抗体PE荧光素标记操作流程记录_第1页
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文档简介

1、bo bardxera巴德生物科技有限公司1.目的规范单克隆抗体标记荧光PE （快速标记法）标准操作程序适用范围适用于本公司抗体标记荧光PE （快速标记法）操作术语和定义藻红蛋白，简称“PE”。相对分子质量较大，约为240kD，最大吸收峰为564nm。职责和权限实验员负责实施本规范，主管负责人监督执行。实验试剂.5.1溶液配制0.01mol/L PBS溶液配制0.01mol/L Phosphate Buffered Saline， pH 7.40试剂名称配方量批号用量Water1Lbo巴德生物科技有限公司NaCl (MW 58.44)0.799gKH2PO4(MW 136.09)0.2gKCl

2、 (MW 74.55)0.2gNa2HPO4 - 12H2O (MW 358.14)2.89g调节pH 7.40后，加水定容至1.0L，再调节pH至7.40，过滤备用。Storage Buffer，pH 7.40试剂名称配方量批号用量0.01mol/L PBS/BSA0.5%NaN30.1%调节pH 7.40后，加水定容至1.0L，再调节至pH 7.40。5.2其他试剂bo巴德生物科技有限公司试剂名称厂家批号活化液（modifier）淬灭剂（quencher）PE荧光素6.操作流程6.1抗体活化将抗体用0.01mol/L PBS稀释为1mg/mL，加入 mL活化液（体积比为抗体溶液：反应活化液

3、=10:1）,旋涡振荡器混匀后，室温避光反应10min。6.2与PE反应形成共轭物将抗体混合液（步骤6.1）加入 mg PE荧光素中（加入量：抗体与荧光素质量比为1:1），在室温条件下避光反应3小时，反应开始时间： 至结束时间 ：；（或2-8度条件下避光过夜）。6.3荧光淬灭向共轭物（步骤6.2）中加入 mL淬灭剂（淬灭剂添加量按抗体体积：淬灭剂体积=10:1添加）。混匀后，室温孵育30分钟，去除游离的荧光素的荧光效应。淬灭开始时间：至结束时间：。6.4层析将共轭物（步骤6.3）层析柱分离，进一步去除游离的荧光素或抗体。bo bardxera巴德生物科技有限公司6.5保存收集得到的标记抗体（步骤6.4

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