水环境保护：鱼类急性毒性试验

1、鱼类急性毒性试验 鱼类急性毒性试验(一) 试验方法：静止试验：不换水;半静止试验：至少换水一次/d;鱼类急性毒性试验定为96h(4d).（二）试验鱼的选择收集及驯养1、鱼的选择：一至二龄的鱼种为主，使用学名.2、对鱼的要求 ：（1）血统纯正，不要杂交鱼）;（2）外观无病，来自同一亲鱼的后代;（3）驯养：715d，脱氯的自来水，硬度50250mg，PH6.08.5。(4) 投喂每d喂食12次草鱼飘沙及市售饲料。鲤、金鱼枝角类或市售饵料。鲢鱼浮游生物或用面粉+大豆粉（5）环境 驯养期间：每d换水，保持1216h光照，清除粪便及全部残渣； 驯养期间：死亡率不得超过10%； 如有受伤、病鱼，应及时除去

2、,以死亡数作记录。（三）了解试验样品的资料在进行毒性试验前：了解样品的物理化学性质；掌握水溶性、蒸气压、结构、纯度，化学稳定性，电离常数等重要常数及化学分析方法。 （四）试验液的制备及浓度设计1 母液：溶于水的由蒸馏水配制；难溶于水的用超声波粉碎法制备；也可加低毒的有机溶剂（如丙铜），浓度不得超过0.1mg/L；对照组也需加与最高浓度，组相符量的有机溶剂及乳化剂。 对时间要求母液：每d或两d（稳定物质 ）配制一次，配好置低温存放。 污水液：采样后密封、低温存放（4.0C以下）样品瓶中,不留空气。3 浓度设计 不同浓度的间隔以等对数差距来设计:如: 1、1.8、3.2、5.6、10 等;更窄一些

3、的间距: 1、0、1.35、1.8、2.45、3.2等;也可几何级数作间距:如 4 3 210.5 等。（五）试验条件1、 水: 试验用水同驯养用水一样; 容器的体积应以鱼的负荷为1gL水计算; 2、 水温: 水温在2125土10之间; 3、 氧气、光照： 溶解氧不少于空气饱和度的60,每d光照保持1216h。4、停食: 试验前24h停食.（六）预备试验 预备试验:从最高全存活浓度及最低全死亡浓度之间,选择下一步正式试验的浓度范围。 以10为公比作为间隔:如：10.10.010.001mg/L;每缸中置35尾鱼,时间为2448h.（七）正式试验 1、 用软网将鱼捕出后，随机放入每个浓度组,每试

4、验鱼10尾。2 、随时观察、记录：如丧失平衡、游泳不正常、呼吸变化、体色变化等。3、 每24h记录一次死鱼的数字。4、 保持安静，尽可能避免对鱼的干扰。 预 试 验 浓度 活动的大型溞 90 0 35 0 10 0 3.5 0 1 0 0.35 5 0.035 5 0.01 5 因此进行正式试验的浓度范围应为0.35-1%.预 试 验 结 果T是试验结果时，每种浓度中活动的大型溞总数。 P是试验结果时，每种浓度中不大活动大型溞的百分数。 浓度%1234TP0555520 00.35553417150.48224312400.623112 7650.801621 4801.00000 190 0

5、.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 90 8070605040 30 20 10 . . .24h(EC500.55%)对数浓度死亡率 大型溞的半数有效浓度24hEC50的测定 5、 每日记录溶解氧、pH、水温； 6、 对照组的死亡率不得超过10%；7、表达急性试验结果的主要数据是96hr LC50值，24、48、72 h的LC50值,也要计算并在报告中以阐明。 7、对试验报告的要求在试验结果的报告中，要列出下列的资料及数据： 试验条件：静止式、半静止法，控温及曝气中情况，每缸鱼的负荷。 鱼类毒性试验观察记录试验时间 试验样品 其它资料 纯度 分子式

6、母液制备方法 母液浓度 助剂使用量 本试验采取的分析方法 观时|对照|浓度2|浓度3|浓度4|浓度5|浓度6|水温PH|溶氧|中毒24h死亡数48h死亡数72h死亡数96h死亡数 记录人：受试生物的状况：科学名称，来源，有否用药物作处理。 驯养及试验用水的特微：PH，硬度，温度、溶解氧等。试验母液的制备方法或污水的采集情况。每个浓度组中试验鱼的数量。仅有引起鱼类死亡的最高浓度。二、大型溞的急性毒性试验二、大型溞的急性毒性试验测定毒物或废水的24h或48h中毒浓度,（24h-Ec50或48h-Ec50）来反映毒物或废水的毒性大小。（一） 试验准备： 1、试验材料： 溞状溞是624h繁殖的幼溞，用

7、规定的筛网收集获得。 2、试验溶液(1)、稀释水PH 7.80，硬度25025mgL(以CaCO2表示)比例接近于4：1，溶解氧、氨气或多氯联苯等有毒的物质，配制方法如下：并不含对大型溞有毒的物质，如氯气，重金属，农药，氨气或多氯联苯等有毒的物质，氧化钙（Cacl2 。2H2O）11.76g，并加蒸馏水脱离水至1L。硫酸镁（MgSO4 7H7H2O）4.93g并加蒸馏水或脱离水至1L。碳酸氢纳（NaHCo3）2.59g溶于水并加蒸馏水或脱离水至1L。氯化钾（KCl）0.23g溶于水并加蒸馏水或脱离子水至1L。将上述四种溶液各25ml混合，并加蒸馏水或脱离子水使水总体积至1L。可加NaOH或HC

8、l溶液，调节pH值。（2）储备液的配制：将已知数据,欲测毒物溶解在一定量的稀释水，脱离子水或蒸馏水中，制备成储备液。现用现配，放置最多不应超过2d，配制溶液时，难溶于水的物质可用适当方法（如低毒溶剂）增溶或分散。（3）试验液的配制将规定量的储备液或欲测废水加入到稀释水中配制成试验液，如果是用去离子水或蒸馏水配制储备液，则每L稀释水中加入储备液的量以不多于10ml为宜。（4）水样采集采集水样时，采集瓶充满水样，不留空气；毒性试验应在采样后6h内进行；否则，应将样品立即放入低温保存（4.0 c以下），并应在试验报告中加以说明。3、试验仪器溶解氧测定仪，试管、烧杯，吸管，量筒及其它常用的实验室设备。

9、在使用前按化学实验室要求洗干净。（三）试验步骤1、向一组烧杯内加入不同体积的储备液或废水，并加入稀释水配制成试验所要求的各种浓度;2、每个容器内放20个大型溞,密度不超过每10ml 5个，每组设一个空白对照，每个容器内放相等体积的稀释水及同样数量的大型溞。（三）试验步骤 3、试验容器放在200C 暗处24h（或48 h）计算每容器中能活动的大型溞。 4、如轻微搅动试验液，15秒内不能活动的个体，即使触角仍能活动的个体也应算作是不活动的个体。 5、由试验结果确定大型溞0100%不活动的浓度范围. 预 试 验 浓度 活动的大型溞 90 0 35 0 10 0 3.5 0 1 0 0.35 5 0.035 5 0.01 5 因此进行正式试验的浓度范围应为0.35-1%. 正式 试 验 结 果浓度%1234TP055552000.35553417150.48224312400.6231127650.8016214801.00000190T是试验结果时，每种浓