动物蛋白质的胃蛋白酶消化率(体外消化)

1、动物蛋白质的胃蛋白酶消化率（体外消化）一、适用范围：本方法适用于动物性原料品质的判定。二、原理：用脱脂的样本在一个热的胃蛋白酶溶液中，稳定地不断搅拌约16小时，予以消化。测定它的蛋白质含量。这种方法不能用于植物蛋白质饲料原料或混合饲料，因为，它们所含复杂的碳水化合物是不能被胃蛋白酶消化的。将溶解了的蛋白质全部作为可消化的，并用其对粗蛋白质的百分率来表示。三、设备：i恒温水浴振荡器：土C。2测定粗蛋白质的全套设备。3过滤装置。4索氏脂肪浸提器。四、试剂：除测定粗蛋白质用的试剂外，尚需以下试剂：1胃蛋白酶溶液的配制：先稀释盐酸到。在使用前，现配胃蛋白酶溶液。2、所有胃蛋白酶应具有1：300的0活性

2、。3加热稀盐酸至一C,然后加入胃蛋白酶轻轻地搅动，使其溶解（此时不要加热！）。即得在盐酸中的胃蛋白酶溶液。五、测定步骤：、准确称取脱脂试样，放入碘量瓶内，加入经过预热（一C）的胃蛋白酶溶液，盖好塞子，在5下边搅拌边消化小时，消化后用滤纸过滤，然后用温水洗净滤纸上的不消化物。将不消化物连同滤纸转入消化管中，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定不消化物中的粗蛋白质含量。2、另取1份脱脂分析试样，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定其粗蛋白质含量。然后，根据消化的和不消化的粗蛋白质含量计算出试样的胃蛋白酶消化率。六、测定结果计算与分析：1、计算：动物蛋白质胃蛋白酶消化率（）X式中：一试样中粗蛋白质的含量（）

3、。试样中的不消化物粗蛋白质的含量（）。；%羽毛粉应在2、分析：合格的鱼粉，其粗蛋白质的胃蛋白酶消化率应不小于以上。植物油脂检验不皂化物测定法GB5535-85植物油脂检验不皂化物测定法GB5535-85本标准适用于商品植物油不皂化物的测定。油脂中不皂化物即油脂皂化时，与碱不起作用的，不溶于水的物质，包括留醇，脂溶性维生素的色素等。一、仪器和用具：锥形瓶：250ml冷凝管恒温水浴锅电炉分液漏斗：250ml量筒：50ml索氏抽提器电热恒温烘箱烧杯、试剂瓶等天平：感量0.001g二、试剂：1.0N氢氧化钾乙醇溶液0.5N氢氧化钾水溶液乙醇、乙醚中性乙醚乙醇混合液(2：1)三、操作方法：称取混匀试样5

4、g(W)注入锥形瓶中，加1.0NKOH乙醇溶液50ml,连接冷凝管，在水浴锅上煮沸约30min，煮到溶液清澈透明为止。用50ml蒸馏水将皂化液转移入分液漏斗中，加入50ml乙醚，趋温热时猛烈摇动1min后，静止分层。将下层皂化液放入第二只分液漏斗中，每次用50ml乙醚提取两次。合并乙醚提取液，加水20ml轻轻旋摇，待分层后，放出水层，每次再加水20ml猛烈振摇洗涤两次。先后用0.5NKOH水溶液和水各20ml，充分振摇洗涤一次，如此再洗涤两次。最后用水洗至加酚酞指示剂时不显红色为止。用索氏抽提器回收乙醚，将抽提瓶中的残留物在105C温度下烘1h，冷却称重,再烘30min，直至恒重为止。将儿重后

5、的残留物溶于30ml中性乙醚乙醇中，用0.02N氢氧化钾滴定至粉红色。四、结果计算：油脂中不皂化物含量按下列公式计算：不皂化物()=100(W厂028VN)W式中：W1残留物重量，gW试样重量，gV滴定所消耗的氢氧化钾溶液体积，mlN氢氧化钾溶液的当量浓度0.28每毫克当量的油酸重量，g双试验结果允许差不超过0.2%，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第一位。过氧化值的测定一、适用范围：本方法适用于油脂及动物性原料的测定二、原理：油脂氧化过程中，产生的过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘；以硫代碘化钾，加水溶解，必要时微热加速溶三氯甲烷，加冰乙酸，混匀。称取硫代硫酸钠（）水中，缓缓煮沸

6、分钟，冷却。放置两硫酸钠溶液滴定，计算含量。三、试剂：1、饱和碘化钾溶液：称取解，冷却后贮于棕色瓶中。现用现配。2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取43硫代硫酸钠标准溶液：（或无水硫代硫酸钠），溶于周后过滤备用。4、1%淀粉指示剂：称取可溶性淀粉沸水中调匀，煮沸，现用现配。四、测定步骤：精确称取一混匀的样品，置于乙酸混合液，使样品完全溶解；加入1.并轻轻振摇，然后在暗处放置硫酸钠标准溶液滴定，至淡黄色时，加1终点。同时作空白试验。五、测定结果的计算与分析：1、计算：5加入少许水调成糊状倒入碘量瓶中，加三氯甲烷冰00饱和，碘化钾溶液。紧密塞好瓶塞，取出加水，摇匀。立即用硫代淀，粉指示剂，继续滴定至蓝色

7、消失为（）0X式中：一样品的过氧化值，样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积，空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积,硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度,硫代硫酸钠相当于碘的克数。2、分析：油脂新鲜，其过氧化值不应大于0.1。5%附：硫代硫酸钠标准溶液的标定1、标定：精确称取于烘小时至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中,溶于水，加碘化钾及硫酸溶液（），摇匀，于暗处放置淀粉指示液加水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时加,继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。同时作空白试验。2计算m(V1-V0)0.04903式中：一硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度，重铬酸钾之质量，。硫代硫酸钠溶液之用量，。空白试验硫代硫酸钠标准溶液之用量

8、，0与硫代硫酸钠标准溶液【当的以克表示的重铬酸钾的质量。挥发性盐基氮的测定（VBN）（半微量定氮法）一、原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。二、试剂：氧化镁混悬液（10g/L）：称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。硼酸吸收液（20g/L）盐酸（）或硫酸（）的标准滴定溶液。甲基红一乙醇指示剂（）次甲基蓝指示剂（1g/L）临时将上述两种指示液等量混合为混合指示剂。三、仪器：半微量定氮器微量滴定管：最小分度0.01ml四、分析步骤：试样处理：将试样

9、除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀，称取约10.0g，置于锥形瓶中，加100ml水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液帜置冰箱备用。蒸馏滴定：将盛有10ml吸收液及5滴6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管的下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取5.0ml上述试样滤液于蒸馏器反应室内，加5ml氧化镁混悬液（10g/L），迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏5min即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液（0.010mol/L）或硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。五、计算结果：试样中挥发性盐基氮的含量按式进行计算。（V厂V2）C14100m5/100式中：X试样中挥发性盐

10、基氮的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）V1测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ml）V2试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ml）c盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L）14与1.00ml盐酸标准滴定溶液c（HCI）=1.000mol/L或硫标准滴定溶液c（1/2H2SO4）=1.000mol/L相当的氮的质量，单位为毫克（mg）m试样质量，单位为克（g）计算结果保留三们有效数字。六、精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。三甲胺的测定一、原理：试样中总的含氮量减去载体及水溶氮的含氮量，再除以系数1

11、0.即0为3氯化胆碱的含量。二、仪器与试剂：同粗蛋白质的测定。三、测定步骤：1精确称取左右样品测其含氮量，即为总氮。总2精确称取左右样品，放入带有定性滤纸的漏斗中，用蒸馏水冲洗次左右，取出滤纸及残留物烘干，以凯氏定氮法测定含氮量，即为载体含氮量03精确称取左右样品，用蒸馏水溶解，定容0放置小时后,取上清液进行蒸馏，测其含氮量，即为水溶氮0四、测定结果的计算与分析：1、计算：氮化胆碱含量三甲胺的含量水溶氮的含量59142允许差：两次平行测定结果绝对值不大于1%，取其算术平均值为测定结果乌洛托品鉴别（六次甲基四胺）一、试剂和材料：氢氧化钾；硫酸溶液：6+1；00钠氏试剂；氨制硝酸银溶液：称取硝酸银

12、，置于烧杯中，加水溶解，在不断搅拌的同时滴定氨水溶液，至棕色沉淀几乎全部溶解后，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存；红色石蕊试纸：变色范围（红f蓝）；二、鉴别方法：水剂样品，称取约实验室样品，加水，为试验溶液。粉剂样品，称取约实验室样品，加水溶解，过滤，弃去滤渣，为试验溶液。在试验溶液中，加硫酸溶液，于电炉上加热、煮沸，用沾有氨制硝酸银溶液或钠氏试剂的试纸检验产生的蒸汽，观察试纸颜色，若试纸颜色变黑，则加入氢氧化钾，继续加热产生的蒸汽能使润湿的红色石蕊试纸变蓝，证明有甲醛和氨产生，判定样品中含有六次甲基四胺。油脂值的测定方法一、原理：油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的

13、化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。二、试剂：水溶液：准确称取溶于水中，并稀释至（如不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至），相当于0三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）及，用水溶解，稀释至0氯仿（分析纯）；丙二醛标准溶液：称取513四乙氧基丙烷，溶解后稀释至，此溶液每相当于丙二醛，置于冰箱内保存。准确吸取，稀释至，此溶液每相当于丙二醛，备用。三、操作步骤：标准曲线的绘制准确吸取每相当于丙二醛的标准溶液置于纳氏比色管中，加水至总体积为，加入溶液，然后按样品测定步骤进行，测

14、得光密度绘制标准曲线。样品测定：准确称取融化均匀的油脂样品5-1，0置备于100有，盖相三角瓶内，加入25三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态，如冷结即在C水浴上略微加热使之融化后继续振摇）用双层滤纸过滤，除去油脂。滤液重复用双层滤纸过滤一次。准确移取上述滤液置于比色管内，加入溶液，混匀，加塞,置于C水浴内保温，取出，冷却，移入小试管内，离心，上清液倾入25，纳相氏比色管中，加入5，氯相仿，摇匀，静置，分层，吸出上清液于波长比色，对照标准曲线得到微克数（同时做空白试验）。四、计算丙二醛含量（）备05m式中：从标准曲线查得丙二醛的微克数（）样，品质量（备）光密度式中：)k532(Vi+V

15、宀VmV1油脂用三氯乙酸定容体积，取滤液体积,加体积,1000饲料中粗脂肪的测定一、适用范围：本方法适用于各种单一、混合、配合饲料和预混料。二、原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取风干试样中的脂肪，计算样品的失重。其中失重除脂肪外，还有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。三、仪器设备：1、实验室用样品粉碎机或研钵。TOC o 1-5 h z2分析筛：孔径（目）。3分析天平：感量。4电热恒温水浴锅：室温一。5干燥箱：。一t。6索氏脂肪提取器（带球形冷凝器）：或。7滤纸：中速、脱脂。8干燥器：用变色硅胶为干燥剂。9棉线绳。四、试剂：无水乙醚（分析纯）。五、试样的选取

16、和制备：取具有代表性试样，用四分法缩减至，粉碎至目。六、测定步骤：1、将棉线绳剪成适当大小置于无水乙醚中浸泡24小时（注意密闭、防火）后取出，晒干备用。将滤纸置于C干燥箱中干燥小时，取出称其恒重。、将待测试样粉碎过目后，取适量于C干燥箱内干燥分钟，制成风干样品。3用分析天平精确称取风干试样，置于预先标号恒重的滤纸中包好,并用处理好的棉线绳系好。、滤纸包放于抽提管内，在抽提瓶中加入一无水乙醚，在一干的水浴中加热，使乙醚回流。待3小时左右（油高的5小时）用滤纸检查抽提管流出的乙醚，挥发后不留下油迹为抽提终点。5取出试样后，置于恒重的铝盒内，于C干燥箱内，恒重分钟，并将棉线剪去，置于干燥器中冷却分钟

17、后，称重。七、测定结果的计算和表达：1、风干样中粗脂肪含量：其中：为风干试样重，g为滤纸恒重，。为铝盒恒重，。为烘后铝盒滤纸包重，。、原样中粗脂肪含量：（原样中水份含量）X风干样中粗脂肪含量、重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果粗脂肪含量在10以%上（含10）%允许相对偏差为3%；粗脂肪含量在10以%下时，允许相对偏差为5%。油脂酸败试验（间苯三酚试纸法）一、仪器和用具：恒温水浴锅电炉锥形瓶：，插有长玻璃管的胶塞移液管、棕色瓶等二、试剂：间苯三酚试纸：取长、宽的滤纸条，浸入间苯三酚乙醇溶液中，浸泡约后取出，阴干，装入棕色瓶中备用。直径约的大理石颗粒或碳酸钙。盐酸3、操作方

18、法：取间苯三酚试纸条安置在锥形瓶胶塞的玻璃管内，再取试样注入锥形瓶中，加盐酸，摇匀，立即加入大理石粒，塞紧胶塞，在约5的水浴中放置，试纸变红为阳性，表示有醛类存在，试样已发生酸败；试纸呈黄色或橙色时为阴性。玉米脂肪酸值的测定一、原理：在室温下用无水乙醇提取玉米中的脂肪酸，用标准氢氧化钾溶液滴定，计算脂肪酸值。二、试剂和材料：、无水乙醇、酚酞-乙醇溶液（，H=0.O，H=0.除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5乙醇。）：酚酞溶于（氢氧化钾乙醇标准滴定溶液氢氧化钾标准储备液的配制：的蒸馏水（约）0密闭放置。吸取上层清液至另一聚乙烯塑料瓶称取氢氧化钾，置于聚乙烯容器中，先加入少量无溶解，再将其稀释至中

19、。c（KO）H=0.精确称取在烘不含蒸馏水中,氢氧化钾标准储备液的标定并在干燥器中冷却后的邻苯二甲酸氢钾0溶于滴加酚酞乙醇指示剂滴，用配制的氢氧化钾标准储备液滴定至微红色，以不褪色为终点，记下所耗氢氧化钾标准储备液数（1,同时做空白试验（不加邻苯二甲酸氢钾，同上操作），记下所耗氢氧化钾标准储备液数，（）。1000m按下式计算氢氧化钾标准储备液浓度。）（V1-V0）204.22式中：4、c（KO）H准确移以2乙醇稀释定容至三、仪器与设备O氢氧化钾标准储备液浓度，换算系数称取邻苯二甲酸氢钾的质量，-滴定所耗氢氧化钾标准储备液体积，-空白试验所耗氢氧化钾标准储备液体积，邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，注：

20、氢氧化钾标准储备溶液按要求定时复标氢氧化钾乙醇标准滴定溶液已经标定好的氢氧化钾标准储备液，用，盛放于聚乙烯塑料瓶中，临用前稀释。具塞磨口锥形瓶移液管：乙0微量滴定管：，最小刻度为；，最小刻度为天平：感量为振荡器：往返式，振荡频率为次四、分析步骤：1、试样处理：称取约试样，精确到0于具塞磨口锥形瓶中，并用移液管准确加入无水乙醇，置往返式振荡器上振荡，频率为次。静置，在玻璃漏斗中放入折叠滤纸过滤，并加盖滤纸。弃去最初几滴滤液，收集滤液以上。2测定：精确称取滤液于锥形瓶中，加不含的蒸馏水，滴加滴酚酞乙醇指示剂后，用的氢氧化钾乙醇标准溶液滴定至呈微红色，不消褪为止。记下耗用的氢氧化钾乙醇溶液体积（）注

21、：样品提取后一定要及时滴定，滴定应在散射日光或日光灯下对着光源方向进行，滴定终点不易判定时，可用已加去蒸馏水后尚未滴定的提取液作参照，当被滴定液颜色与参照相比有色差时，即可视为已到滴定终点。3空白试验：取无水乙醇于锥形瓶中，加不含的蒸馏水，滴加滴酚酞乙醇指示剂，用的氢氧化钾乙醇溶液滴定至呈微红色,不消褪为止。记下耗用的氢氧化钾乙醇溶液体积（）五、结果计算：脂肪酸值（/I】220*（V厂V0）CX-10匚m100w式中：滴定试样所耗氢氧化钾乙醇溶液体积，滴定空白所耗氢氧化钾乙醇溶液体积，氢氧化钾乙醇溶液的准确浓度，提取试样用无水乙醇的体积，用于滴定的滤液的体积，换算为（干）试样的质量，试样的质量

22、，试样水分百分数，即每试样中含水分的质量，六、结果表示：每份试样取两个平等样进行测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果保留小数点后一位数。七、重复性：同一分析者对同一试样同时进行两次测定，结果差值不超过氟的测定离子选择性电极法原理：氟离子选择电极的氟化镧单晶膜对氟离子产生选择性的对数响应，氟电极和饱和甘汞电极在被测试液中，电位差可随溶液中氟离子的活度的变化而改变，电位变化规律符合能斯特方程式（2.303RTF）c。与呈线性关系。为该直线的斜率（C时为）。在水溶液中，易与氟离子形成络合物的三价铁（）、三价铝（+及硅酸根（离子干扰氟离子测定，其他常见离子对氟离子测定无影响。在测量溶液的酸度为用总

23、离子强度缓冲液消除干扰离子及酸度的影响。试剂和溶液试剂均为分析纯；实验室用水应符合中6三8级2用水的规格；全部溶液贮于聚乙烯塑料瓶中。称取乙酸钠（乙酸（、调节至3（、称取柠檬酸钠（容量瓶，加水至刻度。乙酸钠溶液）,溶于约水中，待溶液温度恢复到室温后，以7移入容量瓶，加水至刻度。柠檬酸钠溶液），溶于约水中，加高氯酸（），移入总离子强度缓冲液乙酸钠溶液（1、与柠檬酸钠溶液（2、等量混合，临用时配制。（）盐酸溶液量取盐酸（），加水稀释至。氟标准溶液氟标准贮备液：称取经C干燥冷却的氟化钠（）2溶于水，移入容量瓶中，加水至刻度，混匀，贮备于塑料瓶中，置冰箱内保存，此液每毫升相当于im氟标准溶液：临用时准

24、确吸取氟贮备液10液每毫升相当于氟。氟标准稀溶液：准确吸取氟标准溶液10.每毫升相当于氟。即配即用。仪器、设备氟离子选择电极：测量范围X甘汞电极：23型2或与之相当的电极于容量瓶中，加水至刻度，混匀。此于容量瓶中，加水至刻度，混匀，此液,型或与之相当的电极。磁力搅拌器氟酸度计：测量范围型或3与之相当的酸度计或电位计分析天平：感量纳氏比色管：容量瓶：00超声波提取器。试样制备取具有代表性的样品，以四分法缩分至约，粉碎，过孔筛，混匀，装入样品瓶，密闭保存，备用。分析步骤氟标准工作液的制备吸取氟标准稀溶液、，再吸取氟标准溶液、，分别置于容量瓶中，于各容量瓶中分别加入盐酸溶液，总离子强度缓冲液，加水置

25、刻度，混匀。上述标准工作液的浓度分别为、u试液制备a饲料试液制备（除饲料级磷酸盐外）精确称取约含氟的试样（精确至）,置于纳氏比色管中，加入盐酸溶液，密闭提取（不时轻轻摇动比色管），应尽量避免样品粘于管壁上，或置于超声波提取器中密闭提取，提取后加总离子强度缓冲液，加水置刻度，混匀，干过滤。滤液供测定用。b磷酸盐试液制备准确称取试样（精确至）置于容量瓶中，用盐酸溶液溶解并定容至刻度，混匀。取溶解液至容量瓶中，加入总离子强度缓冲液，加水至刻度，混匀。供测定用。测定将氟电极和甘汞电极与测定仪器的负端和正端联接，将电极插入盛有水的聚乙烯塑料烧杯中，并预热仪器，在磁力搅拌器上以恒速搅拌，读取平衡电位值，更

26、换23次水，待电位值平衡后，即可进行标准液和试样液的电位测定。由低到高浓度分别测定氟标准工作液的平衡电位。同法测定试液的平衡电位。以平衡电位为纵坐标，氟标准工作液的氟离子浓度为横坐标，用回归方程计算或半对数坐标纸上绘制标准曲线。每次测定均应同时绘制标准曲线。从标准曲线上读取试液的氟离子浓度。分析结果计算和表述饲料中氟含量计算饲料（除饲料添加剂级磷酸盐外）按式计算出试样中氟的含量：TOC o 1-5 h z,501000,=50m1000m式中：试样中氟的含量，/P试样中氟的浓度，/，试样质量，粉；测试液体积，l磷酸盐按式计算出试样中氟的含量：=50I000竺=1000m10005m结果表示每个

27、试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，结果表示到。7.允许差同一分析者对同一饲料同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的相对偏差在试样中氟含量小于或等于时，不超过；在试样中氟含量大于时，不超过饲料酸结合力的测定方法仪器设备：酸度计，恒温磁力搅拌器，温度计，微型植物试样粉碎机，恒温水浴锅，250ml与1000ml容量瓶，酸式滴定管，250ml烧杯，分样筛，铁架台，玻棒。试剂：1.00mol/L的盐酸：取80ml浓度为36%37%的浓盐酸，用1000ml容量瓶进行定容，再用硼砂进行滴定，滴加盐酸或NaOH校准浓度。标准缓冲剂：pH4.00(25C)与pH6.86(25C)两种。饲料样

28、品：采取一定数量的玉米、豆粕、小麦、菜粕、棉粕、次粉、小麦麸、鱼粉、磷酸氢钙、石粉、乳清粉、酸化剂、玉米蛋白粉、肉粉等饲料样品，粉碎并通过一定规格的分样筛。测定方法：粉碎的样品进行筛分(v0.25mm)，后用四分法取样。准确称取10.0g于干燥洁净的250ml的烧杯中，加入90ml的去离子水，在恒温水浴中加热，至温度达到37C1C左右，取下放在磁力搅拌器上，打开搅拌开关进行搅拌，并插入温度计控制温度在37C1C内。将酸度计电极插入溶液中，待pH值恒定后记下此数据。然后，用标准1.00mol/LHCL逐步进行滴定，每次滴1ml，滴入后至pH值恒定时记录数值。GB5524植物油脂检验皂化值的测定一

29、、定义：在规定条件下皂化1g油脂所需的氢氧化钾毫克数为皂化值。二、原理：在回流条件下将样品和氢氧化钾-乙醇溶液一起煮沸，随后用标定的盐酸溶液滴定过量的氢氧化钾。三、试剂：所有试剂必须是分析纯级，使用水为蒸馏水或与其相当纯度的水。1、氢氧化钾：大约0.5mol/L氢氧化钾溶解在95%（V/V）乙醇中。此溶液应为无色或淡黄色。通过下列步骤可制得稳定的无色溶液。将8g氢氧化钾和5g铝片入在1L乙醇中回流1h,立刻蒸馏。将需要量的氢氧化钾溶解于蒸馏物中，静置数天，然后倾出清亮的上层清液而除去碳酸钾沉淀。将此液贮存在配有橡皮塞的棕色或黄色玻璃瓶中备用。2、盐酸标准滴定溶液：c（HCI）=0.5mol/L

30、3、酚酞10g/L溶于95%（V/V）乙醇，或碱性蓝6B20g/L溶于95%（V/V）乙醇。4、助沸物：玻璃珠或瓷粒。四、仪器：1、锥形瓶：容量250ml，耐碱玻璃制成，带有磨口。2、回流冷凝管：带有连接锥形瓶的磨玻璃接头。3、加热装置：如水浴锅、电热板或其他适合的仪器，不能用明火加热。4、滴定管：容量50ml，最小刻度为0.1ml。5、移液管：容量25ml。五、步骤：1、称取2g，准确到0.005g的试验样品于锥形瓶中。注：以皂化值170200为依据，被测样量为2g。对于其他范围皂化值，样量将以约一半氢氧化钾乙醇溶液被中和为依据而改变。2、用移液管将25.0ml氢氧化钾-乙醇溶液加到试样中，并加入一些助沸物，连接回流冷凝管与锥形瓶，并将锥形瓶放在加热装置上慢慢煮沸，不时摇动，油脂维持沸腾状态60min。难于皂化的需煮沸2