实验三 水体富营养化程度的评价

1、实验三水体富营养化程度的评价富营养化(eutrophication)是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入 湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水 质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。在自然条件下，湖泊也会从贫营养状态过渡到富 营养状态，沉积物不断增多，先变为沼泽，后变为陆地。这种自然过程非常缓慢，常需几千 年甚至上万年。而人为排放含营养物质的工业废水和生活污水所引起的水体富营养化现象， 可以在短期内出现。水体富营养化后，即使切断外界营养物质的来源，也很难自净和恢复到 正常水平。水体富养化严重时，湖泊可被某些繁生植物及其残骸淤塞，

2、成为沼泽甚至干地。 局部海区可变成“死海”，或出现“赤潮”现象。植物营养物质的来源广、数量大，有生活污水、农业面源、工业废水、垃圾等。每人每 天带进污水中的氮约50 g。生活污水中的磷主要来源于洗涤废水，而施入农田的化肥有50% 80%流入江河、湖海和地下水体中。许多参数可用作水体富营养化的指标，常用的是总磷、叶绿素-a含量和初级生产率的大 小(见表7-1)。表水体富营养化程度划分富营养化程度初级生产率- m2 -日-1总磷，ig L1无机氮ig L1根贫01360.0050.1001.500一、实验目的掌握总磷、叶绿素-a及初级生产率的测定原理及方法。评价水体的富营养化状况。二、仪器设备及试

3、剂1.仪器可见分光光度计。移液管：1mL、2mL、10mL。容量瓶：100mL、250mL。锥型瓶：250mL。比色管：25mL。BOD 瓶：250mL。具塞小试管：10mL。玻璃纤维滤膜、剪刀、玻棒、夹子多功能水质检测仪2.试剂过硫酸铵(固体)。浓硫酸。1 mol/L硫酸溶液。2 mol/L盐酸溶液。6 mol/L氢氧化钠溶液。1%酚酞：1g酚酞溶于90mL乙醇中，加水至100mL。丙酮冰(9:1)溶液。酒石酸锑钾溶液:将4.4gK(SbO)C4H4O6 -1/2H2O溶于200mL蒸馏水中，用棕色瓶在4C 时保存。钼酸铵溶液：将20g(NH4)6MO7O24 -4H2O溶于500mL蒸馏水

4、中，用塑料瓶在4C时保 存。抗坏血酸溶液：0.1 mol/L (溶解1.76g抗坏血酸于100mL蒸馏水中，转入棕色瓶， 若在4C时保存，可维持一个星期不变)。混合试剂：50mL 2 mol/L硫酸、5mL酒石酸锑钾溶液、15mL钼酸铵溶液和30mL抗 坏血酸溶液。混合前，先让上述溶液达到室温，并按上述次序混合。在加入酒石酸锑钾或钼 酸铵后，如混合试剂有浑浊，须摇动混合试剂，并放置几分钟，至澄清为止。若在4C下保 存，可维持1个星期不变。，溶解后转入250mL容量瓶(12)磷酸盐储备液(1.00mg/mL 磷)：称取 1.098 gKH2PO4中，稀释至刻度，即得1.00mg/mL磷溶液。(1

5、3)磷酸盐标准溶液：量取1.00mL储备液于100mL容量瓶中，稀释至刻度，即得磷含 量为10p g /mL的工作液。三、实验过程磷的测定原理在酸性溶液中，将各种形态的磷转化成磷酸根离子(PO43-)。随之用钼酸铵和酒石酸锑钾 与之反应，生成磷钼锑杂多酸，再用抗坏血酸把它还原为深色钼蓝。神酸盐与磷酸盐一样也能生成钼蓝，0.1g/mL的神就会干扰测定。六价铭、二价铜和亚 硝酸盐能氧化钼蓝，使测定结果偏低。步骤水样处理：水样中如有大的微粒，可用搅拌器搅拌23min，以至混合均匀。量取 100mL水样(或经稀释的水样)2份，分别放入250mL锥型瓶中，另取100mL蒸馏水于250mL 锥型瓶中作为对

6、照，分别加入1mL2mol/LH2SO4, 3g(NH4)2S2O8，微沸约1h，补加蒸馏水使 体积为2550mL (如锥型瓶壁上有白色凝聚物，应用蒸馏水将其冲入溶液中)，再加热数分 钟。冷却后，加一滴酚酞，并用6mol/LNaOH将溶液中和全微红色。再滴加2mol/LHCl使粉 红色恰好褪去，转入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，移取25mL至50mL比色管中，加 1mL混合试剂，摇匀后，放置10min，加水稀释至刻度再摇匀，放置10min，以试剂空白作 参比，用1cm比色皿，于波长880nm处测定吸光度(若分光光度计不能测定880nm处的吸 光度，可选择710nm波长)。标准曲线的绘制：

7、分别吸取10p g /mL磷的标准溶液0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、 2.50、3.00mL于50mL比色管中，加水稀释至约25mL，加入1mL混合试剂，摇匀后放置10min， 加水稀释至刻度，再摇匀，10min后，以试剂空白作参比，用1cm比色皿，于波长880nm处 测定吸光度。结果处理由标准曲线查得磷的含量，按下式计算水中磷的含量:PP=Wp/V式中，PP为水中磷的含量，g/L； wp为由标准曲线上查得磷含量，Mg; V为测定时吸取水 样的体积(本实验V=25.00mL)。生产率的测定原理绿色植物的生产率是光合作用的结果，与氧的产生量成比例。因此测定水体中的氧可看 作对

8、生产率的测量。然而在任何水体中都有呼吸作用产生，要消耗一部分氧。因此在计算生 产率时，还必须测量因呼吸作用所损失的氧。本实验用测定2只无色瓶和2只深色瓶中相同 样品内溶解氧变化量的方法测定生产率。此外，测定无色瓶中氧的减少量，提供校正呼吸作 用的数据。实验过程取四只BOD瓶，其中两只用铝箔包裹使之不透光，这些分别记作“亮”和“暗”瓶。 从一水体上半部的中间取出水样，测量水温和溶解氧。如果此水体的溶解氧未过饱和，则记 录此值为pOi，然后将水样分别注入一对“亮”和“暗”瓶中。若水样中溶解氧过饱和，则缓 缓地给水样通气，以除去过剩的氧。重新测定溶解氧并记作pOi。按上法将水样分别注入一对“亮”和“

9、暗”瓶中。从水体下半部的中间取出水样，按上述方法同样处理。将两对“亮”和“暗”瓶分别悬挂在与取水样相同的水深位置，调整这些瓶子，使 阳光能充分照射。一般将瓶子暴露几个小时，暴露期为清晨至中午，或中午至黄昏，也可清 晨到黄昏。为方便起见，可选择较短的时间。暴露期结束即取出瓶子，逐一测定溶解氧，分别将“亮”和“暗”瓶的数值记为pOl 和 Pd。3. 结果处理呼吸作用：氧在暗瓶中的减少量R =pOi- pOd净光合作用：氧在亮瓶中的增加量Pn=pOl -pOi总光合作用：Pg=呼吸作用+净光合作用=(pOi-pOd)+(pO广pOi)=pOl-pOd计算水体上下两部分值的平均值。通过以下公式计算来判

10、断每单位水域总光合作用和净光合作用的日速率：把暴露时间修改为日周期Pg，(mg O2L-1 日-1) = Pg x每日光周期时间/暴露时间将生产率单位从mg O2 /L改为mg O2 /m2，这表示1 m2水面下水柱的总产生率。为此 必须知道产生区的水深：Pg(mg O2 m-2 日-1) = Pg X每日光周期时间/暴露时间X 103x水深(m )103是体积浓度mg/L换算为mg/m3的系数。假设全日24 h呼吸作用保持不变，计算日呼吸作用R (mg O2 m-2 日-1) = R X 24/暴露时间(h ) X 103X 水深(m)计算日净光合作用：Pn (mg O2 .L-1日-1)=

11、日 Pg-日R假设符合光合作用的理想方程(co2 + h2o-ch2o +O2 )，将生产率的单位转换成固 定碳的单位:日 Pm (mg C m-2 日-1)=日 Pn (mg O2 m-2 ,0-1)X 12/32叶绿素-a的测定1.原理测定水体中的叶绿素-a的含量，可估计该水体的绿色植物存在量。将色素用丙酮萃取， 测量其吸光度值，便可以测得叶绿素-a的含量。实验过程将100500mL水样经玻璃纤维滤膜过滤，记录过滤水样的体积。将滤纸卷成香烟状， 放入小瓶或离心管。加10mL或足以使滤纸淹没的90%丙酮液，记录体积，塞住瓶塞，并在 4C下暗处放置4 h。如有浑浊，可离心萃取。将一些萃取液倒入1cm玻璃比色皿，加比色皿 盖，以试剂空白为参比，分别在波长665nm和750nm处测其吸光度。加1滴2mol/L盐酸于上述两只比色皿中，混匀并放置1min，再在波长665nm和750nm 处测定吸光度。结果处理酸化前：A=A665-A750，酸化后：Aa=A665a-A750a在66