实验三蛋白质等电点测定和沉淀反应

1、关于实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应第一张，PPT共十五页，创作于2022年6月实验目的 1、了解蛋白质的两性解离性质。 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。第二张，PPT共十五页，创作于2022年6月实验原理（一）蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：电场中移向阴极 不移动 移向阳极第三张，PPT共十五页，创作于2022年6月蛋白质的等电点: 蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，

2、蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。 不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。第四张，PPT共十五页，创作于2022年6月 本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 第五张，PPT共十五页，创作于2022年6月（二）蛋白质的沉淀 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而

3、成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类。 （1）可逆的沉淀反应 此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。第六张，PPT共十五页，创作于2022年6月 （2）不可逆沉淀反应 此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固。蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质

4、也未必都已变性。 第七张，PPT共十五页，创作于2022年6月 操作步骤（一）酪蛋白等电点的测定 1 取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀; 2 向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。 第八张，PPT共十五页，创作于2022年6月管号 蒸馏水（mL） 0.01 mol/L醋酸( mL） 0. 1 mol/L醋酸(mL) 1. 0 mol/L醋酸(mL) 18.40.628.70.338.01.047.4

5、1.6第九张，PPT共十五页，创作于2022年6月（二）蛋白质的盐析 无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。 如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。第十张，PPT共十五页，创作于2022年6月 加蛋白质溶液5 mL于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。 倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？ 将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白。 取出部分

6、清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。第十一张，PPT共十五页，创作于2022年6月（三）重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管，加入蛋白质溶液2 mL，再加3%硝酸银溶液12滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？ 第十二张，PPT共十五页，创作于2022年6月（四）某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放 置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。 第十三张，PPT共十五页，创作于2022年6月（五）有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2mL蛋白质溶