紫外吸收法测定核酸含量_第1页
紫外吸收法测定核酸含量_第2页
紫外吸收法测定核酸含量_第3页
紫外吸收法测定核酸含量_第4页
紫外吸收法测定核酸含量_第5页
已阅读5页，还剩2页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、实验十六 紫外吸收法测定核酸含量 目的要求 学习紫外线（UV）吸收法 测定核酸浓度 的原理。 1实验原理 核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。为每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。该法操作简便，迅速，并对被测样品无损，用量也少。 2试剂和器材试剂：钼酸铵过氯酸沉淀剂：取3.6mL 70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水中，即成0.25%钼酸铵2.5%过氯酸溶液。5-6%氨水：用25-30%氨

2、水稀释5倍。 材料 酵母RNA干粉。 请节约使用。 每八个同学用一份， 即50 ml/8人31.准确称取待测核酸样品0.5g，加少量0.01mol/L NaOH调成糊状,再加适量水，用5-6%氨水调至pH7.0，定容至50mL。2.取两支离心管，甲管加入2mL样品溶液和2mL蒸馏水，乙管加入2mL样 品溶液和2mL沉淀剂。混匀，在冰浴上放置30min。 3.在3000r/min下离心10min。从甲、乙两管中分别吸取0.5 mL上清液，用蒸馏水定容至50mL。选择厚度为1cm的石英比色杯，在260nm波长处测定A值。 4.测定A280的值。求出A260/A280.判断RNA的纯度。 RNA=A260/A280=2.0操作方法 4二、计算公式 A260 RNA浓度 = x N 0.024 x L 式中， A260为甲管稀释液在260nm波长处A值减去乙管稀释液在260nm波长处A值； L 比色杯的厚度，1cm； N 为稀释倍数； 0.024每毫升溶液内含1gRNA的A值； 1mL待测样品液中核酸（微克） 核酸 1mL待测样品液中制品的毫克数 在本实验中，1mL待测液中制品量为50g。 51. 紫外分光光度计使用前要预热。2. 比色皿应成套使用，注意保护,不能拿在光面上。3. 离心机使用前必须将离心管平衡，对称放置。调速必须 从低到高，离心完等转子完全停下后，再打开盖子，然 后

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论