实验三 紫外分光光度法测定色氨酸的含量

1、湖北工程学院生命科学技术学院实验报告课程：学号：姓名：分数：实验(三)紫外-可见分光光度计实验目的紫外可见分光光度计是一种历史悠久、覆盖面很广、在有机化学、生物化学、药品 分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得 到了极其广泛的应用。因此通过此实验，可以了解UVPROBE仪器的实验结构和实验原 理，简单操作步骤和注意事项，会用光度计仪器来分析样品镀膜的透射率，来达到工作 上对镀膜性质分析的需要。实验原理物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长 的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有 各自不同

2、的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因 此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长 处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效 手段。物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，而且物质对光的吸收是具有选择性的。 各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能 量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也就 是紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lamber

3、t-Beer)定律。即物质在一定 浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。实验器材及试剂台式电脑，紫外-可见分光光度计，5ppm Cyadox溶液、5ppm邻苯二胺溶液、5ppm 2-硝基酚溶液置于棕色容量瓶中。实验步骤首先打开电源的总开关，然后打开电脑，等电脑待机状态的时候再打开光度计 仪器的开关。要预热五到十分钟，然后打开软件，进入软件的操作界面。然后初始化，点击菜单的“M”，在“测定”菜单中中的波长范围中改变参数， 开始选择900，结束选择300。然后选择吸收或者透射，点击“baseline”按键， 然后点击“connect”按键，开始初始化。估计需要5分钟。结束后，其他的不用改变。点击

4、确定，即改变参数成功。在仪器中，打开门，然后放入干净的玻璃片和镀膜的玻璃片，而不只是镀膜的 玻璃片，这样的目的是消除玻璃片本身对光透射的影响。放置好以后关闭门。在操作面上点击“start”按钮，系统仪器会自动扫描，然后 通过光电倍增管放大信号，传到电脑然后转化为图像，显示在图像区。大致4-6分钟，扫描结束，操作面图像区显示扫描图像，会有高低起伏的，因 为我们选择的是透射分析和吸收分析，所以高峰区代表在对应的波段时该镀膜 对其吸收最小，即透射最大，而吸收最小。保存实验数据和图像。进行实验数据分析。关闭软件，关闭电脑，然后再关闭实验仪器的开关，最后关闭电源的总开关。注意事项开机的时候一定要预热5-

5、10分钟。在实验的时候一定要记得先初始化，来矫正。否则实验数据不精确，会有偏差。在放置镀膜的玻璃片的时候，记得一定要放干净的玻璃片在里一个窗口，这样 的目的是形成对比，只改变一个参数，消除玻璃片本身对光透射的影响。实验结束后关闭总电源。实验数据和处理实验总结附录A功能应用广泛由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。到目前为止， 几乎化学元素周期表上的所有元素(除少数放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。灵敏度高由于新的显色剂的大量合成，并在应用研究方面取得了可喜的进展，使得对元素测定的灵敏度有所 推进，特别是有关多元络合物和各种表面活性剂的应用研究。选择性好

6、目前已有些元素只要利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定，如钻、铀、镍、铜、银、 铁等元素的测定，已有比较满意的方法。分析成本低、操作简便、快速因此目前仍广泛地应用于化工、冶金、地质、医学、食品、制药等部门及环境监测系统。附录B应用检定物质：根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长雒ax和摩尔吸收系数澹是检定物质的 常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸 收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。与标准物及标准图谱对照：将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光 谱

7、。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对 照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。比较最大吸收波长吸收系数的一致性：由于紫外吸收光谱只含有23个较宽的吸收带，而紫外光谱主要是分子内的发色团在紫外区产 生的吸收，与分子和其它部分关系不大。具有相同发色团的不同分子结构，在较大分子中不影响发 色团的紫外吸收光谱，不同的分子结构有可能有相同的紫外吸收光谱，但它们的吸收系数是有差别 的。如果分析样品和标准样品的吸收波长相同，吸收系数也相同，则可认为分析样品与标准样品为 同一物质。纯度检验推测化合物的分子结构反应动力学研究：借助于分光光度法可以得出一些化学反应速度常数，并从两个或两个以上温 度条件下得到的速度数据，得出反应活化能。3201,2-BenzenediamineUVA/IS SPECTRUM240280Wavelength (nm)PhenoL 2-nitro- UVA/IS SPECTRUMNIST Chemistry WebBook ( HYPERLINK /chemi