2022年Agilent1260高效液相色谱仪操作规程

1、四川中安检测有限公司作业指导书Agilent1260高效液相色谱仪操作规程文件编号 ZAJC-3T-001 批 准 人批准日期编 制 人编制日期第 1 页 共 8 页1. 目的 正确使用仪器,确保化验结果的精确度、精密度,延长仪器使用寿命；2. 范畴 适用于 Agilent1260 高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作；3. 职责3.1 操 作 人 员 ： 按 照 本 操 作 规 程 操 作 仪 器 , 对 仪 器 进 行 自 检 , 作 使 用 登 记；3.2 负责人：负责监督仪器操作是否符合规程,对仪器进行定期自检、仪器综合 治理；4. 要求 4.1 开机 4.1.1 溶剂预备 按要求预备

2、所需流淌相, 每瓶均超声 10min 排气,将原先浸泡在甲醇中的滤 头取出对应放在各个流淌相中 （A：二次蒸馏水； D:缓冲溶液； B:色谱纯甲醇 C：色谱纯乙腈）；4.1.2 开启工作站 4.1.2.1 启动运算机打开运算机电源,登陆 4.1.2.2 启动工作站windows 操作系统；打开 Agilent 1260 各模块电源, 待 Agilent 1260 各模块自检完成后 各模块右上角指示灯为黄色或者无色 进入工作界面；模块右上角状态灯颜色说明：,点击屏幕桌面图标 “ HPLC -1260（联机） ”,就无色：未开电源或者模块预备就绪；黄色：模块未预备就；绿色：正在进样分析；第 2 页

3、 共 8 页红色：模块出错；全部模块红色：仪器有漏液 工作站图形颜色说明：绿色：模块预备就绪；黄色：模块未预备就绪；蓝色：正在进样分析；红色：出错或者不能联机；灰色：此模块没启用；将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏 因；4.1.3 冲洗流淌相管路,系统会自动显示未就绪或出错的原反时针旋开泵模块上的溶液排空阀,右键单击泵视图的空白处,选择“方法”,设置 “流速 ”为 5ml/min ；将试验中需要的各个通道分别设置“溶剂”为 100%,点击确定开头冲洗, 每个通道冲洗 3-5 分钟,如冲洗通道时压力显示超过 10 bar,就可换过滤白头；4.1.4 平稳柱子冲洗完柱子, 按要求调整流淌相速率及

4、流淌相比例,顺时针旋转排空阀, 关闭溶液排空阀 确认泵流量为 1ml/min ,然后右键点击需用检测器模块视图的空 白处,选择 “方法 ”进入检测器的参数设置界面,按要求设置参数（停止时间与泵 一样）,后点击右键,选择 “把握 ”,在弹出的窗口选择打开,开头平稳柱子,监 视信号基线和压力,等待平稳后即可进样（如用缓冲溶液和有机相作为流淌相,先用水和有机相平稳 30 min,比例与所要求的缓冲溶液和有机相比例一样）,待 基线平稳后换用所要求的缓冲溶液和有机相按比例混合平稳柱子 30 min）；4.1.5 储存方法 将编辑好的方法储存起来；4.2 进样分析 在每个样品进样前,从 “运行把握 ”菜单

5、中点击 “样品信息 ”,编辑好数据的保存路径；进样时, 逆时针旋动进样器六通阀旋钮,第 3 页 共 8 页进样完毕马上顺时针旋回该旋钮,并拔出进样针,妥当放置；4.3 数据分析方法编辑 点击屏幕桌面图标 “ HPLC-1260（脱机） ”；从 “文件 ”菜单中选择 “调用信号 ”选项,选中您的数据文件名,点击确定,数据被调出；从“图形 ”菜单中选择 “信号选项 ”,设置信号包括的信息, 从“范畴 ”中选择 “满量程 ”或“自动量程 ”及合适的显示时间或选择 “ 自定义量程 ”手动输入 反复进行,直到图的显示比例合适为止；4.4 积分 4.4.1 自动积分方法X、Y 坐标范畴进行调整, 点击“确

6、定”；从“积分”菜单中选择 “积分大事 ”选项,选择合适的 “斜率灵敏度 ”,“峰宽”,“最 小峰面积 ”,“最小峰高 ”；从“积分”菜单中选择 “积分 ”选项,就数据被积分；如积 分结果不理想, 就修改相应的积分参数, 直到中意为止； 后将积分参数存入方法,最终,选择 “方法 -储存方法 /方法另存为 ”或直接储存数据分析方法；4.4.2 手动积分方法 选择 “积分 -积分大事 ”,选择 “手动积分大事 ” ,如需更换,更换自动积分 方法后,储存并关闭 “积分大事 ”；选择 “积分 -更新方法中的手动积分大事”,保 存手动积分方法；选择 “积分-应用方法中的手动积分大事”,将手动积分方法应

7、用到当前谱图中；选择 “积分-删除方法中的手动积分大事”,将从当前方法中删 除手动积分大事； 最终,选择 “方法 -储存方法 /方法另存为 ”或者直接储存数据分 析方法；4.5 校正 为“标准样品 ”建立校正曲线 工作曲线 /标准曲线 ,在色谱图正确积分后才可 进行校正设置；4.5.1 校正设置 从“文件”菜单中选择 “调用信号 ”选项,选中您的标样数据文件名, 点击确定,数据被调出；选择“校正-校正设置 ”设置校正参数；参考峰 /其他峰 -分钟栏留空,修改 “ %”以转变确认保留时间范畴内的峰都被认为是参考/其他峰含量单位 -填写样品含量单位选择缺省校正曲线方法,“确定 ”退出；第 4 页

8、共 8 页4.5.2 建立校正表 选择 “校正 -新建校正表 ”；显现 “新建校正表 ”菜单,“确定”即可；显现“校正表”表格,在图谱中选择需要校正的色谱峰,后在表格中“化合物 ”中填写化合物名称,“含量”中填写色谱峰对应物质含量；右侧“校正曲线 ”即可实时更新校正曲线图,并标注 RSD 和相关系数； “确定” 储存退出；最终,选择“方法 -储存方法/方法另存为 ”或者直接储存数据分析方法；4.5.3 添加校正级别调用新的标样数据文件后,选择“校正 -添加级别 ” ,点击 “确定 ”,在校正表中输入相应的标样浓度,点击“确定 ”,右侧校正曲线窗口就会自动更新；4.5.4 打印带校正表的报告选择

9、 “报告 -设定报告 ”,在“定量设置 ”中的运算模式一栏选定 “外标法 ”,“报告设置 ”为“完整报告 ” 后,打印报告即可在 “视图 -信号选项 ”中选择 “化合物名称 ”即可将命名的化合物名称添加到打印的色谱图中；4.6 打印报告选择 “报告 -设定报告 ”选项,点击 “定量结果 ”框中“定量 ”右侧的黑三角,选中“外标法 ”,其它选项不变；选择 “类型 ”,点击“确定”；从“报告 ”菜单中选择 “打印”,就报告结果将打印到屏幕上；如想输出到打印机上,就在上图中左下角“目标”处,将打印机选上；如要生成其他格式的报告,就选定“ 文件”,然后选择相应的格式即可；在方法菜单中,选择“运行时选项

10、表 ”,确认 “数据分析选项 ”也被选中,点击 “确定 ”；点击“储存 ”按钮,储备修改的方法；此方法包含校准表,建 立完毕；4.7 关机 4.7.1 关闭检测器的灯 关闭紫外检测器,关闭检测器的灯后冲洗系统,可以延长检测器灯的寿命；4.7.2 冲洗系统没有盐缓冲溶液的流淌相,反相系统 用 85%90%有机相 +15%10%水相冲洗系统和反相色谱柱或者适宜的流淌相冲洗系统和反相色谱柱；有盐缓冲溶液的流淌相, 反相系统 用 85%90%水相+15%10%有机相冲洗系统和反相色谱第 5 页 共 8 页柱反相系统 30min,除去反相色谱柱与系统中的盐溶液,然后用 85%90%有机 相+15%10%

11、水相冲洗系统和反相色谱柱 30min；4.7.3 封存色谱柱 反相系统 用 90%95%有机相 +10%5%水相封存反相色谱柱,两端封死；（如长时间存放可将柱子完全浸泡有机相内,以防用纯有机相封存反相色谱柱,假如长期储存有机相见挥发） ；4.7.4 关闭电脑 将泵流速逐步降至 0ml/min ,单击“关闭 ”按钮关闭全部模块,退出化学工作 站,关闭电脑；4.7.5 关闭模块 关闭全部模块电源；4.7.6 冲洗六通阀 上下反复旋动六通阀旋钮, 用注射器注射去离子水进行反复冲洗,冲洗完毕后将旋钮旋至分析（ inject）标志处,用闲暇针头堵住进样口并盖上红色爱惜盖；5. 爱惜5.1 日常爱惜 5.

12、1.1 运行环境为了仪器的合理运转及延长其使用寿命,应当将仪器放置在平稳固定的台面上,要求台面无振动, 四周无辐射和磁场； 另外,由于流淌相大多数是有机溶剂,仍要保持室内有一些排风扇等通风换气的设备；5.1.2 开机爱惜 第一检查检测使用的流淌相以及色谱柱是否精确无误,然后再打开仪器的稳 定电源,然后再开输液泵, 柱箱；设置好色谱柱的最大爱惜柱压, 进行排气工作,并确保流路时不会有气泡；而流速不行操之过急,应当从小到大一点点地加速,这样是为了更好地爱惜色谱柱；5.1.3 柱前爱惜留意不要把溶剂瓶放在光线猛烈的地方,尽量使用琥珀色的溶剂瓶放置； 仍可以在色谱柱前加上爱惜柱, 从而防止色谱柱的污染

13、, 进而延长色谱柱的使用寿 第 6 页 共 8 页命；5.1.4 关机爱惜 5.1.4.1 试验完成后,第一关闭检测器,保证灯的有效使用年限；5.1.4.2 没有盐缓冲溶液的流淌相,相冲洗系统和反相色谱柱；反相系统 用 85%90%有机相 +15%10%水5.1.4.3 有盐缓冲溶液的流淌相,反相系统 用 85%90%水相+15%10%有机相冲洗系统和反相色谱柱 反相系统 30min,除去反相色谱柱与系统中的盐溶液,然后用 85%90%有机相 +15%10%水相冲洗系统和反相色谱柱 30min；5.1.4.4 泵的流速应慢速减小到 0 时,才可以关闭泵和稳压器；反相系统用 9095有机相 +105水相封存反相色谱柱；5.1.5 其他爱惜流淌相使用前必需过滤,不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）；流淌相使用前必需进行脱气处理,可用超声波振荡 10-15min；5.2