高效液相色谱涉及的数据处理基本公式解析

1、高效液相色谱涉及的数据处理基本公式解析（宁波大学海洋学院赵百添）保留时间tR被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间，用tr表示，常以分（min）为时间单位。溶质通过色谱柱所需时间，即待测组分从进样到出现峰最大值所需的时间。调整保留时间tR扣除死时间后的保留时间，也称折合保留时间。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR只决定于组分的性质，因此，tR（或tR）可用于定性分析。反映了被分析的组分与色谱柱中固定相发生相互作用，而在色谱柱中滞留的时间，它更确切地表达了被分析组分的保留特性。死时间tM不被

2、固定相滞留的组分，从进样到出现最大峰值所需的时间。关系：tR=tr+tM保留体积W从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积，又称为洗脱体积。V=Fxtr死体积Vm不被固定相滞留的组分，从进样到出现最大峰值所需的流动相体积。Vm=Fxtm调整保留体积VR扣除死体积后的保留体积。VR=VrVm或Vr=FXtR7.分配系数K指一定温度下,处于平衡状态时，组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比，以K表示。分配系数反映了溶质在两相中的迁移能力及分离效能，是描述物质在两相中行为的重要物理化学特征参数。分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在条件（流动相、固定

3、相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm很小）时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。因此，只有尽可能减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。在同一色谱条件下，样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离，因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。在HPLC中，固定相确定后，K主要受流动相的

4、性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值，以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的。8.容量因子K“分配”平衡时，固定相中溶质量与流动相中溶质量之比，称为容量因子。对于有效的色谱分离，色谱柱必须具有保留溶质的能力，而且还能使不同溶质之间达到足够大的分离。色谱柱的容量因子是溶质与色谱柱相互强度的直接量度。k=tr/tm=VRVm9.分离度R色谱分析的目标就是将混合物中的各组分分离，两个相邻色谱峰的分离度定义为两峰保留时间差与两峰峰底宽平均值之商。R=2(tR2-tR1)/(W+W)10.分离因子a2/1表示在相同色谱操作条件下，两个相邻组分的调整保留时间或者调整保留体积数值之比，表征了色谱柱对样品分离的选择性。a2/1=tR2/tR1=VR2/VR111.理论板数n22n=16(tf/Wd)=5.54(tR/Wh/