水产微生物学实验：水产微生物学综合实验

1、水产微生物学综合实验实验报告一：实验设计题目：分析鱼肠道细菌的种类和组成的方法 一、目的意义 二、实验方案 三、预期问题与拟采取的解决办法实验报告二题目：水产微生物学综合实验 一、目的 二、实验内容与步骤 三、结果与分析 四、思考题： P21-六（1、4）；P28-六（1、2）； P34-六（1、2、3、4）；P38-六（1）；一、实验安排周（一）：器皿洗涤、培养基制备（见安排）、灭菌 周（二）：血清学反应（如凝集反应不能观察结果，可第二天观察）； 倒平板、划线分离（每人二套）； 液体接种（平板计数和显微计数用）：大肠杆菌 (一人一支)。周（三）：血清学反应结果观察； 斜面接种(生化反应用)：

2、产气、变形、大肠、枯草、嗜水气 单胞菌、金黄色葡萄球菌；(二人一套) 划线平板转接斜面(每人从划线平板中挑选一个单菌落接一 支斜面，作为未知菌) 平板菌落计数(二人一套) 显微计数(每人数一遍，结果取平均值)周（四）：生理生化反应接种(二人一套，见安排) 平板菌落计数结果观察(如果菌落很小，可在第五天观察) 未知菌革兰氏染色。周（五）：生理生化反应结果观察 清洗用具、写实验报告。周（一）器皿洗涤、培养基制备（见安排）、灭菌还要准备的材料：培养皿、无菌试管、无菌移液管、无菌水、血清管生理盐水、小烧杯、吸嘴周（二）：血清学反应（2人1组）步骤：1、抗血清的稀释。采取倍比稀释法。取干净小试管10支，

3、排列在试管架上，依次注明号码，每支试管加入0.2mL生理盐水。 吸取嗜水气单胞菌抗血清0.2mL加入第1管，在管内连续吹吸3次，使血清与生理盐水充分混合，然后吸取0.2mL加入第2管，同样混匀后吸取0.2mL加入第3管，依此法直至第9管，混匀后从第9管中吸取0.2mL弃去。第10管不加血清作为对照。此时从第1管到第9管的血清稀释倍数分别1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512。 2、加入抗原。从第10管开始，由后向前每支管依次加入0.2mL嗜水气单胞菌菌悬液。此时血清稀释倍数相应加大一倍。 3、抗原抗体反应。把各管混合液振摇混匀，置37过夜，观察

4、结果。 周（二）：倒平板、划线分离（每人二套）注意事项：每画一组线，接种环需灭菌一次（即每个培养皿只取材料一次）培养基：牛肉膏蛋白胨（第5组），每4人1瓶，培养皿1包周（二）：液体接种（每人1套）培养基：营养肉汤培养基（第七组）菌种：大肠杆菌接种方法：周（三）：血清学反应结果观察记录：直至第几管有可见反应？并换算成实验用 血清的抗体效价-血清稀释的倍数周（三）： 斜面接种（2人1组）培养基：牛肉膏蛋白胨斜面（第八组），每组8支。菌种：产气杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、 嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、未知菌2支接种方法：注意事项：无菌操作、注明菌种名称来自划线平板上的单菌落周（三）：平板菌

5、落计数(2人1组)培养基：牛肉膏蛋白胨固体（第5组），每组1瓶；培养皿每组1包菌种：选周（二）液体接种的大肠杆菌（2选1或混合后用）方法：十倍系列稀释至第6管 第4管至第6管的稀释菌悬液各取0.2mL，加入编好号的培 养皿，每个稀释度3个培养皿 溶化培养基，冷却至约45，倒入培养皿，轻转混匀，平 放于实验台上待完全凝固后，倒置于培养箱中培养。注意：做好记号（稀释度、实验者），无菌操作规范原液0.5ml4.5ml0.5ml周（三）：显微计数（每人2次）菌悬液：同平板菌落计数方法：要求：每人计数2次（计数板上的2个计数室），记录每次计数结果，并计算平均值（注明与哪位同学一组）周（四）生理生化反应接种(二人一套，见安排) 平板菌落计数结果观察(如果菌落很小，可继续培养24小时后观察)未知菌革兰氏染色（详细记录细菌形态、革兰氏反应结果）。 “产硫化氢试验”的第21号试管改“产H2S菌”为 “变形杆菌”； 改所有的“未知菌”为“嗜水气单胞菌”； 所有的“未知菌”应为同一