对乙酰氨基酚生物等效性试验设计

1、其偏差在20%以内，其余各点在15%以内。表一HPLC法测得的对乙酰氨基酚标准曲线(n=5)对乙酰氨基酚缓释片人体生物等效性试验设计1试药与仪器1.1试药受试制剂（T）“倍乐信”（对乙酰氨基酚缓释片成都恒瑞制药有限公司每片650mg）;参比制剂（R）“泰诺林”（对乙酰氨基酚缓释片美国强生公司生产每片650mg）；对乙酰氨基酚、茶碱标准品（中国药品生物制品检定所）。试剂：乙月青（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、氯仿（分析纯）、异丙醇（分析纯）、水。1.2仪器高效液相色谱仪，旋涡混合器，高速冷冻离心机，超声清洗器，电子天平。2试验方法2.1血浆中对乙酰氨基酚的HPLC法测定2.1.1色谱条件的确定查阅相

2、关文献初步定为流动相：甲醇：乙月青：水（25:15:360v/v）；流速lml/min；柱温为室温；检测波长254nm。进样10uL实验时进行条件的优化。2.1.2血样的处理取血浆0.5ml加50u1的内标茶碱标准溶液（20ug/ml）,涡旋混匀，加入萃取液氯仿-异丙醇（41,V/V）5nil,涡旋2nnn,400017mm离心lOmin,弃上层水相，定量取下层有机相3.8nil,氮气吹干，200U1流动相复溶，10U1进样分析。2.1.3方法的专属性取空白血浆0.5ml,按2.1.2项操作（不加内标），得空白血浆色谱图；取空白血浆制备1ng/ml对乙酰氨基酚血浆样品，按2.1.2项操作，得对

3、乙酰氨基酚标准品和内标色谱图；取受试者口服倍乐信lh后的血浆样品，按2.1.2项操作，得受试者血浆样品提取后色谱图。每组6个样品，每个样品进样一次，记录保留时间，观察内源性物质对测定是否有影响。2.1.4标准曲线和定量下限的建立取空白血浆0.5ml分别加入内标物茶碱50U1和对乙酰氨基酚对照品适量,使之每lml含0.02,0.05,0.1,0.25,1.0,2.5,5,10,25ug对乙酰氨基酚的溶液，按2.1.2项下的操作，每份浓度做5份样品，记录峰面积，以待测物和内标物峰面积比值（Y）为纵坐标，对乙酰氨基酚浓度（C）为横坐标，进行线性回归，计算直线回归方程Y=aC+b。并得回归系数R。实验

4、时进行条件的优化，使得R20.999。定量下限为所配置的标准品最低浓度,浓度/Pg/ml待测物和内标峰面积比值Y平均值0.020.050.10.251.02.5厂31025表二HPLC法测得的对乙酰氨基酚标准曲线定量卜限的精密度加入浓&/ug/ml实测浓度/ug/ml准确度实测平均值/Pg/mlRSD%120.023452.1.5方法的精密度与准确度取空白血浆0.51111,按2.1.2项操作，制备低、中、高(0.05,1.0,20ug/ml)三种浓度的对乙酰氨基酚标准溶液，每一浓度5个样品，分别在5天内重复测定三次，根据随行标准曲线获得相应浓度，计算日内、日间精密度和准确度。若准确度80%-

5、120%,一般精密度15%,定量限20%以内，则方法的精密度和准确度好。表三对乙酰氨基酚的精密度和准确度表三对乙酰氨基酚的精密度和准确度浓度/P第一批第二批第三批均值/U日间日内准确度g/nilg/mlRSD/%RSD/%/%Xi(0.05)1/2345X2(1.0)X2X3(20)X?2.1.6提取回收率取空白血浆0.51111,按2.1.2项操作(不加内标),分别配置低、中、高(0.05,1.0,20ug/ml)质量浓度的对乙酰氨基酚标准溶液和对乙酰氨基酚血浆样本，每一浓度5样本分析，分别获得相应峰面积Ao,At,以At/A0X100%计算对乙酰氨基酚提取回收率。配置1.0ug/nil内标

6、物标准溶液和血浆样本，5样本分析，同法操作，计算内标物提取回收率，要求提取回收率$70%。表四对乙酰氨基酚的提取回收率浓度/Pg/mlAtAoAt/Ao/100%Xi(0.05)X2(1.0)X3(20)2.1.7稳定性试验(n=3)取空白血浆0.5ml,按2.1.2项操作，配置低、中、高(0.05,1.0,20ug/ml)质量浓度的对乙酰氨基酚标准溶液，每一浓度5个样品，分别立即测定、室温8小时、反复冻融、-20C冰冻3周测定，观察其稳定性。表六受试者采样点表五对乙酰氨基酚的稳定性加入浓度/Pg/mlXiX2X3立即测定111测得浓度室温8小时222平均值/ug/ml反复冻融3次333-20

7、C冰冻3周4442.1.8方法学质控取空白血浆0.5nil,按2.1.2项操作，分别配置低、中、高(0.05,1.0,20ug/ml)质量浓度质控样品，从低到高穿插在整个分析批中，每个浓度双样本，和生物样品同时测定，并用随行的标准曲线上计算。要求低浓度的偏差在20%,中高浓度在15%,允许1/3质控样品擦、超过限度，但不能为同一浓度。2.2生物利用度研究2.2.1受试者选择健康状况：健康受试者应无心血管、肝脏、肾脏、消化道、精神神经等疾病病史，无药物过敏史。在试验前应详细询问既往病史，作全面的体格检查及实验室检查。年龄和体重：健康男性，一般在18-45岁。体重一般不应低于50kg。按体重指数=

8、体重(kg)/身高2(nf)计算，一般在1924范围内。因临床上大多数药物不按体重计算给药剂量，所以同批受试者的年龄和体重应比较接近。本试验设计24名健康男性受试者，签署受试者知情同意书，实验前一周及实验期间未服用其他任何药物及烟酒，并统一饮食。2.2.2试验方案釆用非盲多剂量双交义试验设计方案。24名受试者随机分为两组，分别口服一片T/8h,R/8h,连续服药4天后，经过5天清除期后交换服药。受试者至少空腹12h,于早上&00时用200ml温开水送服，2小时后统一安排进食，以消除食物对药物的影响。2.2.3采样点按表六时间安排受试者肘静脉采血3ml,冷冻离心得血浆，-20C保存待用。第一天第

9、三天第四天0.5丄15,22535665仏75T（倍乐信）,8（服药前），9.5J2110.5丄1.5,225,35,66（8:00,16:00）5,7,75,8（川I药前）,9.5,1211,24,36,4811R（泰诺林）0.5丄15225,35665,7,758（服药前），9.5J2h（8:00,16:00）0.5丄1.5,225,35,665,7,75,8（川I药前）,9.5,1211,24,36,48113结果3.1血药浓度时间曲线多剂量口服对乙酰氨基酚缓释片T和R后，将采的血样按2.1.2项下操作，根据随行标准曲线得到相应血药浓度，作血药浓度-时间曲线。3.2药代动力学参数多剂量口服对乙酰氨基酚缓释片T和R后主要药代动力学参数填入下表。泰诺林表七多剂量II服对乙酰氨基酚缓释片主要药代动力学参数倍乐信Tmax/h第一天Cmax，口g/ml第四天CmaxUg/mlCnunss/Ug/mlAUCo*ss/hgh/mlAUCo-oo.烏uglVnilCL/F/ml/hTl/2/h3.3生物等效性评估应用药代动力学软件(3P97)对