洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程

1、题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年 月 日修订日期：年 月日审核：日期：2015年 月 日生效日期：2016年 月 日批准：日期：2015年 月 日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境 对产品的污染。.范围：适用于本公司洁净区（室）的沉降菌的监测。.责任：沉降菌检测员。.内容：基本概念：菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU通常 用个数表示。沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专 门的培

2、养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个 / 皿表小0测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒 子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平 板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。测试方法：使用的仪器设备和培养基：高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。培养皿：一般采用小90mm 15mnffl硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121c湿热灭菌20min。培养基:胰酪大豆陈琼脂培养基。将

3、培养基加热熔化，冷却至约 45c在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每 皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入 32。叵温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8 C的坏境中存放。测试时间：对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运 行不少于10分钟后开始。对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。采样点数目及其布置：最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表 2表1最少采样点数目回积（m）洁净度等级A

4、 B级C级D级10-20-40-100- 20040103注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室,指的是房间面积。表2最少培养皿数洁净度等级所需小90mms养皿数（以沉降4h计）A14B2C2D2采样点白布置:除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气 及设备附近应考虑增加取样点和取样次数（与产品非接触区相比，这些区域应视 为关键区）：人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区，需加强监控。取样点一股布置在趾离地面之间或操作平台的高度。取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避免可能

5、对气流组织的干扰。尽量避免在回风口附近取样（距离lm以上），且测试人员应在取样口的下风 侧，并尽量少走动。测试步骤：采样方法：用无菌容器（如不锈钢储槽）将预先培养的培养皿（无菌平皿）带至待测区，将 培养皿取出，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露小时， 再将培养皿盖上，盖后倒置。检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时间。培养:全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。32培养，时间为72小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定三个培养皿做对照培养。菌落计数:用肉眼直接计数，然后用5-10 倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2 个或 2 个以上菌落

6、重叠，可分辨时仍以2 个或 2 个以上计数。注意事项：测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。采取一切措施防止人为对样本的污染。对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 TOC o 1-5 h z 测试状态:沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。沉降菌测试前，被测试洁净区己经过消毒。测试状态有静态和动态两种，在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设施设备大

7、修复产前进行静态测试，在日常监测时进行动态监测。测试人员 : 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2 个人。结果计算:用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的汁算见下式计算公式:M=n式中M为平均菌落数（CFUMi表示1, 2, 3,n号平皿菌落数；n表示平皿总数。.标准：洁净度级别沉降菌平均菌落数（CFU/M）以4h计A1B5C50D100.结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。若某洁净区的菌落数超过评定标准， 则必须对此区域先行消毒，然后重新测 试两次，测试结果必须合格。.偏差纠正一旦发现空气微生物监测结果超标，一般可以