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文档简介

1、植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。掌握植物组织培养基 母液的配制方法和分装原则与方法。掌握大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物质、植物激素的 配制和灭菌方法。二、仪器设备及试剂电磁炉天平（0.0001 g） 高压灭菌锅 、量筒：10ml、20ml、100ml、 500 ml 烧杯：1000ml、500 ml、250 ml、移液管：1ml、2ml、5 ml吸管若干、记号笔、三角瓶或试管、试管架锡铂纸、玻璃棒 配制好的各种母液，如大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、 生长调节剂等，个别生长调节剂要随配随用。蒸馏水、pH试纸蔗糖、 琼脂

2、等1 molL NaOH 溶液、1 mol/L HC1 溶液。三、方法和步骤量取所配培养基总体积的2/3体积的蒸馏水，如要配1升培养基， 先量取约700 m1体积的水。根据培养基配方，用量筒量取所需要的各种元素的母液。物质 加入体积或重量大量元素母液（10 x）100ml、微量元素母液（100）1 ml有机物质母液（200 x）5ml、铁盐母液（200 x）5 ml、肌醇（200 x）5 ml、蔗糖30g、琼脂7g吸取母液时，注意应先将几种母液按顺序排好，不要弄错以免使培养 基中药品成分发生改变。在培养不同的外植体时，应加入不同的激素， 如培养康乃馨侧芽或茎段时加入1ml的1mg/ml的6 B

3、A；而胡萝卜 愈伤组织培养中应加入2ml的1mg/ml的24-D。加入一种母液后应 先搅拌均匀，避免因不均而使局部浓度过高而引起沉淀，琼脂可在加 入蔗糖调节完pH值后再加入，此时应注意搅拌，以免琼脂或蔗糖沉淀 于烧杯底而炭化。调节培养基的pH值，用pH计或pH试纸测定培养基的pH按照培养材料的要求分别用ImoILNaOH溶液、ImolL HC1 溶液来调节所配制培养基的pH值，-般培养基的pH值约为5.8, 培养的材料不同，对培养基的pH值要求也不同分装加热至沸腾片刻，以使琼脂充分溶解，检查时可注意烧杯内溶液是否 透明。将配制并加热好的培养基分别装在事先洗净的三角瓶，用封口 膜封口，注明标签，然后和用牛皮纸或报纸包好的培养皿及用三角瓶 装好的蒸馏水一道进行高压灭菌。培养基的灭菌一般用医用高压锅来灭菌（方法略），本实验采用全自动高压灭菌锅。5.培养基的保存毒过的培养基通常放在接种室或培养室中保存，一般应在消毒后的两 周内用完，最好不要超过一个月。四、注意事项五、激素应在调节pH之前加入，因为有些激素是用酸或碱溶解的，在调节pH好之后加入会改变pH值pH 过酸或过碱

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