大鼠皮肤痛阈测定实验报告结果分析内容

1、大鼠皮肤痛阈测定实验报告结果分析1.实验材料1.1实验动物选用SD大鼠(SpragueDawleyrat,Inbredstrain),清洁级合格动物,体重161.63g24.92g,2月龄,雌雄各半,由成都中医药大学实验动物中心提供(合格证号:川实动管质第9号)。所有动物在实验前适应性驯养10天,进行痛阈筛选,其标准是:痛阐测定在515s左右能引起甩尾反应者用于实验,凡痛阈值高于15s或低于5s者,表示动物反应迟钝或过敏,则不纳入实验对象。本实验所有纳入实验动物的平均痛阈为8.15s2.58s。实验在成都中医药大学时间医学测试室进行,隔音、通风、恒温(221)、相对湿度60%65%、自动光暗控

2、制。所有动物均自由饮水摄食。驯养10天后用于实验。1.2主要器械及仪器设备7360型疼痛甩尾痛阈测定仪(核定电压220V,频率50Hz,电流1.25A,UGOBASILES.R.L,BiologicalResearchApparatus,意大利)。2.实验方法2.1动物分组及处理2.1.1动物分组实验开始前,将经过痛阈筛选符合实验标准的96只大鼠分别称重后,将痛阈和体重作为双重选择指标,利用SPSS12.0软件,将动物随机分为12组,每组8只,雌雄各半。其中每2组作为1个观察时间点,分别于6个相应的时间点对不同组的动物进行相应处理。所有动物提供8am8pm的人工光照,时间点分别为8am(ZT0

3、,ZT即zeitgebertime,12am(ZT4),4pm(ZT8),8pm(ZT12),12pm(ZT16),4am(ZT20)。每次实验时注意控制声、光等因素的干扰。动物适应性驯养10天后,于实验开始812点内测定所有动物的痛阈作为基础痛阈;在以上6个时间点分别对每16只大鼠进行痛阈测定,测得值作为相应时间点的术前痛阈;第三天进行动物处理,每个时间点的4个组的动物的手术及痛阈测定(术后痛阈)均同时开始进行。2.1.2动物处理每个时间点的2组动物分别作以下处理。每个时间点的动物在同一时间点同时开始进行处理。空白对照组(简称空白组):不造模,于实验开始后与其他各组用同样的方法、同样的时间捆

4、绑固定。动物总的固定时间为30min.固定结束后立即测定痛阈。截肢模型组(简称截肢组):将大鼠固定于自制固定器上,固定10min后行截肢手术,手术结束后继续固定动物,至总固定时间满30mn.固定结束后立即测定痛阈,测定痛阈完毕将动物放回笼内精心饲养。2.1.3造模方法参照文献的方法进行:右后肢皮肤,在踝关节下约0.5mm处截断右后肢,缝合皮肤。2.2痛阈测定方法筛选动物时,基础痛阈测定在上午8-12点进行。纳入实验的动物,分别在相应的时间点1h内进行痛阈测定。测定时均在同一室温条件下,分别在6个时间(08:00、12:00、16:00、20:00、24:00、04:00)对处理前后的动物的痛阈

5、进行测定。测定痛阈时由固定人员测量动物甩尾反应潜伏期,所有动物均以流水编号进行痛阈测试。本实验采用辐射热甩尾法测定痛阈,每个时间点测试时,所有动物按照流水号测定一次后,再按照流水号重复测定3次、第三次,保证每只动物每次测试间隔均在10min以上。取3次测定的平均值作为痛阈。处理前后2次测定共得到两个痛阈值,分别称为术前痛阈和术后痛阈。以痛阈变化率作为衡量针刺抗创伤痛的效应的指标之一。痛阈变化率=(术后痛阈-术前痛阈)/术后痛阈100%.创伤痛大鼠痛阈的昼夜节律实验研究。2.3统计学处理统计分析采用SPSS12.0软件进行,另外,所有数据还采用Halberg余弦法进行生物节律分析。3.结果3.1

6、截肢手术前后大鼠痛阈的总体变化情况将95只纳入实验的大鼠(驯养过程中1只大鼠死亡),分别于实验前、后分6个时间点测定其在相应时间点的痛阈,计算其痛阈变化率。截肢、电针后,在相应时间立即测定大鼠痛阈。3.2空白对照组大鼠实验处理前后痛阈的昼夜节律变化情况对截肢手术前后空白对照组大鼠各时间点的痛阈利用Halberg余弦软件单个余弦法程序进行余弦函数拟合,并分别计算其P值(P0.05表示具有明显的节律性)、中值、振幅及峰相位,结果显示大鼠痛阈具有明显的昼夜节律。由于空白对照组的痛阈变化率没有明显变化,所以不对其作节律分析。从以上图表可以看出,空白对照组大鼠痛阈在实验前后的24小时周期中具有明显的昼夜

7、节律,且与实验前的总体变化节律接近,均为白天痛阈高,夜间痛阈低,其中16点时高,0点(24点)、4点低。4.讨论早在19世纪,人类就已发现疼痛反应具有昼夜节律性。大量的临床和实验研究表明,在不同的时辰,机体对疼痛的反应性的高低并不是恒定不变的。机体的痛阈具有明显的以24h为周期的昼夜节律,如Li G等对小鼠的痛阈研究显示,夜间小鼠甩尾潜伏期更长(痛阈更高),且受体拮抗剂纳洛酮(10mg/kg,i.p.);KochHJ等研究了13例21、27岁健康受试者在6点、12点、18点和24点4个时间点对止血带压迫所致疼痛的耐受性,研究显示,24点时对压迫性疼痛的耐受性高。而且随着疼痛、镇痛的基础和临床研究的逐渐深入,其对功能的影响也越来越受到人们的关注。手术、创伤等对机体造成功能的抑制已研究很多,这种疼痛及创伤等应激所造成的机体抑制等效应,也具有明显的昼夜节律特征。时间生物学研究表明,人及动物对疼痛的敏感性均存在时间节律性,而许多镇痛*及镇痛手段的镇痛效应也具有时间节律性,如类镇痛剂夜间的镇痛效应明显优于白天