浅谈NIPT的临床应用课件

1、 浅谈NIPT的临床应用产前筛查发展历程以年龄为指标的筛查中孕期血清学筛查早孕期超声及血清学产前筛查早中孕期的联合筛查胎儿游离DNA的检测用于产前筛查NIPT技术背景： 基于母血浆胎儿游离DNA的发现母体外周血含有的cffDNA，几乎全部来源于胎盘滋养层细胞；怀孕4周可检出，8周后含量上升并稳定存在；母体外周血中的cffDNA含量在5%-30%之间；孕周越大cffDNA含量越高，且与母亲体重有关半衰期短16.3min，产后2h后检测不到胎儿游离DNA：cell-free fetal DNA（cffDNA）Lancet.1997NIPT的技术基础 二代测序技术检测胎儿非整倍体导致母血浆游离DNA

2、剂量变化20% 胚胎DNA含量T21胎儿正常胎儿二代测序胎儿DNA能发现什么疾病测序深度染色体非整倍体 唐氏综合征、爱德华氏综合征等染色体微缺失微重复综合征 Digeorge综合征、猫叫综合征等单基因病 耳聋、地中海贫血、苯丙酮尿症等AAGCTTGCGACTTCAGTTAGCGCTAAGCCAGTGCATG分析总结检出率NT筛查 75% 早孕期整合筛查 85%中孕期血清学筛查 65%早中孕期联合筛查 90%检出率问题1：NIPT检测有多精准？分析总结假阳性率21/18/13三体复合假阳性率0.43%（传统超声及血清学筛查假阳性率5%左右）NIPT临床应用优势血清学筛查产前诊断NIPT无创取样

3、- 抽血孕周、预产期年龄信息质控有难度 - 依赖孕妇年龄孕周等因素，临床+实验室的质控体系较难建立蛋白指标间接反应胎儿染色体病风险有创性取样存在适宜孕周局限质控有一定难度 ：临床+实验室的经验无创取样 - 抽血孕周范围广 -12周到26周质控容易 - 不依赖孕妇年龄孕周等因素，容易建立标准实验质控体系DNA测序直接反应染色体拷贝数变化检出率、假阳性率、阳性预测值等技术指标远超传统筛查手段问题2：NIPT适合什么样的人群？各年龄的非整倍体风险风险因素T21%T18%T13%X/Y 非整倍体%其他染色体非整倍体%年龄（35岁）1.09%0.30%0.06%0.40%0.01%年龄（35岁）血清学高

4、风险0.90%0.05%0.02%0.45%0.00%年龄（35岁）血清学临界风险0.48%0.07%0.03%0.49%0.00%年龄（35岁）T18 高风险0.11%2.71%0.00%0.45%0.00%年龄（35岁）血清学低风险0.33%0.46%0.07%0.52%0.00%YA: Young Age; HR: High Risk 35岁高龄人群是NIPT最显著的受益者 临界风险及低风险人群也不容忽视数据来自某国内检测平台2012.1.1到2013.12.19的151186例检测高危（高龄和筛查高危）人群的NIPT检出效率较高T21T18T13低危高危低危高危低危高危检出率95.9%

5、97%86.5%93%77.5%95%假阳性率0.1%0.3%0.2%0.3%0.1%0.1%阳性预测值82%91%37%84%49%87%阴性预测值1:55701:10541:71941:9301:85061:4265Taylor-Phillips S, et al. BMJ Open 2016;6:但年龄高危或血清学筛查高危的孕妇按照法律规定应该建议产前诊断，而不是产前筛查NIPT的临床数据显示： T21临界风险孕妇中，T21阳性率约0.48%，远高于T21在新生儿中的阳性率(1/600-1/800) 将临界风险人群纳入NIPT适用人群，对孕妇具有很好的收益，对出生缺陷的防控也具有积极的意

6、义。血清学筛查、影像学检查显示为常见染色体非整倍体临界风险1/1000 唐氏综合征风险值 1/2701/1000 18三体综合征风险值 T18T21X/YT21T18X/YT13X/YT21T18T13多国出台NIPT指南国际专业协会发表NIPT指导意见美国妇产科医师学会（ ACOG）和美国母胎医学会（SMFM）美国遗传学咨询协会（NSGC）国际妇产科超声协会（ISUOG）国际产前诊断协会（ISPD）加拿大妇产科医师协会（SOGC）美国医学遗传学及基因组学学院（ACMG）意大利母胎医学协会中国2012年产前分子诊断新技术专家座谈会讨论NIPT技术国际权威NIPT行业指南2012.12 首次推荐

7、NIPT作为高危人群的初筛 母亲年龄超过35岁 超声结果显示非整倍体高危 生育过三体患儿 早孕期，中孕期或三联筛查、四联筛查呈现非整倍体阳性结果 父母为罗伯逊易位，并且胎儿为13三体或21三体高危国际权威NIPT行业指南2013.4 提出NIPT多胎CPM嵌合体的指导尚无法评价该方法对于三体性不一致多胎妊娠的有效性，理论上说检测效率应低于单胎妊娠，当发生双胎一胎早期流产时，结果将不准确对于嵌合体，包括局限性胎盘嵌合体，结果将不准确国际权威NIPT行业指南2014.6 NIPT与超声检查结合应用指南 早孕期检查正常后提示三种情况下孕妇可能会希望进一步筛查T21、T18、T13风险： 孕早期通过母

8、亲年龄、NT值、母血清标志物或其他超声指标计算具有高风险 母亲高龄或生育过三体患儿，而不具有其他风险指标的孕妇 希望进行NIPT一线筛查的孕妇 如果NIPT结果正常，则早孕期超声NT值和母血生化指标就不应针对T21、T18、T13进行计算 如果先前NIPT结果正常，但胎儿结构异常，就应采用核型或芯片分析进行侵入性产前诊断。 如果NIPT结果正常，就不必在“遗传超声图谱”中寻找包含指示T21的软指标，因其具有很高的假阳性率及很低的阳性符合率 如果孕妇联合血清筛查高风险或中风险时，则可探讨NIPT作为替代侵入性产前诊断的另一种检查手段。NIPT临床慎用人群慎用类型处置办法孕周不足12周的孕妇告知超

9、过12周后再来检查。高BMI孕妇，一般指体重大于100Kg的孕妇体重过重的孕妇，其血浆中游离胎儿DNA含量有可能低于目前技术检测的极限水平4%，需告知对方存在假阴性的风险。NIPT临床慎用人群慎用类型处置办法通过体外受精-胚胎移植（IVF-ET）方式受孕的孕妇告知孕妇需出示孕周为6周内的影像学检查报告：1、该报告显示为单胎，可进行无创检测，报告需在医院留底保存。2、该报告显示为多胎，则不能进行无创检测。3、无报告，无论后续影像学检测是否为单胎，存在“消失双胎综合征”风险，不能进行无创检测。有三体患儿生育史，但夫妻双方核型未知的孕妇建议夫妻双方先查明核型，并提供夫妻双方及患儿的核型报告。NIPT

10、临床慎用人群慎用类型处置办法夫妻双方任何一方为染色体病患者（除21号、18号、13号染色体）建议行产前诊断排除遗传风险。如果拒绝产前诊断，则需告知存在较高的假阳性及假阴性风险，并记录核型存档。一年内接受过异体输血、移植手术、细胞治疗的孕妇原理同“双胎消失综合征”。即，如果接受的异体输血、移植手术及细胞治疗的外来组织和细胞存在21-三体、18-三体、13-三体异常，细胞凋亡后的基因组DNA进入母亲外周血浆中，将存在假阳性风险。NIPT临床慎用人群慎用类型处置办法接受过抗体封闭治疗的孕妇抗体封闭治疗结束四周后进行无创检测。孕妇本人为恶性肿瘤患者恶性肿瘤细胞的染色体和基因组多发生变异，可能本身即为2

11、1-三体、18-三体、13-三体的异常细胞，细胞凋亡后释放基因组DNA进入母体外周血并存在于血浆中，因此存在假阳性的风险。关于规范有序开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断工作的通知产前筛查中心/机构产前筛查技术服务机构必须与有资质的产前诊断技术服务机构建立工作联系，签署双向转诊协议。在有资质的产前诊断机构指导下承担孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断采血服务的产前筛查技术服务机构须向省级卫生计生行政部门备案。服务模式管理模式抽血、检测提示三体未见异常检测后遗传咨询并解释结果，要求进行产前诊断同意不同意告知三体风险和不良后果孕妇签字常规产检侵入性产前诊断异常正常遗传咨询夫妻双方要求终止妊娠并签字夫妻双方要求继续妊娠并签字终止妊娠记录妊娠结局常规产检记录妊娠结局!NIPT检测后的阳性跟踪总结NIPT作为一种划时代的新技术已经广泛进入了临床应用新的