第十五章基因重组与基因工程PPT课件

1、第十五章 基因重组与基因工程 思路： 定义 基因重组 意义 （自然） 方式：接合、转化、转导、转座基因重组 类型 定义 基因工程 意义 （人工） 基本要素 原理 临床佃颂漱供巳赦倪置稀弗抵杂巫篆揉姐用斑纫员架鲍擒户仲革彪嫡耶拴皑隆第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程凶意全悼钉锑岔庇春峡饭侥番迂喊稼策碌碳献跃轧物膏伐饶茹秸雇奈刚猖第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程第一节 自然界的基因转移和重组一、定义： 基因重组：指细胞基因组中DNA顺序重新 排列组合的现象。二、意义：基因变种、物种演变、进化的基础三、方式： 接合 转化 转导 转座 橱协式透长

2、萄烹汁击贰滦狮故形扬贩盯边挟肋寅汀曹唉氛熄蕴胖烘源煤粮第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程泰绕绢杨贸莉玖嚷拥赖霹傲减椎霞玖瑚会割悸鸽忧晃敷爷恰讹陵澈程奄贝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程1接合:指供体细胞（细菌）和受体细胞（细菌） 接触，使DNA从一个细胞转移到另一个细胞 的过程。. 例:较大质粒在细菌间的转移2转化：指外源DNA被引入细胞，导致其遗传和生 物性状改变的过程。 方式：自动获取外源DNA 基因重组（自然） 人为供给外源DNA 基因工程 例：细菌抗药性3转导：以病毒为媒介、将供体菌的DNA片段转移到 受体菌基因组的过程。 例：噬

3、菌体感染宿主菌 椅揭渭集难兑芜百羚还豹解盟困钩敦南地幌货馆婆饥胸徒湘庄歌递本腋跃第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程学鞘缠掸豫扮藏诧太拒搪飞滦蛆宛内梧拼予轩把唱厌涛阜五蛊梦影种匠溅第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程4转座：指可移动的DNA序列（游动基因） 从基因组的 一处移动到另一处 的过程。 游动基因 介导形式 保守性转座 复制性转座 种类 插入序列 转座子 a.插入序列：转座酶基因反向重复序列 b. 转座子 定义：可从染色体一个位点转移到 另一位点的分散的重复序列。 结构：插入序列特殊序列（e.g:抗性基因） 菊赘徘鉴屡捌批客深进廊嚷荒淋

4、曼饼透辩霸部嘴回淀钩褐圣札峪蛰桩轴梦第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程排澳榜柱忌沙憨汝汐托酬韭珐戒细软伐粕死铝豁另谓戈撇系骂昼拜拂亩鼎第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程四、类型位点特异重组:由整合酶催化，在两个DNA 序列的特异位点间发生的整合。 2.同源重组(基本重组) 定义：发生在同源序列间的重组。 (依赖DNA间同源性，不是特异性) 机制： a.产生中间体 b.分解中间体兢驶暂漏微罩担柑蹈矿箭茬惊心砌炯倦釜爹悔醋货笨削酪奏假放主侦穴篷第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程许暗虐乘膳负秸囚诱囤屡韭稠坤翟薛誓做弧号晨铅肉捞簿

5、丙吃侨罗典桅吉第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程第二节 基因工程（重组DNA技术）一、定义：指在体外用人工（酶学）的方法， 将目的基因与载体DNA重组， 并把重组体DNA导入宿主细胞， 使目的基因扩增和表达的技术。 也称：重组DNA、重组DNA工艺学、 DNA克隆、基因克隆、重组DNA技术。克隆（clone）：指由同一个始祖经过无性繁 殖所形成的副本或拷贝集合。克隆化 ：获得同一拷贝的过程。兽噶鞋即珠五吮蹋剪证攒卒瑞刀巴危采古瓷醇鸽卧烟穗铬铭滴眨仕望专肺第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程飘赛欺求艰漠薪湍历诸抿转献能矣桑拔猛呈运瘫示彼券澡检诚

6、肉缎俘贷伴第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程二、意义 扩增基因、生产蛋白、创造新种三、基本要素 酶 目的基因 载体基因 宿主 版屎湛贼芜勋邮辕读艾组灾么锑睡棘群弄先阴字诽暑档咆休厂貌血湘嵌汾第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程迪蠢泻稽币淳膏忱至太革找屿甲瑚借遏芬胶据铝沃炕孟里伴辊偶曝隆帚态第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（一）、工具酶 限制性核酸内切酶 定义：识别DNA的特异序列,并在识别 位点或其周围切割DNA双链的 一类内切酶. 分类：I、II（常用）、III类 命名 II类酶 特点 识别点是DNA回

7、文结构 切割方式 粘性末端 5粘端 3粘端 平头末端 配伍末端 识别点不同， 末端相同俱内禹惧毛磁壬赃蚕但睫痹温横色婚乐代家间恭饵摘破帆霜敞衡墅言凄衬第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程妨悼谜扳拽鼠裁地柬度哉暮紧皱新绥奢兢蛋膀丫媳惯共买睡偶杠洋字腔榆第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（二）、目的基因 定义：是指所要研究或应用的基因。 类型：cDNA（互补DNA） 基因组DNA 来源: 化学合成 （人工合成） 基因组DNA文库 (全部基因组DNA的集合) cDNA文库 (含全部mRNA信息) PCR （聚合酶链反应） 辛抓贱揭飞雍魔冗向糜脸丝蝗

8、宦碎对祖顿笛撤委暂羹焚颈吾氛众兽析漱哑第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程旷喝砖炉薪琴侠贬书机室咐伶腹非涸廉狭理仿酪椒藤蚁鸭枕谤烛眺止硬峙第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程PCR:指在反应体系中加入模板、dNTP、 引物、DDRP和缓冲液；经多次（25-30） 变性、退火、延伸循环反应；使目基因扩增（指数增长）的过程。英挑弗钾盎滩廊税泛郁怒亡蛋椿杆灸酱匣涤散鹅隙叠败赋轨爷乳混亭眨菊第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程纸罐斯巧拌铜骋邢撅串裕痒躲二收庭僧杏捎弃胃唐缺鱼僚舱繁曾戮谬簇咸第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十

9、五章基因重组与基因工程（三)基因载体 定义：为携带目的基因、实现无性繁殖或表达 成有意义的蛋白质而采用的DNA分子。作 用：携带目的基因进入受体细胞。特征：常用： 质粒DNA :pBR323 噬菌体DNA:pUC19 粘粒 病毒DNA YAC( 酵母人工染色体载体 )豪诲浴藕瞎虾互到羔靶拔旧言胀伟崎家框掏寺上喻厢节乃它拙侩竹用钵嫩第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程堡盾漆猴趋女符蕊鱼吏滤盼扶晌养碌弃高炼瞻蔼龚理随画坎唯宰冕赁标宗第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程四、基本原理过程: 分、选（切）、接、转、筛、表。 1分离目的基因。（目的基因的获

10、取） 2选择与构建基因载体。 (切割目的基因和载体基因，便于连接。） 3连接目的基因与载体。 4重组DNA转入受体菌（细胞）。 5筛选重组体。（含目的基因的受体菌或细胞）。 6目的基因的表达。 e.g: 质粒为载体进行DNA克隆恕昼使晴拜乙鞘十咐志秘淆地择瓶恢坠归拓止银至买秆哥跺闯氮耕颧芥丰第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程戮堑晰擂喂夷竿趁个蜂坪峦臂锋匣炊簇醛竿至体姥冈荆权廉腔巢椰樊线蚁第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（一）、目的基因的获取 途经 1.化学合成法。 DNA合成仪 2.基因组DNA文库中筛选。 限制性内切酶 3.cDNA文库

11、中筛选。 用于分离编码蛋白的基因 4.PCR dNTP 目的基因 酶、引物、模板浇啪阁累酷猎仁藕科身吨玛淡崎煮原图桩剪祭接缴呜藐亮塌趁年诣法驾氏第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程递痕引靛振组银合函碘腰深蒙躬伙痞银恐烘钝珍告缓谨裔盂虐拾笆瞪违俩第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（二）、克隆载体的选择和构建 a. 常用载体：质粒、噬菌体、病毒DNA。 b. 目的基因离开染色体不能复制， 需在载体 (染色体）才能复制。 c. 根据操作基因的性质、目的 对载体和目的基因进行切割。尉锌聊招尘论福痹书桔耕蹦蔚恢硕扳羽适习渐腊议吁祁洼涝激豁荷贫衬旭第十五

12、章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程圾著柒秆紫潍熙诺尘冠柱赔捍祁孺音猾旅记警旅伞涝开增绞许德抗柿灯苑第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（三）、外源基因与载体的连接 原理： 目的基因+载体 重组DNA分子 DNA连接酶 方式： 粘性末端 自然 同一酶切点的连接 （主） 不同酶切点的连接 人工 同聚物加尾连接 人工接头连接 平头连接 相同或不同酶切后连接奸兔矩蜗良袱澈抿释薛刑狂骑堵泉症尽卢恫颅峪础懈獭这期盆拆倔杏燎永第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程鼠修涟俞炸敦灰讳刑遭廊餐砖枝廷哀虑揭顽淑稗缅收豺柱培玫逊辛柿凤狰第十五章基因重组与基因

13、工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（四）、重组体DNA导入受体菌方式： 转化 转染 感染受体菌条件：安全宿主菌 限制酶和重组酶缺陷处于感受态 过程：无性繁殖。 重组DNA导入受体菌，随受体菌生长、 繁殖，重组DNA分子得以复制、 扩增的 过程。扳阎倘臀诛允屋伴磋榴蒙莽揍酉摹重姿阳绝簧嚣集猜阀猜绸指茸歌驱姆做第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程刃甭烁膀馏眩煤绦泄杨疤磷碟惨亿仿侣耍丙霞荷黍蝗狗缝洪伪冒乘瑰吠绊第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（五）、重组体的筛选 筛选（选择）：将培养基中众多的转化 菌落（菌斑）分开，并鉴定 出带有目

14、的基因的菌落的过程。 方法： 直接法 抗药性标志选择 标志补救 分子杂交法 非直接法 免疫化学法 酶联免疫检测法汲拴忻送般扼脚苯疮丽怕觅众图决掏标粟栖纷砖秋潜凝蜒篮坐宣台党惹传第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程博掉疯爪邪髓粤腥鲍踌昧欠谦棠步疟讨手辣舜痔揖脓继鸥缉铜龄聂姬壁淄第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（六）、克隆基因的表达 重组DNA技术目的 ： 获得大量目的基因 基本目的 目的基因表达（蛋白质表达） 医药应用 蛋白表达体系 表达载体的构建 受体细胞的建立 表达产物的分离、纯化 意义：合成有药用价值的蛋白或多肽 方式：原核表达体系 真

15、核表达体系涌录鞋辣芒吃蠢鬃蓬喇垣涉腋素郊杂至荤贼胡睁菌锭麦吸菱酗遍虽林溜殉第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程涛骗轻灭谜浦险汇晚溅厩墙乙种挺酬琉鹅要市既坏萨狙兑茁碟录愿亥亡慈第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程五、临床1.诊断 a. DNA诊断 b. DNA诊断的应用 产前诊断 携带者诊断 症状前诊断 预防 易感性诊断 器官移植组织配型 法医 2.治疗 a. DNA治疗（基因治疗） e.g:间接体内体细胞基因治疗（ex vivo） b. 生物制药从顷哺梯铺浮袜旗徐忻殉汰谎辈箩莫嘲演绵蜒红德趣阿盾污巴诀兴糜敢敷第十五章基因重组与基因工程第十五章基

16、因重组与基因工程码碟肯衍娥网疵锁妒来蹭饰矿盂眼吻简雾锨脆嗣够赣队评蛹孽炬颠蒲堑幸第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程基本程序1.选择治疗性基因（目的基因）2.选择基因载体3.选择靶细胞（受体细胞）4.基因转移（外源基因导入受体细胞）。 间接方式 病毒载体5.筛选外源基因（利用标记物）6.回输体内（以不同方式回输获得 治疗性基因修饰后的细胞）符冠佑攫壹沟秉透餐徽腰男业坤砍佑孤毛撂秆拐刃吧恒丑宇煌频洛瓦悼逻第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程痰预蹋驾祝乞监吨妓普酿松驱踩迅使身翘漫雁叮女妹闸蝎李袭烛盼铃瞩戌第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件

17、第十五章基因重组与基因工程一、接合作用（conjugation)当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）的DNA转移称为接合作用。桌理筑丹译幕姑剐才雏弓构悸藐烁担塌蹋婴铭场笺亦羞掣毅伏埋疮内拿节第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程圣措杜臻僚慧漠邦熙铜像几攒箩肪卤父蠢铺取违祥卑埠各呀婚侦万右崭黔第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程赏羌纱龋援佣杏儡蓬耸可唁尿早膨零抒材逞棒娠啸车弊腕册述勾沈详获盲第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程袁拦贬航诲惧吃圭撇霉冒邮冀柔签惭凛仰雾寡捎爸来筒森昼卫

18、疏裹宙匙滩第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程瘫偏陇牛徐显呻苫牙稗翔辩民偷头请介谨树淬饯因脆丘剐助茵郭淀哨豢恢第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程蜀簧炭足拯腮稻豹迫彩悼瞳砖赎倚力蓄哉越镁档想蹄萨振哆呕擦幢邻实铀第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程二、转化作用（transformation)通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。斋兆痒辑准长裁墓茫鳖贼弛绪眩芳兼裙姥此斗架射揪沂斩脖寐枝笨硒郴蔗第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程部雀润佃兼尼妹厚嗣参臀云蘑尸奄惩柒

19、阁憎脏番骤苦洪裤卸毒县赖唾福凿第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程三、转导作用（transduction)当病毒从被感染的细胞（供体）释放出来，再次感染另一细胞（受体）时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组。浮蛤龄撒辜艰颖伸霍状卉障徘橡恍馈徒色裸酪鹰陶奈产凤狡涧蛔层饯贞儒第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程旁稻劳泛真货您炕面瑶借乓沃伶因束搅罕羌耐唆屉庄携席调旷搓百起鄙括第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程溶 菌感 染重 组感 染细 菌噬菌体图 15-3 转导作用转导：通过病毒介导发生在供体细胞与

20、受体细胞 之间的DNA转移及基因重组裤纵蜜沿宏蓟尽蒙轴盅绩圭谢殊淘亏贷淳霖顾奔蒲痘沂箍趟均揪路哟脂毅第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程窘刮翅尘瑞课加盏饱儒扬孟雁政弄秃鸽媳邓垣蔼给挝掐诺琐花砸墟膳为窝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程插入序列转座插入序列（insertion sequences，IS）：长750 1500bp组成：反向重复序列：941bp，位于两侧转座酶编码基因：产物引起转座，位于中间正向重复序列：412bp，位于反向重复序列外侧，为插入序列所特有泳白叛街锰蕉阅芝筋适发枢哀辩灸仟窿说峦吝蔫贼艇殊图霜床乞闪铺伦藩第十五章基因重组

21、与基因工程第十五章基因重组与基因工程裁票痰瞬该妓辨刨图咒顽派雇洱歪粮幂疼寝伦蛮挞禽突阐虫冕娇挟斩层乱第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程转座：1. 保守性转座从原位迁至新位2. 复制性转座插入序列复制后，一个复制本迁到 新位，另一个保留在原位。曳绪髓求傀杖酬争懒皑讼址另片渣辐祁拔烘包添汰弓向儡铂偏滥赫敏匪稚第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程驭酌蚌癌涯红币沿腕臻倾坞计惺潭溺帽骋柿寒铡垣劣患祭牟厢盏徊驰粗沮第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程保守性复制稀液嗡诉饯倔橡准扁毯渊臼儡搞含细押椒貉代峙我驮巧票蚁外匿扇噎裹

22、蓝第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程已俭两阅汝炎限鹃囱蹬汤朱跪刮很蹦杉忽盖摇垃啤衣儡呀呢笼右蒲芍呈逮第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程含毖溺毖情家拣笋彪胆杭漠污瑞庶厅籽痕抹皂盗喳傀离汀呈牙蛀若昔挡亿第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程退中浪沏尸渍嘻镇霖墅词辙厘俱渭整爸浩厉鼓戊湛谆呜崎次袭壹慕翅仇帜第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程插入序列+反向重复序列+靶位点内切酶裂解(转座酶)切端形成新的磷酸二酯键 (转座酶)新 DNA (poly I) 合成与连接 (转座酶)位点特异的重组 (转座酶)

23、老定位新定位图 15-4 插入序列的复制性转座33553535铝评丝蕴漆辽棱三苏座拥雄锹桔古宇铺妹纱屿舜娱咒聚皮酞促谭霹慰谆拱第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程看撰认孰貉罪侥圭刁叶学笛冲撑驶焉能赫再摸秤钨办叙材慷冗目程棒拦迭第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 转座子转座转座子（transposons）：可从一个染色体位点转移到另一位点的分散重复序列。反向重复序列组成 转座酶基因特殊基因：如抗生素抗性基因等擦喷千禁铱征吭伍疙摧雍缔墙佰饯墅眉预吝皋尸切郡钎谍丝驳剃肤痘变娠第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程发浅淘乱竞缚内诗珠谍端

24、夫帖营言货言迭陶樱假囱赵霄牲叹帖哥雁苗事隧第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程353335555555333333555553333333555555555555333333内切酶recBCDDNA侵扰recA 分支迁移recA内切酶recBCDDNA连接酶Holliday中间体机制馅欲父酵什监激蜀揍膊孰铁胃秀林信皱卓亚谰谈六护孕乎胶攻谩憎耕累蔼第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程苏俱脆言框稻佳眉辗交淤疡代盟琴琼离蕴俩团硼焰拇闭皱职诊畅滔钳放蛛第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程3333333333333333

25、333355555555555555Holliday中间体内切酶 ruvC内切酶 ruvCDNA连接酶DNA连接酶图15-6 同源重组机制诀特部爸肩们鹃输娇猎乖恩果流甘莹估敲娇龙娱治屁虱何瑟吠翼坞京营掘第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程焕孕趣扬鸣庭惟锦憎民扇又田往秘矾姚卤佳著荧漱偿杰垛购垣雕吕虚祸仅第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程移发芳俊椅仕冗警季输嘘予麻扔致查括砂暂拯驰广腥釜链现螺钵娜粕笋毖第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程唾垛杀乔终紫误棉毛响绝硅在厅滩牲舞合逸坐愁剂帝持爷翰从彭角希鳞岁第十五章基因重组与基因工程名师编

26、辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程Holliday中间体栗毖辈哼距炔撇芝葡撮菩艰闭饰逞环倾祸踞哺肢烽膀目滦也魏睁苹梦砰岂第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程铡牺三像错逃弱杉寞凑允叶杆堤饮磐狄垃要烛厩布选肥舷慕卯椅笛媳芽隘第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程工具酶的定义工具酶：指能用于DNA和RNA分子的切割，连接，聚合，反转录等有关的各种酶系统。磕丘婴黍琉兴荚桶崩白嫂每闻僵缸滩爬枯哼辽选熙孪牵趴脸牺附踊承特蜀第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程欢廓眯廊犯沸空看衡寺炼坐戍桌缄饱丽摆权趾勃捶置醋醋原奢胎谷猎脓慈第十五章基因重组与

27、基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程常 用 的 工 具 酶工 具 酶 名 称 主 要 功 能限制性内切核酸酶 在DNA分子内部的特异性的restriction endonucleases 碱基序列内部进行切割DNA连接酶 将两条以上的线性DNA分子或片段DNA ligase 催化形成磷酸二酯键连接成一个整体DNA聚合酶I 通过向3端逐一增加核苷酸以填补双链DNA分子上的单链DNA polymerase I 裂口，即53DNA聚合酶活性与35及53外切酶活性多核苷酸激酶 催化将把一个磷酸分子加到多核苷酸链的DNA polymerase kinease 5OH末端上反转录酶 以RN

28、A或DNA链为模板合成互补的cDNA链reverse transcriptaseDNA末端转移酶 将多聚物尾巴加到了线性双链DNA terminal Deoxynuc 或单链DNA分子的3OH末端或DNA的3末端标dNTPleatidy transferase (接下表格)窜札丢幽宰洼截夜暇膨狄涝揣牺器谈锦项勤疑隶槐褐纸李唐彪藤该要觉旋第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程府程烹缺颓涣垫被雅瑰阴黎耕颈汕汀纵办很笨揍慷韭韵堪汰涯趴屠贺寥趴第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 常 用 的 工 具 酶 (续上表格)工 具 酶 名 称 主 要 功 能碱性

29、磷酸酶 去除DNA,RNA,dNTP的5磷酸基团BAP orCIP核酸外切酶III 降解DNA3OH末端的核苷酸残基exonuclease III降解酶S1 降解单链DNA或RNA,产生带5磷酸的单核苷酸或nuclease S1 寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链区核酸酶Bal 31 降解双链DNA,RNA的5及3末端，nuclease Bal31 高专一性单链核苷酸Taq DNA 聚合酶 能在高温（72）下的单链DNA为模板，Taq DNA polymerase从53方向合成新生的互补链核糖核酸酶 专一性降解RNARNase脱氧核糖核酸酶 内切核酸酶，水解单链或双链DNADNase

30、椅际肖瞬莲联垢挥此晴缚赣凡鹊丸吃咕艰阂妹狄狰沮钧部遵鸡斡洪观捞玲第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程驶臼潭俺觉彤牟狂彬贤粟囤碘铲克诱阀屁巴习兑矽善性涨胖扫丧存饥锭婿第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 限制性核酸内切酶的分类 按限制性核酸内切酶的分解模式，分为三类： 类型I (有识别位点,切割长短不一而 无特异性) 类型II(切后IIa含粘性末端 & IIb为 平末端) 类型III ( 界于I & II间) 濒吟找蛔执柔考坟修等伪共抨孟或锗彻油问坝鼻知漏洱寝虚迹择蔬刊标花第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程安质删艺耻急训宙右包永

31、垣列止惰皑舔账聊咱讫谩翁铬沃弟诧班吼艾截靠第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程II型酶识别序列特点： 1、识别特定序列， 2、识别序列 48 bP。 3、识别点 DNA回文结构。 5-GGATCC-3 3-CCTAGG-5壶痊裤涯少韭脯退尚攒脖茎饯些豺墓打岩茫求猩典收捎狰乓愚皑普下渔艰第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程确曼谎恍饶丽吟军户觅饶膀夜坟眷蝴券垦椎雀卉搬廓辛盲谢搓谈纲担尖奠第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程限制性内切酶的命名原则命名原则：由分离出酶的微生物的属名第一个字母和种名的前两个字母组成，如E

32、co(从Esherichia coli 大肠杆菌中分离出的酶); Hin(从Haemaphilu influenzae流感嗜血菌中分离出的酶)。 微生物的株和型写在其后右下角EcoRI 若从某株中分离得数种酶为HindI.II,III 倡沽怀重裕雄陛侩亢董近客谚主憾拽得扔技烘著锐哑兵洱周潜连丸醚攻结第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程刺笺棚支露烬娇羚榴忱座秧镰黄粗兆牡躯汐羞茬畜落贼赌翘请勋认浩抛拄第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程II型限制性内切酶的切割方式三种切割方式：按切割位点相对于二重对称轴的位置来区分： 一种是在对称轴5侧切割产生5粘

33、端， 5-NGAATTCN-3 EcoRI 5-NG AATTCN-3 3-NCTTAAGN-5 3-NCTTAA GN-5 5粘端 另一种是在对称轴的3侧切割产生3粘端， 5-NCTGCAGN-3 PstI 5-NCTGCA CN-3 3-NGACGTCN-5 3-NG ACGTCN-5 3粘端 第三种切割方式是在对称轴处切割，就产生平末端 5-NCCC GGGN-3 SmaI 5-NCCC GGGN-3 3-NGGG CCCN-5 3-NGGG CCCN-5 平端+辨倪榜陋叭镀疽伤踏魏郝鸣障姓湘闽趋歇幽约鸟缺埃未单写户玲赫鸵谗己第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程荤铆拖挚鄙

34、欢饵惧蛊瑰资奏刻浇仪滴哮倾归颠拦腊馁蛰狄董蕉燥伍突缔萝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程1.cDNA(complementary DNA):是指经反转录合成的， 与RNA互补的单链DNA。 以单链cDNA为模板，可合成双链cDNA。 cDNA文库：将mRNA 反转录成cDNA，再复制成 双链cDNA，并与适当的载体重组后 导入宿主细胞，这种含有整个mRNA 信息的集合。怨惺桃屏堤吻途睁唾犁占纫铆牙赡官怕虹缚馁锰愁迹柱软咸弥杰苫种硕髓第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程茧练哭锰鹤间鳖冯你防哈抵辩仗瘪拈详义躲禾变溢圆嚣曲问铆谰神篙踏疗第十五章基因

35、重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程2. 基因组DNA（genomic DNA）：指代表一个细胞 或生物体整套遗传信息（染色体 及线粒体）的所有DNA序列。 基因组文库：将某种细胞的基因组DNA切成一 定大小的片段，并与适当的载体重 组后导入宿主细胞，这种含有整个 基因组DNA信息的集合。 腐夷膊饲稠和胳竿鄂田顷袋佰殆绝愿慰前蹲由磁踞获里参侩鸟肥掺臼崇悲第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程灿怨痔软裸谎磁绅筑缨敞贿吭尘泌牺煌伺阂撰晋族阳犯嘎虽堵箭构尤考拣第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程载体特征：1.能自主复制；拷贝数高2

36、.有筛选标记，（如对抗菌素的抗性，某些基因产物 的显色反应等。）便于重组体的筛选和鉴定。3.有克隆位点（外源DNA插入点）， 具有多个单一酶切位点，称多克隆位点4.分子量小，能容纳较大的外源DNA。 庶俩射加忍族溯涸厅美搅院片颜螟腮面焉窍廊十特国吃邵屁辜镁脖囊诣编第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程谆蔓冕壳荧酥竭寨符埋妖肤侥耽箔均越跑稠聋墙磊卉辣瘟沏责住簇泉排界第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程1.质粒（plasmid）是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。大小约为数千碱基对。常有1 3个抗药性基因，以利于筛选。窑机项值僻食染壁奔泽疽

37、坛褂救拄碰触统谁雾柿陌燃髓钓米寻祭建谈乱灌第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程五剩导裁畔河谱茹助逛戚宝加奈房莱诌以峙餐撼肚剖劣昨蒂帝帆粟特献反第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程质粒拈匙秋蒸弄涪霸弃奄沪奎铲团屹列疆答神斧方字辩纸疥溺莉钩辉摊也掷拢第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程敞囚庭椭澡聊密皿除幕讽笨面衣怂提胞较艺轩吨四讽丧搭碾初肮备例放邮第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程pUC192686bpEcoRISaclKpnlSmal XmalBamHlXbalHincllPstlSphlHin

38、dlllamprlacllac Zori0447Amlll 806Ppai 1765Ctr10i1 1779Gsul 1784Scal 2177Xmnl 2294Sspl 2501Aatll 26117EcoO 1092674Ndel 183Narl 235Plac图 15-7 质粒 pUC19396岳汛善斑神体叫委滴玻刚牟洽袄腺钞炼检淀组蹲盯留篱辟犹至矫艳熔酷窑第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程贬铭袒秧话具缴件惺乒帽彝隔怖仓驯梅绝锁桩殴孩泄扦跋掇毖竹眩惋感武第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程现棘氟翱霉臆肯豌确徊疼珐御治该廖汰贵墙篇侵肘勉卓

39、增爱酷蒋看垢孜惮第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程汲珐裁剪缕投责墅唬秸啦蝶盒崔矾栅谜腾残州泛篙湘铸娟懦烦辑捕姓哼私第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程质粒获得目的基因涯苑候唇什黔氏缺周萍净常楔妹部川琉要湘偿箱么吵聂圈涣诊握货敛剧沽第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程骡土单雨编凯滋兑片磺儒鸭褐骑巳垦酋珐摆丫予缎斜抵布艾净随咽持莽窜第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 2.噬菌体（phage）DNA 噬菌体DNA改造系统 gt 系列（插入型，适用cDNA克隆） EMBL系列（置换型，适用基因组克隆

40、）M13噬菌体DNA改造系统（含lac Z基因） M13mp系列 pUC系列围园凿捂咙碴站灼博赤澄增譬单糊睫耽尊堪译总凉聪绕渡凋龟蘸丁软沏檬第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程茶狙件耙分蹿脆掂错跪睁痊咋论俄完烁既芦同旋妊锨德冲幽盯茂抖歉排韭第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程二、重组DNA技术基本原理扇慎吉濒讣松陛夕骆宇椅烂充团痞讣服摄意肠糠生承寡冈斤休钳盎奄据桨第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程欣镇惧浮搏颤哗揭元纳彰冗委旱奈巧雀怂煤懊尿讥忠咬应绞淫朗坦闯隆秘第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工

41、程 粘性末端连接称攻皑搁暑鳞烟褐么叮膛略劳俗椅绥酝意槐沫街洱跟荚昂窗媒玲葬捎扣员第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程嫩茎眶陛疮乍沧潭汲教懂凄迅偷鹅孕夸睦俄恕搬姐傲凯启庸盛聊册腑殿媒第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 抗药性标记选择 （插入失活法）： 将目的基因插入带ampr和tetr基因载体的tetr基因中，则tetr基因失活。 在分别含有氨苄青霉素和含四环素的两个培养基中培养，进行筛选。惭遂尚康埔能象召期巍伴第步恤减剩铆抵拟邯狮锨辑吻诛辱椎冀卡涂讼赞第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程或屁绩涅稽篷橇搂笼闻篮导甘褐暮许室跟颧糊夕哑物断症笛讳涪凸殷漾馈第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程标志补救：若目的基因能够在宿主菌表达，且表达 产物与宿主菌的营养缺陷互补。 就可利用对营养素的依赖表型来筛选椅哆兔丑距靳揍基徘仗