四培养基配制与无菌技术

1、一、实验目的掌握微生物常规(chnggu)培养基的制备方法学习无菌技术 学习玻璃器皿的包扎实验四 微生物培养基的配制(pizh)与无菌技术 共三十五页二、实验内容1、6种培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基（细菌(xjn)）高氏一号培养基（放线菌）马丁氏培养基（真菌）淀粉培养基（淀粉水解试验）蛋白胨水培养基（吲哚试验）葡萄糖蛋白胨水培养基（V.P试验）2、 移液管、培养皿、三角瓶、试管等的包扎3、灭菌实验(shyn)四 微生物培养基的配制 无菌水的准备共三十五页三、实验原理培养基medium:用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要(xyo)配制成的营养基质。水、C源、N源、矿物质、生长因素

2、/因子、微量元素培养基种类：天然培养基、合成培养基、半合成培养基固体培养基、液体培养基、半固体培养基基础培养基、加富培养基、选择性培养基、鉴别培养基实验(shyn)四 微生物培养基的配制 共三十五页四、实验(shyn)步骤配制培养基的流程：原料称量、溶解调节pH值(加琼脂熔化)(过滤(gul)定容分装塞棉塞/扎口灭菌 共三十五页培养基分装(fn zhun)装置 共三十五页斜面(ximin)摆放法 共三十五页棉塞的做法a)棉塞的制作过程(guchng) (b)正误棉塞共三十五页培养皿的包扎(boz)共三十五页五、无菌技术(jsh)在(利用微生物)进行研究实验或生产过程中，采用物理和化学的方法技术

3、，保证培养(piyng)物不受环境微生物的污染，同时也不允许操作的微生物扩散到环境中去。如高温灭菌、过滤、紫外线照射处理等。共三十五页五、无菌技术(jsh)共三十五页灭菌(mi jn)与消毒灭菌Sterilization：用物理或化学的方法来杀死或除去材料上或环境中的所有微生物的处理。消毒Disinfection：用物理或化学的方法杀死物体上绝大部分微生物（主要(zhyo)是病原微生物和有害微生物）的处理。消毒实际上是部分灭菌。防腐(Antisepsis)：防止或抑制霉腐微生物在食品等物质上的生长化疗(Chemotherapy)：杀死或抑制宿主体内的病原微生物抑制(Inhibition)：生长

4、停止，但不死亡死亡(Death)：生长能力不可逆丧失共三十五页常用(chn yn)的灭菌方法干热灭菌热蒸汽灭菌常压灭菌过滤除菌射线(shxin)灭菌化学药物灭菌 共三十五页1、火焰(huyn)灭菌微生物接种工具(gngj)如接种环、接种针或其它金属用具等可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。这种方法灭菌迅速彻底。接种过程中，试管或三角瓶口等，也可通过火焰灼烧灭菌。共三十五页2、干热(n r)灭菌 用干燥(gnzo)热空气（160, 12h）杀死微生物培养皿、漏斗、吸管、玻璃器具、解剖刀，接种、镊子、剪刀等能耐高温的器皿晾干后用牛皮纸包好温度升到100，开箱内鼓风机培养基、橡胶塑料制品不能用此方

5、法注意安全共三十五页干热(n r)灭菌箱鼓风( fn)钮温度调节器指示灯温度调节旋扭温度计与排气孔共三十五页3、湿热(sh r)灭菌 常压蒸汽间歇灭菌 将待灭菌的培养基或物品装入常压灭菌器内，加热至100大量产生气体时,维持3060min,每天灭菌一次,连续灭菌三天.每次蒸煮间隙里,培养基或物品应放在室温(20-30)条件下培养,第一次蒸煮杀死微生物的营养体,芽孢(y bo)则在培养过程中萌发成营养体;第二次蒸煮即可杀死.经过二次培养,三次反复蒸煮,即可达到完全灭菌。常压蒸汽持续灭菌高压蒸汽灭菌共三十五页3、湿热(sh r)灭菌 常压蒸汽间歇灭菌常压蒸汽持续灭菌 常压蒸汽持续灭菌中,从蒸汽大量

6、产生开始,继续加大火力保持充足蒸汽,持续加热36h,杀死绝大部分芽孢(y bo)和全部营养体,达到灭菌目的。高压蒸汽灭菌共三十五页3、湿热(sh r)灭菌 高压蒸汽灭菌原理：水的沸点随压力的增加(zngji)而提高。水在密闭的加压蒸汽灭菌器中煮沸，产生蒸汽驱除锅内冷空气后，使蒸汽不能逸出，因而增加(zngji)了锅中的蒸汽压力。蒸汽压力提高，水的沸点随着上升，因而能够获得比100更高的蒸汽温度，用来进行有效的灭菌。同一温度下，湿热灭菌法比干热灭菌法效果好蒸汽穿透力强蛋白质含水量高，易于凝固共三十五页手提式灭菌(mi jn)锅安全阀压力表放气阀软管(run un)紧固螺栓灭菌桶筛架水共三十五页卧

7、式灭菌(mi jn)锅 共三十五页是指含菌液体或气体通过细菌滤器，使杂菌留在滤器或滤板上，从而除去杂菌。常用于许多不宜用湿热灭菌的液体物质，如抗生素、血清、糖类溶液等。用于除菌的细菌过滤器，是由孔径极小，能阻止挡的陶瓷(toc)、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.为了加快过滤,一般多采用抽气减压的方法,进行操作。4、过滤(gul)除菌 共三十五页过滤(gul)除菌 共三十五页共三十五页辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质(wzh)上的微生物的一种有效方法。用于灭菌的电磁波有微波，紫外线(UV)、X-射线和-射线等。5、射线(shxin)灭

8、菌共三十五页共三十五页酚类损伤微生物细胞壁和细胞膜、酶钝化、蛋白质变性 醇类溶解膜中的类脂，破坏膜结构，使蛋白变性（纯的或高浓度酒精使菌体表面蛋白凝固，使乙醇不易渗进细胞） 醛类与蛋白质中氨基酸的多种基团(j tun)共价结合而使其变性 酸类抑制微生物酶和代谢活性 表面活性剂改变细胞的稳定性和透性，细胞物质逸出 卤化物与细胞中的酶和蛋白质中的酪氨酸结合，Cl2和漂白粉产生次氯酸和新生态氧（强氧化剂），破坏细胞膜结构6、化学药剂消毒(xio d)或灭菌作用机理：共三十五页重金属与酶或蛋白质上的SH结合 氧化剂使细胞成份氧化 染色剂碱性染料的阳离子基团与蛋白质氨基酸上的羧基或核酸上的 磷酸基结合，

9、阻碍正常代谢 抗生素多种机理：作用于细胞壁、膜、蛋白质、核酸等大分子合成 抗代谢物竞争抑制，如磺胺类药物于对氨基(nj)苯甲酸类似，阻止叶 酸的合成 6、化学药剂(yoj)消毒或灭菌作用机理：共三十五页共三十五页墙壁(qingb)光滑，地面平坦，避免积累灰尘，便于清洗消毒；不装风扇，通风换气通过空气调节装置使用前，用2%新洁尔敏擦洗再用75%酒精（或5%石炭酸）喷雾，使灰尘落下最后用紫外灯照射约20min定期熏蒸：一年二四次 （细菌、真菌培养基检验） 用40%甲醛（610ml/m3 )或加半量高锰酸钾熏蒸，盛于铁制容器，电炉或酒精灯加热（应能随时终止热源），熏蒸后密闭12h以上，使用前12h用

10、氨水中和。 其他熏蒸剂；乳酸（对细菌）、硫磺无菌室消毒(xio d)共三十五页共三十五页升汞（ 0.1% HgCl2）漂白粉10g/150mlNaClO（2-10%）酒精75%苯酚（1%）福尔马林(f r m ln)（5%）过氧化氢（3%）氰化汞（0.1%）高锰酸钾（2%）硝酸银(0.1%)常用(chn yn)表面消毒剂共三十五页酸性培养基: 如10ml培养基中加三滴25%的乳酸 孟加拉红：0.035 g /L培养基抗菌素:金霉素（30g/ml）可抑制多数细菌;青霉素（20g/ml）可抑制G+细菌;多粘霉素（5.0g/ml）可抑制G-细菌;链霉素(40g/ml)和氯霉素(50g/ml)可抑制大

11、部细菌. 除氯霉素可灭菌前加入外，其它抗菌素都是在培养基灭菌后并冷却(lngqu)到45左右时加入. 双层培养基或盖玻片 细菌(xjn)污染的排除 抑制真菌：50100u的放线菌酮或制霉菌素共三十五页五、注意事项牛肉膏、蛋白胨等的称取淀粉、琼脂的融化分装(fn zhun)培养基不沾瓶/管口调pH标记即时灭菌共三十五页六、作业(zuy) 培养基的配制过程 灭菌的种类与原理 讨论：实验的感受、注意(zh y)点、成败的原因分析等共三十五页内容摘要一、实验目的。淀粉培养基（淀粉水解试验）。实验四 微生物培养基的配制。微生物接种工具如接种环、接种针或其它金属用具等可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。第二次蒸煮即可杀死.经过二次培养,三次反复蒸煮,即可达到完全灭菌。同一温度下，湿热(sh r)灭菌法比干热灭菌法效果好。是指含菌