木犀草素联用紫杉醇对食管癌的体内外抗肿瘤作用及机制研究

1、木犀草素联用紫杉醇对食管癌的体内外抗肿瘤作用及机制研究目的 1. 探讨木犀草素与紫杉醇在体外联用对食管癌细胞增殖、迁移、凋亡的影响及作用机制。 2. 探讨木犀草素与紫杉醇在体内联用对食管癌裸鼠移植瘤生长、凋亡的影响及分子机制 , 并对此给药方案的潜在毒性进行初步评价。方法1.采用SR收验检测木犀草素与紫杉醇联用对于食管癌细胞活力的影响。 使用细胞增殖与示踪检测试剂盒检测木犀草素与紫杉醇联用对食管癌细胞增殖能力的影响。采用克隆形成实验检测木犀草素与紫杉醇联用对食管癌细胞克隆形成的影响。 2. 采用划痕实验、 Transwell 实验检测木犀草素与紫杉醇联用对于食管癌细胞迁移的影响 ; 使用倒置显

2、微镜观察木犀草素与紫杉醇联用对食管癌细胞形态的影响 ; 采用 Western Blotting 实验检测木犀草素与紫杉醇联用对SIRT1 及 EMT相关蛋白的表达的影响。3. 使用细胞凋亡检测试剂盒检测木犀草素与紫杉醇联用对于食管癌细胞凋亡的影响 , 使用活性氧检测试剂盒检测木犀草素与紫杉醇联用对于食管癌细胞内活性氧水平的影响 , 采用 Western Blotting 实验检测木犀草素与紫杉醇联用对线粒体凋亡通路、ROS/JNK!路相关蛋白表达的影响。4.建立食管癌细胞裸鼠移植 瘤模型 , 检测木犀草素与紫杉醇联用对于食管癌裸鼠移植瘤生长的影响。通过HE染色及TUNEL色实验检测木犀草素与紫

3、杉醇联用对于食管癌细胞 体内凋亡的影响。通过HE染色实验及裸鼠体重监测对两种药物联用的潜在毒性 进行初步评价。通过Western Blotting实验检测裸鼠移植瘤组织中 SIRT1、EMT相关蛋白、线粒体凋亡通路相关蛋白、ROS/JNKffi路相关蛋白表达情况，探讨木犀草素与紫 杉醇联用的体内机制。 结果 1. 木犀草素与紫杉醇联用协同抑制食管癌细胞活力 木犀草素与紫杉醇联用协同抑制食管癌细胞增殖及克隆形成。2. 木犀草素和紫杉醇联用协同抑制食管癌细胞迁移并改变食管癌细胞形态;木犀草素和紫杉醇联用协同抑制 SIRT1 蛋白的表达, 抑制间质标志蛋白NCadherin、0-Catenin、Vi

4、mentin 的表达，促进上皮标志蛋白 E-Cadherin、 Claudin-1 、 ZO-1 的表达。 3. 木犀草素与紫杉醇联用可协同促进食管癌细胞凋亡,协同抑制抗凋亡蛋白 Bcl-2 、 Mcl-1 的表达 , 促进促凋亡蛋白Bax 的表达, 促进BH3-only 死亡因子 Noxa 的表达 , 促进 Cleaved Caspase-9 蛋白和 Cleaved Caspase-3 蛋白的表达。木犀草素与紫杉醇联用可协同提高食管癌细胞内的RO冰平，协同上调p-ASK1、p-MKK4 JNK及p-JNK蛋白的表达。4.在食管癌细胞裸鼠移植瘤模型上， 木犀草素与紫杉醇联用可以协同抑制裸鼠移植瘤的生长并诱导食管癌裸鼠移植瘤细胞的体内凋亡; 木犀草素与紫杉醇联用对食管癌裸鼠移植瘤中SIRT1、 EMT相关蛋白、线粒体凋亡通路相关蛋白、ROS/JNK!路相关蛋白的影响与体外结果 基本一致。木犀草素与紫杉醇联用对裸鼠体重没有明显影响, 对心脏、 肝脏、 脾脏、 肺、肾脏没有明显的毒性。结论1. 木犀草素与紫杉醇在体外联用时可协同调控食管癌细胞的增殖、 迁移及凋亡; 其抑制细胞迁移的分子机制与抑制 SIRT1 及细胞 EMT进程相关，其诱导凋亡的机制与ROS/JNK!路和线粒体凋亡通