏杆菌、结核杆菌等绵羊布氏杆菌和流产布氏杆菌初次分别时，须在5%10%的CO2环境中才干生长根据细菌对气体的要求适当的气体环境油镜的运用细菌抹片的制备几种常用的染色方法培育基的制造细菌生长外形的察看细菌的生化性状察看药物敏感实验五、细菌抹片的制备玻片预备 抹片 枯燥 固定 染色 镜检六、几种常用的染色方法1、革兰氏染色法原理利用细菌的细胞壁组成成分和构造的不同。革兰氏染色法是细菌学中广泛运用的重要鉴别染色法，经过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性细菌G+和革兰氏阴性细菌G两大类。 链球菌革兰

11、氏染色链球菌革兰氏染色脓疱中金黄葡萄球菌革兰氏染色Gram stain of Staphylococcus aureus in pustular exudate组织细胞白细胞内的葡萄球菌葡萄球菌创口感染革兰氏染色涂片2、抗酸染色法抗酸杆菌类普通不易着色，需用强浓染液加温或长时间才干着色，但一旦着色后即使运用强酸、强碱或酒精也不能使其脱色。其缘由一是细菌细胞壁含有丰富的蜡质分支菌酸，它可阻止染料透入菌体内着染，但一旦染料进入菌体后就不易脱去；二是菌体外表构造完好，当染料着染后即能抗御酸类脱色，假设胞膜及胞壁破损，那么失去抗酸性染色特性。萋-尼Ziehl-Neelsen氏染色法 结核杆菌抗酸染色3

12、、瑞特氏染色法 九、细菌生长外形的察看霍乱弧菌在TCBS的平板上的菌落特征伤寒沙门菌在CHROM agar显色培育基上的菌落特征梭菌在CCFA培育基上的生长特性布鲁氏菌的菌落炭疽芽孢杆菌的菌落鼠疫耶氏菌菌落禽霍乱菌菌落 枯草芽胞杆菌菌落 链球菌的溶血环在血液琼脂平板构成的菌落较大，多数致病菌株能构成溶血。溶血景象-溶血草绿色溶血-溶血菌落周围构成明显的全透明溶血环-溶血不溶血十、细菌生化实验察看生化实验前进展纯度检查检查方法镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形状与染色特性均须符合该菌种的特性。1糖发酵管接种：2蛋白胨水接种：吲哚实验。3葡萄糖蛋白胨水接种：接种两管，分别作MR实验和VP实

13、验。4尿素琼脂接种5枸橼酸盐琼脂接种1、生化实验检验工程包括6醋酸铅琼脂接种：应接近管壁穿刺7半固体琼脂接种：穿刺线应在培育基中央，不断刺到管底，拔出穿刺针时应顺原穿刺线取出，切不可左右滑动，以免影响察看结果。以上培育基接种后，在各管管壁上标志菌种号码，然后置于37温箱培育23d。糖培育基应每日察看一次尿素培育基接种的细菌量多时，普通在培育后数小时内出现结果1糖发酵实验：凡培育基变为黄色者，表示该菌发酵此糖产酸以表示；凡培育基变黄并含气泡者，表示该菌发酵此糖产酸产气以表示；凡培育基不变色者，表示该菌不发酵此糖以表示。生化特性的察看不产酸不产气产酸 不产气产酸产气2吲哚实验：取蛋白胨水培育管先加

14、乙醚少量，塞紧棉塞摇振试管，使乙醚与培育液充分混匀，静置片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁参与吲哚试剂23滴。凡在乙醚层内出现玫瑰红色者为阳性反响，不变色者为阴性反响。色氨酸 吲哚 玫瑰吲哚 吲哚试剂 3MR实验：取经23d培育的葡萄糖蛋白胨水培育管，参与MR试剂数滴5滴左右。凡液体呈红色者为阳性反响，呈黄色者为阴性反响橙黄色者为可疑反响。甲基红-甲基红+对照4V-P实验：取另一支葡萄糖蛋白胨水培育管，先加V-P试剂甲液6甲萘酚酒精溶液3 mL，再加VP试剂乙液40KOH溶液1mL，充分摇匀后静置于试管架上在数分钟内出现红色者为阳性反响，不出现红色者应放在37继续察看12h，依然不变色者判为阴性。葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 氧化 二乙酰 胍基化合物 红色化合物 葡萄糖丙酮酸 乙酰甲基甲醇 5枸橼酸盐利用实验：察看经23d培育的枸橼酸盐琼脂管能否有细菌生长，并察看其颜色变化。凡有细菌生长，培育基变为天蓝色者，为该菌利用枸橼酸盐否那么为阴性反响。