CliniMACS介绍

1、 美天旎细胞治疗平台CliniMACS系统简介第一部分、德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍第二部分、CliniMACS系统在临床细胞治疗中的应用一、CliniMACS细胞分选仪及其配件介绍二、CliniMACSCD34系统的安全性德国美天旎生物技术有限公司上海市仙霞路319号远东国际广场A栋2301室200051电话：（8621）62351005传真：（8621）62350953服务热线：8008202606北京市东城区朝阳门内大街银河SOHOD座50723室100010电话：（8610）64107101传真：（8610）64100990 HYPERLINK rMAC9Mil

2、tenyiBiotec第一部分德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍德国美天旎生物技术有限公司(MiltenyiBiotecGmbH)是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势，CD133、BDCA-2(CD303)、BDCA-4(CD304)单抗为我公司专利产品。我公司总部位于德国科隆，在科隆和德国北部罗斯托克均有cGMP生产机构。我们的产品有免疫磁珠、特异性细胞及蛋白质或者DNA/RNA

3、分选用的MACS分选设备、单克隆抗体、无菌溶液、基础和特殊培养基、血液/血浆治疗用的生物学吸附剂、LIFE18血浆分离机、流式细胞仪及相关耗材。MACS技术已成为细胞分选的标准方法，从实验室到临床，从小规模到大规模，从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群，从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞，MACS技术提供了可在每个实验室进行高品质细胞分选的方法。MACS技术原理MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司的专利产品，是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。主要组成成分为MACS微珠、MACS分选柱和MACS分选器。MACS微

4、珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒。MACS分选柱置于一个永久性磁场一MACS分选器中，可以将磁力增强1000倍，足以滞留仅标记极少量微珠的目的细胞。用缓冲液冲洗分选柱，所有未标记的细胞被冲洗掉。分选柱离开磁场，即可获得被标记的细胞组分。所有的操作在2.530分钟内即可完成，得到的细胞可立即用于后继实验。MACS技术优点1、稳定、高质量的分选使用MACS技术，可获得高纯度(90-99%)、高回收率的分选细胞群。2、对细胞无损伤50nm微珠和MACS分选柱均无毒性，对细胞无损伤，可以纯化有活力和功能活性的细胞而不影响其活性。3、操作简便、快速MACS技术操作简单，消毒方便。磁珠孵育时

5、间很短，仅需15分钟。手动分选可在30分钟内完成，autoMACS分选可在2.5-10分钟之内完成。4、从实验室到临床MACS技术可以实现从105到1011个细胞分选。如果使用频率高，可选用autoMACS；密闭系统内无菌分选细胞，可选用CliniMACSo5、分选后细胞适用于后续实验一一流式细胞术、显微镜分析和分子生物学研究显示MACS分选对细胞没有任何影响。分选后细胞适用于细胞培养和体内实验。此外，分选得到的标记和未标记细胞组分均可回收利用。6、从细胞到分子分选一一MACS技术不仅可以分选各种细胞，还可以分选转染细胞、亚细胞物质、蛋白质、DNA、RNA及mRNAoMACS分选策略有两种基本

6、的分选策略：阳性分选和去除分选。复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠，从而实现细胞亚群的分选。1、阳性分选策略(Positiveselectionstrategy)阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作为阳性标记组分直接分选出来。分选后的细胞不必去除MACS微珠，可立即用于培养或者后续操作。该方法可以将磁性标记的靶细胞富集10000倍。阳性分选策略优点：纯度高，回收率高，操作迅速、简便。MiltenyiBiotec2、去除分选策略(Depletionstrategy)去除分选是把非目的细胞磁性标记后从细胞混合物中去除的方法，即未磁性标记的细胞为目的细胞。MACS分选柱技术加

7、上强磁性标记可以去除高达4个对数级的细胞。去除分选策略适用范围：去除不需要的细胞；缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞)；不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被激惹rMAC9MiltenyiBiotec（如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析）；复合分选的一部分。3、复合分选策略：联合使用两种以上分选策略，主要用于细胞亚群的分选或者得到高纯度非常稀有的细胞。（1）去除后再阳性分选（Depletionfollowedbypositiveselection）细胞亚群的分选，可以先磁性标记非目的细胞，去除分选后对阴性组分再行磁性标记和阳性分选。适用范围：在细胞悬液中，非目的细胞也表达用来阳性选择目的细

8、胞的抗原，就需要先去除这群非目的细胞；如果要分选非常稀有细胞，先从细胞悬液中去除非目的细胞，在富集细胞的基础上，进行阳性分选，可获得高纯度目的细胞。（2）多重分选策略（MultiSortStrategy）MACS多重分选是一种根据多种表面标志磁性分选细胞的技术。多重分选中，首先用MACS多选微珠标记目的细胞，进行第一参数阳性分选。然后细胞与多选解离试剂共同孵育，后者可以将微珠从抗体上酶性解离下来。接着使用针对另一细胞表面标志的抗体一微珠复合物磁性标记阳性分选细胞。二次标记的细胞可以再次进行阳性分选或者去除分选。MACS多重分）斑&示禽图MACS选做珠磁性标记目的细胞第一次阳性分选解离阳性分选细

9、胞表面刖橙珠对分选后细胞进行针对第二标志的磯性标记二次分选（阳性分选或者去際分选） MiltenyiBiotec第二部分、细胞分离技术在临床细胞治疗中的应用一、CliniMACSPlus细胞分选仪及其配件介绍1.CliniMACSPlus细胞分选仪4丨V卩I1CliniMACSPlus（产品号:155-01,见图）是一台密闭的全自动的电动机械仪器，联合CliniMACS试剂，如CliniMACSCD34试剂（产品号:171-01）、CliniMACS管道（如产品号:161-01）和CliniMACSPBS/EDTA缓冲液（产品号:700-25）,临床上用于从人体混合细胞群体中分选出特定的细胞亚

10、群。CliniMACSPlus是一应用MACS技术的自动细胞分选仪。它是一封闭的无菌系统，可应用于临床治疗所需的大容量细胞的纯化或非需要细胞的祛除。此分选仪的主要组成包括完整的计算机系统、磁性分选单位、蠕动泵和各种操作阀。计算机系统控制仪器内所有其它部件，指导系统按设定的标准运行，执行各种重复性的程序。磁性分选单位包括一可移动的永久磁铁和分选柱支架。蠕动泵控制整个管道内的液体流速，并和操作阀一起控制缓冲液和细胞悬液的流速。结构组成及原理先在细胞准备袋内用细胞特异性抗体磁性标记靶细胞，标记后，洗涤细胞以去除多余的抗体。然后，含标记靶细胞细胞的准备袋与管道连接，后者依次连接CliniMACS缓冲液

11、袋和细胞收集袋。分选程序开始后，此分选仪运行时使细胞自动通过分选柱，随后进行一系列洗涤步骤，最后靶细胞从分选柱洗脱并收集。CliniMACSPlus分选仪和CliniMACS细胞分选系统的其他产品提供了高纯度和高回收率的大剂量细胞的分选。CliniMACS细胞分选系统包括CliniMACSPlus分选仪，CliniMACS管道，CliniMACS试齐U，和CliniMACS缓冲液。预期用途CliniMACSPlus分选仪和CliniMACS细胞分选系统是在欧洲通过CE认证的医疗仪器，可用于临床各类人体细胞的分选。CliniMACS试剂包括用于分选干细胞，单核细胞，树突状细胞（DC），NK细胞，

12、B细胞和T细胞亚群。预期治疗内容：血液系统恶心肿瘤：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、小儿神经母细胞瘤等血液系统非恶性肿瘤：再生障碍性贫血、小儿地中海贫血等自身免疫性疾病：SLE、MSc等神经系统疾病：小儿脑瘫、脊髓损伤、脑出血后遗症等心脏缺血性疾病：心肌梗塞、缺血性心肌病、不稳定性心绞痛等外周血管闭塞性疾病：肢端缺血、糖尿病足等国外的分类在欧洲国家，加拿大，和澳州,CliniMACSPlus分选仪和CliniMACS细胞分选系统有关rMACSMiltenyiBiotec产品均在医疗器械法规下注册，并分类如下：-CliniMACSplus分选仪-第二类b医疗器械CliniMACSPBS/EDTA缓

13、冲液-第二类a医疗器械CliniMACS管道-第二类b医疗器械CliniMACS试剂-第三类医疗器械在美国，CliniMACSPlus分选仪和CliniMACS细胞分选系统允许在研究药物研究申请（IDE）或研究仪器豁免申请（IND）核准下使用。可供参考文献举列一些国内外发表的论文以印证CliniMACSPlus分选仪和CliniMACS细胞分选系统的细胞分选有效性和分选不同靶细胞的临床应用如下：2.CliniMACS细胞分选仪配套设备介绍:1）低速大容量离心机（Sorvall,RC3型号或相当产品）要求：离心杯足够大适合放入装600ml的血袋，离心能控制在1925C，制动可以调节（即低速大容量

14、离心机，一般血库可能会有）。2）无菌操作台。3）可以调零的电子显示秤（精确至1克，最大称量为1000-2000克）4）软管热封口器（即热合器，Baxter公司，或类似产品）5）血浆分离夹（血库一般有此设备）6）非间断电源：如果医院有可能停电则必需准备要求：最低180VA，持续90min（APC,Smart-UPS1400I）7）摇床：（Lab-line,Model4635或相当产品）要求：转速25rpm（抗体标记时用，用手摇替代也可）二、CliniMACSCD34系统的安全性CliniMACSCD34系统TheCliniMACSCD34系统包含CliniMACSCD34试剂、CliniMACS

15、管道、CliniMACSLS管道、CliniMACSPBS/EDTA缓冲液和CliniMACSplus仪器（CliniMACS软件程序CD34SELECTION1和CD34SELECTION2用于体外从不同种类的造血干细胞群中富集人CD34阳性细胞。TheCliniMACSCD34试剂是一次性使用的、无菌的、有生物相容性的CD34抗原特异性试剂；用于磁性标记和富集CD34+细胞。TheCliniMACS管道和CliniMACSLS管道是一次性使用的、无菌的、有生物相容性的管道，包含有细胞分选柱，保证自动的细胞分选在密闭、无菌的液体通道中进行。TheCliniMACSPBS/EDTA缓冲液是无菌

16、、有生物相容性的等张缓冲液，用于体外细胞分选时的细胞洗涤和液体运输。CliniMACSplus仪器是软件控制的设备，操纵体外的细胞分选过程。CliniMACS软件程序CD34SELECTION1配合CliniMACS管道，或CD34SELECTION2配合CliniMACSLS管道使用。然而，用于体外富集人CD34+细胞的CliniMACSCD34系统对于分选的细胞和临床治疗无任何建议。人类细胞的制造和使用必需遵循国家的法律法规。结果1.2.1.R&D内部结果 fMAC9MiltenyiBiotec研发部门在常规的研发过程中进行了96次CliniMACSCD34分选。分选样本不同于临床应用的样

17、本，所用的细胞是从志愿者中采集的未动员的白细胞采集物，极少部分使用的是志愿者经G-CSF/GM-CSF动员后的全血白细胞采集物。因此，所得的数据(纯度、回收率)不能直接当作临床数据，但是可以用于分析分选过程。与临床志愿者动员后的细胞分选结果相似，CD34回收率的上、下限范围非常大，平均回收率(除外样本准备过程)75.0%，没有明显增减。CD34平均纯度78.0%，因为样本不同，不能直接比作临床数据。内部CD34起始频度比临床细胞的频度低。最终的纯度取决于仪器操作和数据输入(尤其是CD34起始频度)。相反，被动去除非CD34细胞(“-logP”)只是分选程序的一个功能，平均被动去除非CD34细胞

18、3.6log.没有明显增减。1.2.2.临床结果文献来源于同级评审的PubMed上的刊物、发表于stemcelltransplantation上的摘要，以及1997年后，CliniMACSCD34系统上市后的血液学会议；主要包括欧洲血液和骨髓移植年会(EBMT),国际细胞治疗会议(ISCT,以前称作ISHAGE)，德国输血医学会和血液免疫会议(DGTI)，德国、奥地利血液和肿瘤学会(DGHO)，以及美国血液学年会(ASH)。只有清晰地表明了CliniMACSCD34系统细胞分选的文章才是完整的。结论被分成以下几种，见表1。通常表中的数据指的是n次细胞分选的中位数。表1临床分选结果的均值Appl

19、icationPurity(%)Yield(%)Viability(%)DepletionTcells(log)DepletionBcellsnAutologousPESO96.162.596.72.46287AllogeneicPBSC976598455331090Cordblood73639549Bonemarrow97.565.195418SeparationperformancePBSC(mixedapplications)96.256999531000Rangeofvalues30-99.815.2309.853-1001.31-7.911.11-6.082448Rangeofmed

20、ians90-99.646.28695-993.7-52.46-3.6524481.3.安全性评估CliniMACSCD34试剂的生物相容性用Amgen细胞分选仪(MiltenyiBiotecGmbH也有Amgen的技术资料)进行抗体研发的临床前计划中，设备的生物相容性检测按照EN30993和ISO10993标准进行。以下检测遵循ISO10993的第一部分。.细胞毒性MiltenyiBiotecCliniMACSCD34试剂的细胞毒性检测是通过确定被试剂标记、通过CliniMACSCD34系统分选的CD34+细胞的活性来进行的。用台盼蓝染色检测细胞活性。第一个数据是Amgen细胞分选仪评估报告

21、的总结。30例分选后纯化的CD34+细胞中位活性达96%。亚慢性毒性亚慢性毒性的研究用于评估猕猴静脉内一次性输入CliniMACSCD34试剂14天后的安全性。剂量分别为0,0.6,6.0和60.0卩g/kg/天。0.6卩g/kg/天的低剂量代表了CliniMACSCD34试剂回收率100%情况下的临床回输极限剂量，中等剂量和大剂量分别是预估临床剂量的10倍和100倍。每日给予上述剂量没有导致死亡，且对体重、进食、opthalmoscopy、尿分析、血液或任何观察到的临床征象都没有影响。大剂量处理的猴子中，组织病理学检查显示肝脏和生发中心的Kupffer细胞呈现棕色，脾脏成红色果浆样。染色的成

22、分是铁，主要是由于CliniMACSCD34试剂含铁成分。急性静脉激惹本研究的目的是确定新西兰白兔一次性静脉注射CliniMACSCD34试剂的激惹能力。试剂给予组CliniMACSCD34试剂的剂量为0.01mg,对照组给予10mM生理盐水/EDTA缓冲液。动物观察8天，未发现死亡或临床不良反应。所有兔子耳静脉注射部位进行组织病理学检测，无异常发现。白兔一次性静脉注射CliniMACSCD34试剂后无激惹现象。兔子的给予剂量大约是人的50倍（大约3.3卩g/kg）。血液相容性CliniMACSCD34试剂的溶血检测用于确定试剂的溶血能力。实验样本为新鲜的人血和血浆，与未稀释的CliniMAC

23、SCD34试剂的比例为1：1,PBS/EDTA缓冲液作为介质。EDTA浓度比分选缓冲液的浓度高5倍。检测样本在37C孵育45分钟，然后离心5分钟。上清液中的血红蛋白用氰化正铁血红蛋白法定量。CliniMACSCD34试剂与人血在1：1的情况下是不溶血的，1:1的比率对CliniMACSCD34试剂来说是最大的了。抗体交叉反应研究本研究目的是确定铁/氢氧化物/右旋糖酐氧化物包被的鼠单克隆CD34抗体的特异性和可能的交叉反应。CliniMACSCD34试剂的特异性和可能的交叉反应是依据一组37个冰冻切片来评估的。CD34+KG1作为阳性对照的细胞。CD34抗体有2种浓度（2.5和0.5聘蛋白/ml

24、稀释在游离右旋糖酐铁中）.该研究条件下，CliniMACSCD34试剂特异性地与所有组织中的内皮细胞和许多组织包括真皮、宫颈粘膜、淋巴结的结缔组织和胸腺中的纤维细胞/基质内皮细胞反应，这并不意外，因为众所周知，CD34抗原表达在这些细胞的表面。该反应表明了CliniMACSCD34试剂的高度特异性。心血管安全性的研究该研究是按照美国FDA目前有效的GLP标准（21CFR,Part58）和SBiSOP标准及其协议进行的此外，还遵循ECD的GLP原理。该研究中，逐渐增加静脉给予的CliniMACSCD34试剂量。研究目的是评估恒河猴心血管参数对CliniMACSCD34试剂的急性反应。实验样本和介

25、质（磷酸盐缓冲液/EDTA缓冲液）通过静脉缓慢输入（3-6分钟），CliniMACSCD34试剂的剂量逐渐增加，分别为0.6,6.0,和60.0卩g/kg。CliniMACSCD34试剂静脉给予量逐渐增加，对平均动脉压、平均右心室压、心输出量、ECGs、呼吸和心率无药物相关的影响。动物给予的总剂量比人每公斤体重极限量多100倍。CliniMACSCD34在靶细胞上的残余量 MiltenyiBiotecJII在CD34+细胞表面残存的未结合的CliniMACSCD34试剂会增加对患者的不良反应。在用CliniMACSCD34系统进行CD34富集的过程中，每次抗体标记后都要进行洗涤。洗涤时，细胞悬

26、液离心，去除上清液。因此，未结合的CliniMACSCD34试剂和所有胶质及溶液都能够被洗掉。不过，上清液中和靶细胞上未结合的试剂可忽略不计。为评估上清液和靶细胞上结合的残存CliniMACSCD34试剂量，可用ICPAES方法确定残存的铁盒IgG浓度。结果显示如表2，进一步的数据可参考MiltenyiDR00022和DR00046.表2靶细胞上残存的CliniMACSCD34试剂CellSampleTotalinfusible(Cells+Supernatant)Ironinpg/2.5x10cellsIronpg/2.5x10BcellsIgGpg/2.5x10acellsIgGpg/kg

27、Mean(n=4)110.0250.5212530.25Max197.40306.1815.310.31Dosageof2.&x10scells/50kgbodyweight如生物相容性研究（1.3.1章）所概述的，CliniMACSCD34试剂是生物相容性的物质，即使剂量达到0.6,6.0和60.0Mg/（a按照ICPAES方法，比残存的试剂量高200倍），也未观察到全身毒性和心血管的副作用。右旋糖酐铁CliniMACSCD34系统的反应机制是以MACS（磁性细胞分选）技术为基础的。有过9年的CD34+祖细胞临床分选经验，CliniMACSCD34系统被证明是可靠、安全、有效的体外细胞分选系

28、统。CliniMACSCD34试剂作为CliniMACSCD34系统的一部分，包含鼠抗原特异性IgG单克隆抗体，共价结合了超顺磁右旋糖酐铁颗粒。这些颗粒含有低分子右旋糖酐聚合物，及Fe2+/Fe3+氧化物/氢氧化物核心.CliniMACSCD34系统富集的CD34+细胞可残留有这些右旋糖酐铁颗粒。因此，用于制造CliniMACS试剂的右旋糖酐铁的安全性得到了详尽的文献评估（见MiltenyiDR01673）。文献回顾了用于治疗缺铁综合症的各种胃肠外铁复合制剂，铁复合制剂的基本成分是低分子或高分子右旋糖酐铁，蔗糖铁和葡萄糖铁。鉴于铁复合制剂和铁复合制剂直接释放出的活性铁可引起过敏和过敏导致的严重

29、副反应，低分子右旋糖酐铁是最安全和稳定的成分。低分子右旋糖酐铁的商品名是CosmoFer,种药品，胃肠外给药剂量最大1400mg。CosmoFer类似于用于制造CliniMACSCD34试剂的低分子右旋糖酐铁成分，因此可以预见用于制造CliniMACSCD34试剂的低分子右旋糖酐铁的潜在副作用在很大程度上来说是非常低的，因为给患者回输后，残存的右旋糖酐铁剂量估计比胃肠外给药的CosmoFer的极限量低3400倍。用于制造CliniMACSCD34试剂的右旋糖酐铁的安全性经过9年的CliniMACSCD34系统的市场经验总结得到进一步证实，未见右旋糖酐铁所致的副作用报道。然而，所有CliniMA

30、CSCD34系统的客户必需通过CliniMACSCD34系统的详细产品说明文件了解任何潜在的副作用。HAMA众所周知，HAMA反应是用鼠和嵌合的单克隆抗体进行治疗后的副作用，输入鼠抗体后可能发生过敏反应。患者经过富集的CD34+细胞治疗后可能会发生免疫反应，产出针对少量残余的鼠抗体（如：CD34抗体）的抗体。不可能发生IgE反应，因为使用CliniMACSCD34试剂后，没有任何临床单位报道过过敏反应或相关的其它副作用。使用CD34试剂的研究（MiltenyiDR00533andDR00593）也未指向HAMA。为 MiltenyiBiotec安全起见，回输经CliniMACSCD34系统富集

31、的CD34+细胞后，应该监测HAMA的发生。CliniMACSCD34试剂包装内的说明书和CliniMACS用户手册都标明了HAMA反应的危险性。1.3.5.CliniMACSCD34系统的人类健康风险评估CliniMACSCD34系统的毒理学风险评估由SafeBridgeConsultantsInc.的DABT首席毒理学家AllanW.Ader博士执行。风险评估的基础是广泛的文献回顾，评估内容如下：危害鉴定暴露评估剂量相关性评估风险描述本研究鉴定了回输一定量残存CliniMACSCD34试剂（成分为右旋糖酐铁和CD34单克隆抗体）的患者发生的若干危害，以及这些成分的预估量。CliniMACS

32、CD34试剂成分的预估量如下：铁：200-300昭/人（2.7-4.0卩g/kg）右旋糖酐:200-300昭/人（2.7-4.0gg/kg）CD34mAb:10-15gg/人（0.13-0.20gg/kg）（体重75kg）CD34单克隆抗体虽然单独的CD34单克隆抗体的特异性数据很少，相关的其它产品如：Isolex磁性细胞分选系统（BaxterHealthCorp.）或Bexxar（IgG2a碘131标记的CD20抗体）有重要的临床应用、安全性和有效性的报道。另外，有充分证据（如生物相容性）支持肯定的风险-利益评估。右旋糖酐铁文献报道因50mg/天右旋糖酐铁用于治疗贫血而发生的典型的危害（如：

33、心血管、皮肤、胃肠道、血液、神经、泌尿等系统的危害），在因使用CliniMACSCD34试剂而输入残存的右旋糖酐铁时是不大可能发生的，因为后者比前者的右旋糖酐铁量最多低250倍。而且，本研究还证实与使用CliniMACSCD34试剂相关的、极低的残存右旋糖酐铁量与增加的肿瘤发生率无因果关系。结论作为CliniMACSCD34系统一部分的CliniMACSCD34试剂处理过的细胞重新回输给患者，患者将同时获得低剂量的铁、右旋糖酐铁和单克隆抗体。根据文献报道，这种剂量不可能引起任何副作用，包括致癌。用作为CliniMACSCD34系统一部分的CliniMACSCD34试剂处理过的细胞进行治疗的患者

34、都患有血液系统肿瘤，且病情严重。他们通常接受多种药物治疗和医学辅助治疗，这些都与后来的风险和副作用相关。根据许多患者的经验，除免疫耐受情况外，CliniMACSCD34试剂不是接受体外分选干细胞治疗的患者发生毒性反应的直接作用因素；事实上，这种治疗在许多病例中被证实是有益的。作为CliniMACSCD34系统一部分的CliniMACSCD34试剂的好处包括：目的细胞的高回收率，无需大量采集细胞即可达到回输的靶细胞量，造血成分的快速植入。准备做干细胞移植的患者通常患有各种致命的疾病，作为CliniMACSCD34系统一部分的CliniMACSCD34试剂的使用为这些患者提供了另外一种治疗手段，并

35、具有潜在的治疗效果（见第1.4.2章）。因而，作为CliniMACSCD34系统一部分的CliniMACSCD34试剂的使用也会在某些患者中导致抗体反应。但是利明显大于弊。MACMiltenyiBiotec1.3.6.风险处理我们已经建立详细的风险处理程序，且还在完善中，上市之前评估所有与CliniMACSCD34系统相关的可能的风险，通过MiltenyiBiotecGmbH临床部门建立的后市场监测程序鉴定并评估任何更深入的风险。每年回顾并修订风险处理报告。1.4.CD34+细胞的潜在临床应用CD34+细胞的一般背景TheCD34抗原是重糖基化的单体细胞表面抗原，分子量约116kDa.CD34

36、抗原主要表达在早期淋巴造血干、祖细胞表面，小血管内皮细胞、胚胎成纤维细胞和一些胎儿、成人的神经组织内也有表达JCD34的表达在最早期的祖细胞上达最高水平，随着成熟度的加深而降低其表达。在正常人组织中，CD34的表达仅限淋巴造血细胞，唯一的例外是毛细血管内皮细胞oCD34抗原的肿瘤表达倾向于在正常表达之后，意味着从本质上来说，所有的非造血淋巴样肿瘤是CD34阴性的。相反，大量的急性白血病是CD34阳性的：大约40%的急性髓细胞性白血病,60%的急性B淋巴细胞性白血病和1-5%的急性T淋巴细胞性白血病。与正常淋巴造血细胞的CD34早期特异性表达相一致，慢性淋巴细胞性白血病和淋巴瘤均为CD34阴性。CD34阳性细胞的临床适应症CliniMACSCD34系统上市后在自体干细胞移植中用于去除肿瘤细胞，在异基因移植中用于去除非目的异源性T淋巴细胞。骨髓瘤患者大量的随机研究显示：通过富集CD34+细胞而去除肿瘤细胞在大多数患者中没有临床效果。HLA相和异基因移植中，HLA的精细配型和免疫抑制剂应用的进展使得异基因移植无需去T也可耐受GVHD的风险。基于以上发现，CD34富集的2个主要适应症是：HLA不和的异基因干细胞移植和难治性自身免疫病患者自体干细胞移植中去除自体反应的细胞。不相和的异基因干细胞移植半相和(供者是父母，受者是子女)或组织抗原中一个或几个位点不和的亲属成为需要干细胞移植而又