检测方法集(共61页)

1、文件名称检 测 方 法 集文件编号HNKL-QMS-C/xxx/00/nn编写人 审核人 批准人批准日期2003/9/18目录(ml)UVVIS检测(jin c)方法（一）多酚总量分析(fnx)1、酒石酸铁比色法2、FoLinD比色法测定速溶茶的多酚总量3、FoLinC测多酚（二）贯叶连翘中金丝桃素的测定（三）越橘中花青素的测定（四）分光光度法测定多糖含量（五）分光光度法检测硫酸软骨素含量（六）茶叶中游离氨基酸总量的测定茚三酮显色法（七）黄酮类化合物分析三氯化铝比色法（八）葡萄籽提取物中原花青素含量的测定(九)红车轴草提取物中异黄酮的UV测定（十）云芝多糖含量的检测方法（十一）人参皂甙的测定方

2、法（十二）蜂胶制成品中总黄酮含量的测定（十三）山楂叶黄酮类化合物提取工艺和测试方法十四）蛋白质含量的测定-考马斯亮蓝法（十五）水溶性碳水化合物的检测(jin c)-蒽酮比色法HPLC检测(jin c)方法(一) HPLC法测定儿茶素（二）HPLC法测定延胡索乙素（三）HPLC法测定5-羟色胺（四） HPLC法测定白柳皮中的水杨甙含量(hnling)(五) HPLC法测定大豆异黄酮（六）HPLC法测定葛根中的葛根异黄酮含量（七）HPLC法测定红景天（八）HPLC法测定厚朴中的厚朴酚和和厚朴酚含量（九）HPLC法测定卡瓦内酯(十) HPLC法测定蜕皮激素（十一）HPLC法测定淫羊藿甙（十二）HPL

3、C法测定枳实多酚(十三) HPLC法测定枳实辛弗林(十四) HPLC法测定中药复方(十五) HPLC法测定白藜芦醇(十六) HPLC法测定葡萄籽中的原花青素(十七) HPLC法测定红车轴草(十八) HPLC法测定苦瓜皂甙(十九) HPLC-ELSD法测定积雪草甙和羟基积雪草甙(二十) HPLC-ELSD法测定山药中的薯蓣(shy)皂素（二十一） HPLC-ELSD法测定黄芪(hungq)甲甙（二十二） HPLC法测定茶氨酸（二十三）HPLC测定补骨子(g zi)中补骨素和异补骨素含量（二十四）HPLC测定当归中的阿魏酸（二十五）HPLC测定芍药甙（二十六）HPLC测定丹参酮A、隐丹参酮原子吸收

4、检测方法各类植物提取物及食品中铅的测定（火焰法）微生物检测方法一细菌总数的测定二霉菌总数的测定三大肠杆菌的测定GC气相检测方法一：甲胺磷和乙酰甲胺磷的测定二：乙酸乙酯的测定辅料的检测方法一： 糊 精二：-环糊精三：淀 粉四：硬酯酸镁五：氨水(n shu)(HG1-88-81)六： 盐酸(yn sun)(GB320-93)七：酒 精八：乙酸乙酯UVVIS检测(jin c)方法（一）多酚总量分析(fnx)一、酒石酸铁比色法1.原理(yunl) 在一定pH条件下，酒石酸铁与茶多酚类物质形成蓝紫色或紫红色的络合物，在波长540nm处出现最大的吸收，在适当的浓度范围内，茶多酚的量与呈色的深浅成正比，可用

5、分光光度法定量。2.试剂和主要仪器1) 酒石酸铁溶液:称取硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)1g，酒石酸钾钠(KNaC4H4O6.4H2O)5g加水溶解并稀释至1升。2) pH7.5的索伦逊缓冲液A. 1/15M的Na2HPO4溶液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O)11.876g或( Na2HPO4.12H2O)23.876g，加水溶解并稀释至1升。B. 1/15M的KH2PO4溶液:称取经110烘干2h的KH2PO4 9.078g，加水溶解并稀释至1升。 取(A)85ml和(B)15ml混匀，即为pH7.5的缓冲液。3. 测定方法1) 茶汤制备A茶叶样品:准确称取磨碎试样2g，加20

6、0ml沸水，在沸水浴中浸提45min，每隔10 min摇瓶一次，过滤（先用纱布初滤到250ml容量瓶中，冷却后定容，再用滤纸过滤即可）。B速溶茶样品:准确称取速溶茶80mg左右，儿茶素40mg左右，红茶100 mg左右等，加水溶解定容至100ml。2) 测定:准确吸取茶汤1ml，注入25ml容量瓶中，加水4ml，酒石酸铁溶液5ml，用pH7.5的缓冲液定容至刻度，混匀。用10mm比色杯，以试剂空白作参比，于波长540nm处测吸光度A。3)结果计算茶多酚(%)=(3.913A/1000)(L1/L2)(Mm)100A测试液测得的光密度3.913按上述条件操作，当光密度等于1.0时，每ml试液中茶

7、多酚的量(mg)M试液量(g)m试液干物率(%) L1总试液(sh y)量(ml)L2所取试液(sh y)量(ml)二、FoLinD比色法测定(cdng)速溶茶的多酚总量1. FoLinD试剂750ml去离子水+100g钨酸钠(Na2WO4.2H2O)+20g磷钼酸+50ml正磷酸(85%磷酸)，混合回流2小时，冷却后定容至1升。2. 15%Na2CO3溶液称取88g碳酸钠，加水500ml溶解，即可。3.茶多酚标准曲线准确称取单宁酸25mg于250ml容量瓶中，蒸馏水定容。分别取该溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，7ml，8ml于100ml容量瓶中，加70ml水，再加5mlF

8、oLinD试剂，再加10ml15%Na2CO3，用水定容，在30条件下，反应1h，用1cm比色杯于760nm处比色。测定A值后，计算出回归方程。F-D(旧公式): TP%=(1.3466A0.0359)/0.98W10F-D(新公式): TP%=(1.09998A0.01829)/0.98W104.样品制备同前5.测定称取试样及稀释同前取1ml待测液(绿茶原料茶汤取0.25ml，红茶原料茶汤取0.5ml)，加70ml蒸馏水，再加5mlFoLinD，再加10ml15% Na2CO3，用蒸馏水定容至100ml，在30条件下反应1h。用空白作对照，1cm比色杯于760nm处比色，测其A值。6.计算：

9、将A代入线性回归方程计算即可。三、FoLinC测多酚1. 试剂配制 在2升的磨口回流装置中加入100g 钨酸钠(Na2WO4.2H2O)，25g钼酸钠(Na2MoO4.2H2O)，700ml水,再加50ml85%磷酸及100ml浓盐酸，充分混匀后，以小火回流10h，再加入150g硫酸锂(Li2SO4)，50ml水及数滴溴,然后开口继续沸腾15min，以便驱除过量的溴，冷却定容至1升。过滤置棕色试剂瓶中，存于冰箱，使用时用NaOH标准液滴定(实际上滴定是为了确定溶液的酸度，故取1015ml进行滴定即可)，以酚酞为指示剂(滴定前溶液的浓度约为2M)，而后适当稀释(约1倍)，使最后浓度为1mol/L

10、 H+(1N酸)，此即为FoLinC试剂。贮于冰箱中可长期使用，此试剂应呈金黄色，如呈绿色则弃去。使用时根据滴定的结果适当稀释，使溶液中的H+=1N。 2. 20%碳酸钠溶液(rngy)的配制 称40g Na2CO3加水150ml充分(chngfn)溶解。3. 标液配制(pizh) 精确称取50mg没食子酸于200ml容量瓶中，超声溶解，冷却定容得母液0.25mg/ml(因没食子酸的水分为9.58%，故母液浓度实为0.226mg/ml),分别取母液0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,1.2ml,1.4ml,1.6ml于100ml容量瓶中，加50ml水，再加5mlFoLi

11、nC试剂，摇匀后再加入15ml20% Na2CO3溶液，于30反应2个小时。4. 测定：在760nm下，用1cm比色杯测定A值。5. 利用没食子酸的A和C计算出线性回归方程为 y=0.80791A-0.005956. 样品测定： 样品处理及称量同酒法，测定步骤同标准曲线的绘制步骤，得样品的A值，计算出y值。7. 计算TP%=(y/0.98/w)108. 1N NaOH标准液的标定:精密称取约3-4g已恒重的基准物邻苯二甲酸氢钾，加80ml新煮沸的冷水，使之完全溶解，加3滴酚酞指示剂,用本溶液滴定至粉红色,0.5min不退色。计算： N=W/(V1-V2)0.2040 V1 NaOH的体积 V2

12、空白时所耗NaOH的体积（二）贯叶连翘(lin qio)中金丝桃素的测定1.样品(yngpn)的制备 准确(zhnqu)称取样品40mg左右，置于25ml容量瓶中，加20ml甲醇，超声7-10min溶解，冷却后用甲醇定容至25ml，过滤，弃去前10ml滤液，余下的滤液进行比色。2.测定 在590nm波长下，用1cm比色杯，甲醇作试剂空白，测其吸光度A。3.计算 金丝桃素(%)=(A25)/(870W干物率)100%（三）越橘(yu j)中花青素的测定一、原理(yunl)茶叶中的花青素多以糖甙的形式存在，花青甙在酸性环境中，当pH达1.0时，生成特有(t yu)的刚果红色，且不受黄酮甙、儿茶素的

13、干扰。二、试剂 2%盐酸甲醇的配制方法： 3638%盐酸 比重1.18(按37%计算) 甲醇 比重0.7915(浓度99.5%) x+y=1000 x37%1.18=( x37%1.18+y99.5%0.7915)2% x=17.762 y=482.242 配制500ml时，盐酸(浓)取17.76ml，甲醇取482.24ml 三、测定 国外花青素测定方法(含量25%以上) 称大约10mg样品(视含量多少而定)，加45ml2%盐酸甲醇，在沸水浴中回流加热30min，冷却后，用2%盐酸甲醇定容到50ml，在540nm下，用1cm的比色杯，用2%盐酸甲醇作对照，测其吸光度A。四、计算 样品中花青素(

14、M)=(A/1020)1000 (mg) 花青素%=(M/W0.98)100% 注： 1.以上回流过程,是为了让花青甙水解成花青素进行测定,水解时,温度(沸水浴)、酸度(2%H+)、时间(30min)对其均有影响. 2.金农越橘应称量25mg左右. 3.有的样品在制作过程中已水解,则只需称量后,置于50ml容量瓶中,加45ml2%盐酸甲醇,超声10min溶解(rngji),然后测其吸光度A,计算同上.（四）分光(fn un)光度法测定多糖含量一：方法(fngf)原理 先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、甙类及生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖成分。多糖在硫酸的作用下，水解成单糖

15、，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定其枸杞子多粮的含量。本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。二：仪器与试剂仪器：721型(或其他型)分光光度计试剂：葡萄糖标准液：精确称取105干燥恒重的标准葡萄糖10mg，置50ml的容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度。苯酚试液：取苯酚100g，加铝片0.1g，碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集182馏分，称取此馏分10g，加蒸馏水150 g，置棕色瓶中备用。三：测定步骤1. 标准曲线的制备。吸取葡萄糖标准液0.00ml、0.05ml、0.1ml、0.15ml、0.2ml、0.3ml，分置于具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2ml，再加

16、入苯酚试液1.0ml,摇匀，迅速加浓硫酸5.0ml，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温。于490nm处测吸收值，绘制标准曲线。2. 样品溶液的制备。精确称取样品粉未0.2g,置于圆底烧瓶中，加80%乙醇100ml回流提取胜1hr，趁热过滤，残渣用80乙醇洗涤（10ml3）。残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水100ml，加热提取1hr，趁热过滤，残渣用热水洗涤（10ml3）。洗液并入滤液，放冷后移入250ml量瓶中，稀释至刻度，备用。3. 样品中多糖的测定(cdng)。吸取适量样溶液（若为提取物，称取30mg到50ml,取0.1ml）,加蒸馏水使体积(tj)为2ml，再加

17、入苯酚(bn fn)试液1.0ml,摇匀，迅速加浓硫酸5.0ml，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温。于490nm处测吸收值。四：结果计算Cu%（Cs%AuWs）/（WuAs）Cu样品中的多糖含量Cs标样中的多糖含量As标样的吸光值（max）Au样品的吸光值（max）Wu样品重量（mg） Ws标样重量（mg） （五）分光光度法检测硫酸软骨素含量一：原理： 在浓硫酸条件下水解反应二：适用范围：原材料三：仪器设备：离心管、40ml带盖管形瓶、150mm17mm带盖、25ml移液管、可调移液枪及一次性管尖、漏斗、分析天平、离心机、滤纸、计时器、分光光度计四：试剂与标样：无水

18、醋酸钠、无水硫酸钠、硫酸软骨素A（或：葡糖醛酸）、咔唑、无水乙醇（色谱级）、浓硫酸五：操作程序：1. 0.125%咔唑溶液的配制准确称取25.0mg咔唑，溶于20ml无水乙醇，经无水醋酸钠过滤后置于40ml带盖管型瓶中，如有必要，可振荡或加温促溶。 2. 样品配制. 准确称取50.0mg硫酸软骨素或相应物溶于25ml超纯水，放置于50ml离心管中，如有必要可轻微加温或振荡。. 以4000rpm的速度离心5mins，取上清液进行分析。3. 标样配制准确称取50.0mg硫酸软骨素溶于25ml超纯水，放置于50ml离心管中，如有必要可轻微加温或振荡。4. 咔唑反应. 取5个带盖管形瓶，分别标记为空白

19、(kngbi)、标样（2个）和样品（2个）。. 称重(chn zhn)与记录A. 空白(kngbi)，加入1ml纯水。B. 标样，加入100ul标准溶液，记录重量，再加入900ul超纯水（配制双份）。C. 样品, 加入100ul样品上清液，记录重量，再加入900ul超纯水（每个样品配制双份）。. 沿管壁加5ml浓硫酸至每个管形瓶中，加盖振摇，注意尽量避免与盖接触。. 将所有管形瓶置于沸水浴中加热30mins，水面至少要高于液面1cm。. 取出管形瓶放置冷水中冷却1min。. 每管中加入200ul咔唑溶液，加盖振摇，注意尽量避免与盖接触。. 置于沸水浴中再加热20mins，然后冷水冷却至室温再进

20、行分析。六：分析紫外可见分光光度计检测波长设定在522nm区间。1. 用空白试剂调零。2. 扫描确定样品与标样的最大吸收波长（max），记录该处吸收值。七：质量控制确保每次标准样、检测样与其对应的重复样之间相对标准差不超过5.0%。八：计算：1Cu（CsAu）/As2Cs%（Cu25Gu100）/（WuGx）Cs硫酸软骨素Cu样品中的硫酸软骨素浓度Cs标样中的硫酸软骨素浓度As标样的吸光值（max）Au样品的吸光值（max）Wu样品重量（mg）（六）茶叶(chy)中游离氨基酸总量的测定茚三酮显色(xin s)法一：原理(yunl)氨基酸是水溶性物质，在索伦逊缓冲溶液中与茚三酮同时加热，形成紫色

21、的络合物。二：试剂的配制1. 2%茚三酮溶液：称取茚三酮1g，溶于25ml水中，加氯化亚锡(SnCl2.2H2O) 40mg，溶解冷却后加水定容至50ml，置于暗处。24h后摇匀，过滤。溶液置于暗处，可用数月。2. 索伦逊缓冲溶液：pH=8.0 取测多酚的缓冲溶液A95ml，加B溶液5ml，混匀。1/15M的Na2HPO4溶液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O)11.876g或(Na2HPO4.12H2O)23.876g，加水溶解并稀释至1升。B. 1/15M的KH2PO4溶液(rngy):称取经110烘干(hn n)2h的KH2PO4 9.078g，加水溶解(rngji)并稀释至1升

22、。三：测定方法试液制备(1) 原料样的处理同多酚测定(2) 速溶茶样品：称取速溶绿茶1g左右，红茶0.8g左右，普洱茶1.1g左右，加水溶解定容至100ml。2. 取1ml试液，注入25ml容量瓶中，加索伦逊缓冲溶液0.5ml，2%茚三酮溶液0.5ml，于沸水浴中加热反应15min，冷却后加水定容，放置10-15min，于570nm波长处，用0.5cm比色杯，试剂空白作对照，测其吸光度A。四：计算氨基酸(mg/100g)=(0.57AL1/L2)/(Mm)100A光密度M试液量(g)m试液干物率(%) L1总试液量(ml) L2所取试液量(ml)（七）黄酮类化合物分析三氯化铝比色法一：原理三氯

23、化铝与黄酮类化合物作用后，生成黄酮的铝络合物为黄色，黄色的深浅与黄酮的含量呈一定比例关系。二：试剂1%三氯化铝：称取三氯化铝(AlCl3.6H2O)1.7567g或AlCl30.9709g，加水溶解并稀释至100ml。三：测定方法1. 试液制备(zhbi)：原料样同前，速溶产品如蒲公英称取约1g，用水溶解并定容至100ml。2. 测定(cdng)：吸取试液0.5ml，加1%三氯化铝溶液至10ml，摇匀，静置10min后比色，以试剂空白(kngbi)作参比，用1cm比色杯，于420nm波长处测其吸光度A。四：结果计算黄酮甙(mg/g)=(A320L1/L2)/(Mm)/1000A光密度M试液量(

24、g)m试液干物率(%) L1总试液量(ml) L2所取试液量(ml)（八）葡萄籽提取物中原花青素含量的测定一：测定步骤1. 精确称取葡萄籽提取物50mg左右，用甲醇溶解至50ml。2. 取上述溶液1.0ml，用甲醇稀释至10ml，即得检测液。3. 试剂甲的配制：正丁醇/盐酸38%=95：5(V/V)，将95ml正丁醇与5ml38%的浓盐酸混合即可。4. 试剂乙的配制：2%的NH4Fe(SO4)2.12H2O/2NHCl溶液(W/V)，溶解2g NH4Fe(SO4)2.12H2O至100ml2NHCl溶液中。2NHCl的配制：取38%的浓盐酸1.67ml，用水定容至10ml。5. 在10ml带塞

25、离心管，精确加入1ml检测液，6ml试剂甲和0.2ml试剂乙，然后塞上塞子，在沸水中加热40min。6.待测试液冷却后，在546nm处用1cm比色杯测定吸光度A。二：计算原花青素(%)=A/(0.013890.366W)(九)红车轴草提取物中异黄酮的UV测定一：测定步骤1. 准确称取对照品和样品100mg置于100ml容量瓶中，加乙醇溶解，冷却定容至刻度。准确(zhnqu)吸取上述溶液0.5ml置于25ml容量瓶中，加无水乙醇(或95%乙醇(y chn)稀释(xsh)至刻度，摇匀。以乙醇为空白，在250nm波长处，用1cm石英比色杯测其吸光度A。比较样品吸光度与对照样吸光度的大小。（十）云芝多

26、糖含量的检测方法取云芝提取物0.2克，加30ml浓盐酸水解，水解液用20%NaOH中和至PH=7，加水定容至100ml，取5ml加入碱式酒石酸铜溶液，放置2分钟，加水定容至50ml，于625nm处测定吸光度，由标准曲线计算云芝多糖的含量。以灵芝多糖作为标准品按上述方法制作标准曲线。注：该方法由田杰提供（十一）人参皂甙的测定方法试剂1.1 甲醇、冰醋酸、高氯酸1.2 5%香草醛-冰醋酸溶液(rngy)1.3 人参(rnshn)皂甙Re对照品2. 操作步骤2.1 对照品的制备(zhbi) 精密称取人参皂甙Re对照品20mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1ml中含人参皂甙

27、Re对照品2 mg）2.2 供试品溶液的制备 取样品适量（约相当于人参皂甙20mg）精密称定置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为待测液。2.3 测定方法 精密吸取待测溶液与对照品溶液各25l，分别置10ml具塞试管内，在水浴中挥尽溶剂，立即取出，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，置600C水浴中加热15分钟，取出，立即以流水冷却2分钟，精密加冰醋酸5ml，摇匀，以相应的试剂为空白，在550nm处测定吸光度。3计算花旗参皂甙含量（%）：A样*C标*100A标*W样*1000式中：A样样品溶液的吸光度；A标对照品溶液的吸光度；C标对照品取样量；W样样品取样量

28、（g）。（十二）蜂胶制成品中总黄酮含量的测定一、方法(fngf)：以乙醇超声溶解(rngji)提取蜂胶中的总黄酮，Al3+为显色剂，芦丁为标准(biozhn)样，采用分光光度法测定蜂胶中总黄酮含量。二、步骤：试剂的配制：(1) 0.1mol/lAlCl3溶液：称取13.4g三氯化铝（AlCl36H2O）试剂，加水溶解并稀释1000ml，混匀，备用。(2) 1.0mol/l乙酸钾溶液：称取98.4g乙酸钾试剂，加水溶解并稀释1000ml，混匀，备用。(3) 芦丁标准溶液：精密称取105干燥至恒重的芦丁标准品0.1000g，用乙醇溶解，并定容至100ml，混匀后置棕色瓶中，吸取5.0ml，置于10

29、0ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，混匀。此溶液含芦丁50.0g/ml标准曲线制作：精密称取0.00、1.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml芦丁标准液，分别置于25ml比色管中，在各比色管中分别加入3ml0.1mol/lAlCl3溶液，5ml1.0mol/l乙酸钾溶液，再加乙醇至刻度，混匀后室温放置40min。在分光光度计415nm处以0#管作参比溶液，用1cm比色皿测定吸光值，得出吸光度值-芦丁含水量量标准曲线。样品测定：精密称取适量样品置于50 ml容量瓶中，加入70%乙醇溶液20 ml，水浴上回流1小时后，冷却至室温，用70%乙醇定容至50 ml，摇匀，过滤（滤去初滤液）。

30、取1 ml滤液于25 ml比色管中，并各加入3ml0.1mol/lAlCl3溶液及5ml1.0mol/l乙酸钾溶液，再加乙醇至刻度。取1 ml滤液于25 ml比色管中，加8 ml去离子水，再加乙醇至刻度，用作参比液。均在室温下放置40min，在415nm处用1cm比色皿测定吸光值。代入线性回归方程中计算结果。（十三）山楂叶黄酮类化合物提取(tq)工艺和测试方法1. 材料(cilio)和方法 材料(cilio)与仪器山楂叶：65烘干，粉碎后过60-80目备用。芦丁生物试剂，上海试剂一厂。甲醇、乙醇、丙酮、Al(NO3)3、NaOH、NaNO2均为分析纯。仪器：超级恒温槽、721分光光度计、电动搅

31、拌机、旋片式真空泵。1.2 实验方法1.2.1由山楂叶总黄酮的提取 准确称取5.0g山楂枝叶粉末置于磨口三颈瓶中，按要求加入一定量的提取剂，在一定温度下回流3h，趁热减压抽滤，滤渣加适量水洗涤，过滤，合并清液后减压蒸馏，回收溶剂至近干，加水约80ml溶解，加入20ml石油醚脱色两次，弃去醚层，加水定容于100ml容量瓶中待用。1.2.2 标准溶液配制和标准曲线将芦丁于120下干燥至恒重，准确称取芦丁标准品0.0146g，用30%乙醇溶解，定容于50ml，得浓度为0.292mg/ml芦丁标准溶液。准确吸取芦丁标准溶液0、0.25、0.5、1.5、2.0、2.5ml于10ml容量瓶中，加入5% N

32、aNO2溶液0.3ml，摇匀，放置6min加入4% NaOH溶液4.0ml，30%乙醇定容，摇匀，10min后于510nm处测定吸光度A，得芦丁含量g(g/ml)与吸光度A之间的回归方程：y=559.157A+1.73722(r=0.9997)1.2.3 山楂叶总黄酮测定取1.2.1是待测液5.0ml于50ml容量瓶中，用30%乙醇定容，取2.0ml于10ml容量瓶中，以下操作同1.2.2标准曲线，测定其在510nm处吸光度A，从山楂叶中提取的总共同酮含量可按下列公式计算：总黄酮含量（%）=y100/550/210-3/w100式中：（100/5）和（50/2）为稀释倍数；w为山楂叶重(g)注

33、明：Al(NO3)3溶液每次测样时配制：称取1.76g Al(NO3)39H2O10mlNaOH溶液每次测样时配制：称取2gNaOH10mNaNO2溶液每次测样时配制：称取0.5gNaNO210m（十四）蛋白质含量(hnling)的测定 -考马斯亮蓝法试剂(shj) 考马斯亮蓝：50mg(G-250)+25ml95%乙醇(y chn)+50ml85%（W/L）-用水定容至500ml. 标准蛋白溶液(100ug/ml) 牛血清蛋白50mg，用水溶解，并定容至50ml，取10ml用水定容至100ml.2. 标准曲线的绘制 取200、400、600、800、1000ug的牛血清蛋白标准溶液0.1ml

34、，分别放入10ml试管中，加入5ml考马斯亮蓝，混匀，2分钟后于595nm处比色测吸光度，空白以蒸馏水代替标准液。3. 测定 取0.1ml 试液，加入5ml(G-250)试剂，充分混匀，放置2分钟，用1cm比色杯于595nm处比色测吸光度，查标准曲线的蛋白质含量为Aug。4. 计算 蛋白质(ug/50ml)=A*50（十五）水溶性碳水化合物的检测(jin c) -蒽酮比色法试剂(shj)：蒽酮试剂(shj)：0.6g蒽酮100ml浓硫酸，混匀（现用现配）。标准曲线的绘制无水葡萄糖（分析纯）配制200、150、100、50、25ug/ml的标准液分别取1ml于8ml蒽酮时试剂的试管中，边滴边摇沸

35、水浴3分钟冷却620nm处比色（蒸馏水作对照）。测定取1ml试液逐滴加入至有8ml蒽酮试剂的试管中，沸水浴3分钟，冷却，620nm处比色测吸光值，查标准曲线得葡萄糖的含量Aug。计算碳水化合物(ug/50ml)=A*50HPLC检测(jin c)方法(一) HPLC法测定儿茶素1)试剂(shj)a. 甲醇(ji chn)（色谱纯） b. 冰醋酸（分析纯） c.甲酰胺（分析纯） b. 重蒸水 2)仪器高效液相色谱仪（岛津） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200

36、mm波长 278nm流动相 A: 水 B: 甲酰胺:甲醇:冰醋酸=40:2:1.5流速 1.1 ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取30mg提取物于50ml容量瓶中，用水超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。标样制备 精密称取混合标样用水溶解，使其浓度为0.6mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。 样品中各组分的含量%=A1CV A2W（二）HPLC法测定延胡索乙素1)试剂(shj)a. 甲醇(ji chn)（色谱纯） b. 重蒸水 c. Na2HPO4、NaH2PO4(分析(fnx)纯)2)仪

37、器高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m微孔过滤器 50ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 280nm流动相 缓冲液:甲醇:水=1.8:65:35 缓冲液：0.98g NaH2PO4+2.24g Na2HPO4于100ml水中流速 1.0 ml/min进样量 10 l4)样品制备(1)待测样品 精确称取25mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。(2)标样制备 精密称取标样用甲醇溶解，使其浓度为0.5mg/ml，过0.45m

38、滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。（三）HPLC法测定5-羟色胺1)试剂(shj)a. 甲醇(ji chn)（色谱纯） b. 重蒸水 2)仪器(yq)高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 278nm流动相 A:水 B: 甲醇流速 1.0 ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取20mg提取物于50ml容量瓶中，用5%甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜

39、过滤为供试液。标样制备 精密称取标样用5%甲醇溶解，使其浓度为0.4mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算(j sun)各种成份的含量。（四） HPLC法测定白柳皮中的水杨甙含量(hnling)1)试剂(shj)a. 甲醇（色谱纯） b. 重蒸水 c.乙腈（色谱纯） d.磷酸（分析纯）2)仪器高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 25 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 269nm流动相 A: 0.01%磷酸 B: 甲

40、醇：乙腈=1:1流速 0.8ml/min进样量 10 l4)样品制备（1） 待测样品 精确称取60mg提取物于25ml容量瓶中，用水：甲醇=1:1(超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备(zhbi) 精密(jngm)称取标样用水:甲醇(ji chn)=1:1(V/V)溶解，使其浓度为0.6mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。(五) HPLC法测定大豆异黄酮1)试剂a. 甲醇（色谱纯） b. 重蒸水 2)仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m微孔过滤器

41、50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Shim-pack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm波长 260nm流动相 A:水 B: 甲醇流速 1.1ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品(yngpn) 精确(jngqu)称取25mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇(ji chn)超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备 精密称取混合标样用甲醇溶解，使其浓度为0.5mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。（六）HPLC法测定葛根中的葛根异黄酮含量1)试剂a. 甲醇（色谱纯）

42、b. 重蒸水 2)仪器高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 260nm流动相 A:水 B: 甲醇流速 1.0 ml/min进样量 10 l4)样品制备（1） 待测样品(yngpn) 精确(jngqu)称取25mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解(rngji)，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。标样制备 精密称取混合标样用甲醇溶解，使其浓度为0.5mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各

43、峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。（七）HPLC法测定红景天1)试剂a. 甲醇（色谱纯） b. 重蒸水 c. 醋酸铵(分析纯) 2)仪器高效液相色谱仪（shimadzu） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m微孔过滤器 25ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 276nm流动相 A: 0.16mol/l醋酸铵 B: 甲醇流速 0.8ml/min进样量 10 l4)样品(yngpn)制备（1）待测样品(yngpn) 精确(jngqu)称取60mg提取物于25ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.4

44、5 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备 精密称取标样用甲醇溶解，使其浓度为0.5mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。（八）HPLC法测定厚朴中的厚朴酚和和厚朴酚含量1)试剂 a. 重蒸水 b. 甲醇（色谱纯） 2)仪器 高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45m微孔过滤器 50ml容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件 色谱柱 Hypersil ODS C18 5m 4.620mm 波长(bchng) 294nm 流动(lidng)相 A: 水 B: 甲醇(ji chn) 进样量 10l 流速

45、1.0ml/min4)样品的制备（1）待测样品：精确称取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，超声定容，0.45m微孔滤膜过滤即为供试液。（2）标准样品: 精确称取厚朴酚、和厚朴酚标准品用甲醇溶解,使其浓度为0.2mg/ml, 0.45m微孔滤膜过滤。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。（九）HPLC法测定卡瓦内酯1)试剂a. 甲醇（色谱纯） b. 重蒸水 c.乙腈（色谱纯） d. 磷酸（分析纯）2)仪器高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱(s p)柱 Hy

46、persil ODS C18 5 m 4.6200mm波长(bchng) 260nm流动(lidng)相 A: 0.1%磷酸 B: 甲醇:乙腈=1:1流速 1.2ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取20mg提取物于50ml容量瓶中，用5%甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。标样制备 精密称取混合标样用5%甲醇溶解，使其浓度为 0.6mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。(十) HPLC法测定蜕皮激素1)试剂a. 甲醇（色谱纯） b. 乙腈（色谱纯） c. 重蒸水2)仪器高效液相色谱仪（Be

47、ckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱(s p)条件色谱(s p)柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长(bchng) 247nm流动相 A: 水 B: 乙腈流速 1.0ml/min进样量 5 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取20mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇:水=1:1超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备 精密称取蜕皮激素标样用甲醇:水=1:1溶解，使其浓度为0.1mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法

48、计算各种成份的含量。（十一）HPLC法测定淫羊藿甙1)试剂 a. 重蒸水 b. 乙腈（色谱纯） c. 冰醋酸（分析纯）2)仪器 高效(o xio)液相色谱仪（Beckman） 分析天平(fn x tin pn)（1/10000） 超声波清洗(qngx)仪 0.45m微孔过滤器 50ml容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件 色谱柱 Hypersil ODS C18 5m 4.620mm 波长 270nm 流动相 A: 水:冰醋酸=50:1 B:乙腈 进样量 10l 流速 0.7ml/min4)样品的制备（1）待测样品：精确称取20mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，超声定容，0.45m微孔滤膜

49、过滤即为供试液。（2）标样制备 精密称取淫羊藿甙标样用甲醇溶解，使其浓度为0.1mg/ml,过过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算 根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。 （十二）HPLC法测定枳实多酚1)试剂a. 甲醇（色谱纯） b. 重蒸水 c. 磷酸(分析纯)2)仪器高效(o xio)液相色谱仪（Beckman） 分析天平(fn x tin pn)（1/10000） 超声波清洗(qngx)仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 280nm流动相 A: 0.1%磷酸 B: 甲醇

50、流速 0.8 ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备 精密称取标样用甲醇溶解，使其浓度为0.6mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。(十三) HPLC法测定枳实辛弗林1)试剂a. 乙腈（分析(fnx)纯） b. 重蒸水 c. 磷酸(ln sun)（分析纯） d.十二(sh r)烷基磺酸钠（SDS）2)仪器高效液相色谱仪（Shimadzu） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 5

51、0 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 230nm流动相 A:水（含0.02%mol/L磷酸、0.2%十二烷基磺酸钠） B: 乙腈流速 0.8ml/min进样量 10 m4)样品制备（1）待测样品 精确称取30mg提取物于50ml容量瓶中，用0.1mol/L磷酸超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备 精密称取标样用0.1mol/L磷酸溶解，使其浓度为0.6mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。(十四) HPLC法测定中药复方1)试剂(s

52、hj)a. 甲醇(ji chn)（色谱纯） b. 重蒸水 c. 磷酸(ln sun)（分析纯）2)仪器高效液相色谱仪（Beckman） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 25 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 274nm流动相 A: 0.1%磷酸 B: 甲醇流速 0.8ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取120mg提取物于25ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）对照样制备 精密称取对照样用甲醇溶解，使其浓度为120

53、mg/25ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据样品与对照样各峰峰面积之比比较各种成份的含量。(十五) HPLC法测定白藜芦醇)试剂(shj)a. 乙腈（色谱(s p)纯） b. 重蒸水 c. 磷酸(ln sun)（分析纯）2)仪器高效液相色谱仪（Shimadzu） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Shim-pack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm波长 302nm流动相 A: 水 B: 乙腈流速 1.0ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取15mg提取物于5

54、0ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）标样制备 精密称取标样用甲醇溶解，使其浓度为0.2mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据各峰峰面积利用外标法计算各种成份的含量。(十六) HPLC法测定葡萄籽中的原花青素1)试剂(shj)a. 甲醇(ji chn)（色谱纯） b. 乙腈（色谱(s p)纯） c. 冰醋酸（分析纯）2)仪器高效液相色谱仪（Waters） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长

55、 280nm流动相 A: 1%磷酸 B: 1%醋酸乙腈流速 1.0ml/min进样量 10 l4)样品制备（1）待测样品 精确称取60mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）对照样制备 精密称取对照样用甲醇溶解，使其浓度为1.2mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据样品与对照样各峰峰面积之比比较各种成份的含量。(十七(sh q) HPLC法测定红车轴(chzhu)草1)试剂(shj)a. 甲醇（色谱纯） b. 重蒸水2)仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤

56、器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波长 260nm流动相 A: 水 B: 甲醇流速 1.1ml/min进样量 10l4)样品制备（1）待测样品 精确称取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）对照样制备 精密称取红车轴草对照样用甲醇溶解，使其浓度为0.6mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据样品与对照样各峰峰面积之比比较各种成份的含量。(十八) HPLC法测定苦瓜(kgu)皂甙1)试剂(shj)a. 甲醇(ji chn)（色谱纯） b. 重

57、蒸水 c.乙腈2)仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶3)色谱条件色谱柱 Kromasil ODS C18 5 m 4.6150mm波长 208nm流动相 A: 水 B: 甲醇:乙腈=1:1流速 0.8ml/min进样量 10l4)样品制备（1）待测样品 精确称取120mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）对照样制备 精密称取对照样用甲醇溶解，使其浓度为120mg/50ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据样品与对照样各峰峰

58、面积之比比较各种成份的含量。(十九(sh ji) HPLC-ELSD法测定积雪草甙和羟基(qingj)积雪草甙1)试剂(shj) a. 重蒸水 b.乙腈(色谱纯)2)仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶ELSD检测仪3)色谱条件色谱柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm流动相 A: 水 B: 乙腈流速 0.7ml/min进样量 10l漂移管温度：101.5气体流速：2.8l/min4)样品制备（1）待测样品 精确称取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶

59、解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）对照样制备 精密称取对照样用甲醇溶解，使其浓度为0.2mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据样品与对照样各峰峰面积之对数比比较各种成份的含量。(二十) HPLC-ELSD法测定山药中的薯蓣(shy)皂素1)试剂(shj) a. 重蒸水 b.乙腈(色谱(s p)纯)2)仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超声波清洗仪 0.45 m 微孔过滤器 50 ml 容量瓶 带塞小玻璃瓶ELSD检测仪（Alltech）3)色谱条件色谱柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm流动相

60、 A: 水 B: 乙腈流速 1.0ml/min进样量 10l漂移管温度：74.5气体流速：1.9l/min4)样品制备（1）待测样品 精确称取250mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，离心，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。（2）对照样制备 精密称取对照样用甲醇溶解，使其浓度为0.2mg/ml，过0.45m滤膜，置冰箱贮存。5)计算根据样品与对照样各峰峰面积之对数比比较(bjio)各种成份的含量。（二十一） HPLC-ELSD法测定黄芪(hungq)甲甙1)试剂(shj) a. 重蒸水 b.乙腈(色谱纯)2)仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU） 分析天平（1/10000）