微生物病理技能训练教程

1、.微生物病理技艺训练教程PAGE ：.；PAGE 79PAGE 0目 录 TOC o 1-2 h z u HYPERLINK l _Toc215999294 第一部分 微生物病理根底知识 PAGEREF _Toc215999294 h 1 HYPERLINK l _Toc215999295 11 鞭毛菌亚门及其所致病害的特点 PAGEREF _Toc215999295 h 1 HYPERLINK l _Toc215999296 12 接合菌亚门及其所致病害的特点 PAGEREF _Toc215999296 h 3 HYPERLINK l _Toc215999297 13 子囊菌亚门及其所致病害

2、的特点 PAGEREF _Toc215999297 h 4 HYPERLINK l _Toc215999298 14 担子菌亚门及其所致病害的特点 PAGEREF _Toc215999298 h 7 HYPERLINK l _Toc215999299 15半知菌亚门及其所致病害的特点 PAGEREF _Toc215999299 h 8 HYPERLINK l _Toc215999300 第二部分 微生物病理实验根本操作 PAGEREF _Toc215999300 h 9 HYPERLINK l _Toc215999301 21 植物病理徒手制片技术 PAGEREF _Toc215999301

3、h 9 HYPERLINK l _Toc215999302 22 培育基的配制和灭菌 PAGEREF _Toc215999302 h 11 HYPERLINK l _Toc215999303 23 植物病原菌的分别和培育 PAGEREF _Toc215999303 h 15 HYPERLINK l _Toc215999304 24 真菌孢子的萌生 PAGEREF _Toc215999304 h 18 HYPERLINK l _Toc215999305 25 植物病原物的接种 PAGEREF _Toc215999305 h 20 HYPERLINK l _Toc215999306 26植物病原生

4、物绘图技术 PAGEREF _Toc215999306 h 21 HYPERLINK l _Toc215999307 第三部分微生物病理技艺训练 PAGEREF _Toc215999307 h 23 HYPERLINK l _Toc215999308 实训一 植物病原细菌察看 PAGEREF _Toc215999308 h 23 HYPERLINK l _Toc215999309 实训二鞭毛菌亚门真菌及其所致病害病症察看 PAGEREF _Toc215999309 h 25 HYPERLINK l _Toc215999310 实训三接合菌亚门真菌及其所致病害病症察看 PAGEREF _Toc2

5、15999310 h 29 HYPERLINK l _Toc215999311 实训四子囊菌亚门真菌及其所致病害病症观 PAGEREF _Toc215999311 h 30 HYPERLINK l _Toc215999312 实训五 担子菌亚门真菌及其所致病害病症察看 PAGEREF _Toc215999312 h 35 HYPERLINK l _Toc215999313 实训六 半知菌亚门真菌及其所致病害病症察看 PAGEREF _Toc215999313 h 38微生物病理技艺训练教程第一部分 微生物病理根底知识11 鞭毛菌亚门及其所致病害的特点1、鞭毛菌亚门的主要特点(1)鞭毛菌亚门真菌

6、的共同特征是无性产生具1-2根鞭毛的游动孢子，因此通常称作鞭毛菌。(2)鞭毛菌有性产生休眠孢子囊和卵孢子。(3)鞭毛菌营养体从原质团到无隔菌丝体，属低等真菌。(4)鞭毛菌大多具有水生习性，因此只需在高湿、多雨、低洼积水和通风透光不好的条件下，侵染植物导致病害。(5)鞭毛菌繁衍时，有的整个营养体全部转变为繁衍体，称为整体产果，如壶菌；有的只是营养体的一部分转变为营养体，称为分体产果。(6)游动孢子囊形状多样，均可释放游动孢子。(7)游动孢子具1-2根鞭毛。鞭毛有茸鞭和尾鞭两种。每个游动孢子具单鞭或双鞭两种类型。(8)鞭毛(Flagellum)的构造是9+2型。既鞭杆是由9根纤丝组成一个圆筒型体，

7、圆筒型体中心还有2根纤丝。纤丝之间填充有胶质鞘。共31条亚纤丝。2、鞭毛菌亚门的致病特点(1)常见病症：腐烂、斑点、猝倒、流胶。(2)果实上腐烂使果变褐色、呈软腐状，病部长出白色绵毛状或灰白色霜状霉层。(3)茎基和根部被害使皮层变褐色腐烂。(4)叶上斑点，假设由疫霉引起，病斑较大，暗褐色圆形水渍病斑；假设由霜霉引起，病斑较小，黄色至褐色，边缘不明显，病斑受叶脉限制呈多角形，后期在病斑上长出白色至灰白色霜状霉层。(5)病菌以卵孢子越冬，由孢子囊和游动孢子引起初侵染和再侵染，借雨水和气流传播。(6)埋伏期短，可多次再侵染，普通在低温多雨潮湿多雾、昼夜温差大的气候条件下，病害容易发生。3、与园艺植物

8、有关的鞭毛菌(1)根肿菌属Plasmodiophora由根肿菌属的病菌引起的，在病组织内这些呈鱼卵状陈列的是病菌的休眠孢子囊。休眠孢子囊在寄主细胞内分散呈鱼卵块状，萌生时产生前端有2根鞭毛长短不一的游动孢子。休眠孢子囊对不适宜的环境顺应性强，能在土中存活多年，是病菌的初侵染源。2腐霉属Pythium腐霉是低等的鞭毛菌，无性繁衍在菌丝顶端构成孢子囊，孢子囊近球形或不规那么形，成熟后普通不零落，萌生时产生游动孢子。有性繁衍在藏卵器内构成一个卵孢子。如引起黄瓜、茄子等幼苗瘁倒病的病菌，都属于腐霉属。(3)疫霉属Phytophthora孢子囊在孢囊梗上，孢囊梗无限生长。孢子囊卵圆形，成熟时零落，萌生时

9、产生游动孢子，或直接萌生长出芽管。有性生殖在藏卵器内构成一个卵孢子。(4)霜霉科Peronosporaaceae 高等的鞭毛菌，都是植物体上的活体寄生菌，菌丝蔓延在寄生的细胞间，以吸器伸入寄主的细胞内吸收营养。孢囊梗有限生长，呈树枝状分枝。孢子囊在孢囊梗上构成，孢子囊卵圆形，顶端乳头状突起，萌生产生游动孢子，或直接长出芽管。有性生殖构成卵孢子。(5)白锈菌属(Albugo)活体寄生物，菌丝在寄主细胞间蔓延，以吸器伸入寄主细胞内吸收营养。孢囊梗 不分枝，短棍棒状，密集在寄主表下，陈列成栅栏状，每一孢囊梗 顶端串生孢子囊。孢子囊椭圆形，成熟后寄主表皮散出如白锈粉。卵孢子壁厚，外表有瘤状突起。12

10、接合菌亚门及其所致病害的特点1、接合菌亚门的主要特点1菌丝体无隔多核，细胞壁由甲壳质组成。2无性生殖构成孢子囊，产生不能游动的孢囊孢子。3有性生殖构成接合孢子。2、接合菌亚门的致病特点其多为腐生菌，广泛分布于土壤和粪肥中，少数为弱寄生菌，可引起果实贮藏期腐烂。知接合菌亚门分2个纲、7个目、约600个种。与园艺植物病害有关的是接合菌纲、毛霉目、根霉属。3、与园艺植物有关的接合菌根霉菌Rhizopus1菌丝兴隆，分布在基物上和基物内，有匍匐丝和假根。2孢囊梗从匍匐丝上长出，顶端构成孢子囊，内生孢囊孢子，孢子囊壁破散出孢囊孢子。3有性生殖构成接合孢子不常见。4黑根霉引起贮藏甘薯软腐病。13 子囊菌亚

11、门及其所致病害的特点1、 子囊菌亚门的主要特点1营养体全世界发现32,000种，占真菌的1/3，都是高等真菌，寄生，形状千差万别，但共同点是构成子囊。子囊(Ascus)，子囊孢子(Ascospore)。简单的仅为单细胞，但大多数有兴隆的菌丝体，菌丝有隔，每个细胞有一个、二个、多个核，壁以几丁质为主，营养体可以构成厚垣孢子。有的菌丝可以直接构成粉孢子，芽孢子。很多可以构成营养菌丝的组织体。2子囊菌的无性繁衍产生分生孢子或孢子器，非常兴隆，外形多样，圆形，卵形，棒形，丝状，镰刀形(新月形)，蜡肠形，有单孢，双孢，多孢。有的有色，有的无色。分生孢子梗：可以分枝或不分枝，散生，丛生，束生，(孢梗束Co

12、remium)，有的分生孢子梗着生在简单的分生孢子痤上(Sporodochium)，有的构成在分生孢子盘上(Acervulus)，有的构成分生孢子器上(Pycnidium)。分生孢子作用：在一个生长季可以反复发生，是再侵染的来源，“可以远间隔 传播，有的高等子囊菌在终身中仅发生无性，无有性。3子囊菌的有性繁衍子囊：子囊外形有圆形，椭圆形或棒状。子囊壁有的单层壁，有的双层壁,有的囊壁成熟后溶解，有的不溶，有的子囊顶有孔口，有的无孔口。子囊有的单个散生，有的多个并列，有的丛生。子囊之间的有的有侧丝。子囊孢子Ascospore：形状多种多样，圆形，椭圆形，丝状，单胞，双胞，多胞，无色或有色。在子囊内

13、陈列的有散生，单列，双列，并列，螺旋形陈列。子囊果Ascocarp：在子囊外部具一菌组织包被的壳，这种类型的子实体称子囊果。子囊果的类型A、 闭囊壳完全封锁呈球形。B、子囊壳球形或瓶状，顶端有孔口。C、子囊盘盘状或杯状，顶端开口大。D、子囊座子囊着生在子座的空腔内。2、 与园艺植物有关的子囊菌(1)外囊菌属Taphrina无子囊果，子囊平行陈列在寄主外表呈栅状。无性繁衍是子囊孢子在子囊内芽殖产生芽孢子，芽孢子还可继续芽殖。常见病状：畸形，叶片伸展、果实膨大等。(2)白粉菌目 (Eryshiphales) 白粉菌目的真菌普通称作白粉菌，引致各种植物白粉病(Powdery mildew)。菌丝白色

14、，大都表生，产生吸器汲取植物营养。 主要寄生在叶片上，有的发生在新梢或芽上。在病部构成白粉或小黑点。 无性世代：非常兴隆，由菌丝构成分生孢子梗和分生孢子。分生孢子链生或单生，不断产生。构成白粉。 有性世代：寄生后期在菌丝的上部构成闭囊壳(小黑点)，有附属丝，便于传播。闭囊壳内有一个或多个子囊，子囊内有2-8个子囊孢子，子囊孢子单孢无色。 寄生专化性：专性寄生，有生理小种，寄主有8435种。有的白粉菌只需一种寄主，而一种寄主可寄生多种白粉菌。如：桑树有桑表达粉，桑里白粉。柞树有七种白粉病。白粉病发生的条件：对温度要求不严厉，干旱地域、潮湿地域都可发生，白粉菌的孢子在水中反而不易发芽或破裂，在潮湿

15、的空气中易发芽，该孢子浸透压很高，36-68个大气压，因此很易吸收周围的空气中的水分。白粉菌分属根据：闭囊壳附属丝的外形和壳内子囊的数目。白粉菌闭壳菌：菌丝以吸器吸收营养；子囊着生在闭囊壳内，外部有附着丝；菌丝分化成分生孢子梗，顶端串生分生孢子，呈白粉状故名白粉菌。(3)核菌主要特点A、这类真菌种类多，形状变化大，子囊着生在具有孔口的子囊壳内。B、子囊壳散生或聚生在寄主的组织中，子囊内具8个子囊孢子。C、病害流行是分生孢子多次再侵染。D、病害病症：引起树皮腐烂、溃疡、瘤肿和枝枯；损害果实引起腐烂和轮纹等病症。主要种类A、小丛壳属 Glomerella子囊壳小，球形，半埋生在子座内；子囊棍棒状，

16、无侧丝；子囊孢子单孢无色，长椭圆形，稍弯曲。有性世代在自然界很少发生，无性世代为炭疽菌属(Colletotrichum)。如棉花炭疽病G.gossypii，苹果梨炭疽病G.cingulata。B、黑腐皮壳属 Valsa子囊壳埋生子座基部，有长颈伸出子座；子囊孢子腊肠状，单胞无色或暗色。无性世代是壳囊孢属(Cytospora)。只能为害树皮，不能为害绿色部分。苹果树腐烂病。C、囊孢壳属Physalospora无子座。子囊壳黑色，埋生于寄主组织内。子囊较大，棍棒状，子囊孢子单胞，无色，长度普通大于20um.引起园艺病害如梨轮纹病等。D、间座壳属Diaporthe子囊壳埋生在子座基部，梨形或球形，黑

17、色，顶端有短喙状突起。子囊圆柱形，有顶环。子囊孢子线形多胞。无性世代不发生。如引起茄褐纹病。4腔菌主要特点A、子囊着生在子座的空腔内，子囊间无侧丝，子囊具双层壁 。B、无性生殖兴隆，可构成各种形状的分生孢子，对植物危害主要是分生孢子侵染。C、病害病症：斑点、疮痂和腐烂。主要种类A、痂囊腔菌属 Elsinoe子囊在子囊腔中不规那么散生，每个子囊腔只需一个球形子囊，子囊孢子长圆筒形，3隔4胞、无色。为害植物主要是无性世代，在分生孢子盘上产生分生孢子。(痂圆孢属Sphaceloma)我国有性世代未发现，主要无性。代表：葡萄黑痘病。球座菌属GuignardiaB、球座菌属Guignardia本属与上属

18、形状根本一致，本属子囊孢子单胞假双孢。无性世代很兴隆，包括在叶点菌属和茎点菌属。葡萄黑腐病菌G.biwellii，葡萄房枯病菌G.baccae。C、球腔菌属 Mycosphaerella子囊座着生在寄主叶片表皮层下；假囊壳为埋生、球形，或扁圆形，孔口扁平或呈乳头状突起。子囊孢子椭圆形、无色，双胞大小相等。无性世代包括许多属，如叶点菌属Phyllosticta，茎点菌属Phoma，尾孢属Cercospora。代表：禾本科植物黑霉病D、黑星菌属Venturia假子囊壳很小，外表生有刚毛，埋生或表生。子囊孢子椭圆形，双胞大小不等，淡色，个别褐色，可为害植物叶片和果实。无性黑星孢Fusicladium

19、代表病害：梨黑星病V.pirina 苹果黑星病V.inaequelis5盘菌子囊果呈盘状或杯状，内生子囊。子囊盘有些从菌核或假根菌核上长出，盘菌普通很多不产生分生孢子。盘菌引起植物病害大多腐生，少数寄生。核盘菌属 Sclerotinia菌丝体可以构成菌核真菌核和假菌核，菌核萌生后可形生长柄子囊盘，子囊棍棒状，平行陈列，有拟侧丝。子囊孢子椭圆形或仿缍形，单胞无色。无性世代不发生。寄主范围很广，可侵染32科160多种植物。代表：油菜、向日葵菌核病14 担子菌亚门及其所致病害的特点 1 锈菌胶锈菌属Gymnosporangium冬孢子双细胞，有可以胶化的长柄。没有夏孢子阶段。梨锈病G. haraea

20、num 冬孢子阶段在桧柏上，性孢子和锈孢子在梨树上引起梨锈病。柄锈菌属(Puccinia)孢子双细胞、有柄，夏孢子单细胞，小麦锈病：小麦秆锈病( P. graminis )；小麦条锈病(P. striiformis )；小麦叶锈病( P. recondite f.sp tritici)。层锈菌属Phakopsora冬孢子单细胞，无柄，不整齐地陈列成数层；夏孢子外表有刺。枣层锈菌P. ziziphi-vulgaris 引起枣树锈病。多胞锈菌属Phragmidium 冬孢子3至多细胞，壁厚，外表光滑或有瘤状突起，柄的基部膨大。玫瑰多胞锈菌P. rosae-multiflorae 引起玫瑰锈病。单胞

21、锈菌属Uromyces 冬孢子单细胞，有柄，顶壁较厚；夏孢子单细胞，有刺或瘤状突起。瘤顶单胞锈菌U.appendiculatus引起菜豆锈病。栅锈菌属Melampsora冬孢子单细胞，无柄，陈列成整齐的一层；夏孢子外表有疣或刺。亚麻栅锈菌M.lini引起亚麻锈菌病。2黑粉菌目Ustilaginales以双核菌丝在寄主的细胞间寄生，有吸器伸入寄主细胞内。典型特征是构成黑色粉状的冬孢子。黑粉菌分类主要以冬孢子的外形、大小、有无不孕细胞、萌生的方式及冬孢子球的形状等。引起园艺植物的病害有：茭白黑粉病、慈。3层菌病原菌特征：具较兴隆的担子果，大多腐生，少数是植物病原菌。担子果如膏药状、马蹄状、伞状。层

22、菌常产生有性孢子，很少产生无性孢子。病害主要经过土壤中的菌核、菌丝或菌索进展传播和蔓延。层菌是弱寄生菌，经伤口侵入到果树的根部或枝干的维管束，主要破坏木质部，呵斥根腐或木腐。15半知菌亚门及其所致病害的特点1、半知菌亚门的主要特点常见的有4种：1分生孢子梗束synnema：呈束状，基部聚生在一同，顶部分散，着生孢子。2分生孢子座sporodochium：很短的分生孢子梗聚集而成，垫状或瘤状，其上产生分生孢子。3分生孢子器pycnidium：分生孢子器pycnidium：球形、近球形、瓶状或不规那么形的子实体，具孔口，孢子梗聚生其内。4分生孢子盘acervulus：菌丝纠结构成盘状的子实体，有的

23、分生孢子盘中央或周围具深褐色的刚毛。3、 与园艺植物有关的半知菌(1)丛梗孢菌粉孢属(Oidium)分生孢子梗直立。顶部产生菌键型的分生节孢子(粉孢子)。分生孢子串生，单胞无色。引起白粉病，为白粉菌的无性阶段 橡胶粉孢(O.heveae )引起三叶橡胶树的白粉病。轮枝孢属(Verticillium)分生孢子梗轮状分枝，产孢细胞基部略膨大；分生孢子为内生芽殖型，单细胞，卵圆形至椭圆形，单生或聚生。黄萎轮枝孢(棉黄萎病菌V.albo-atrum )引起棉花黄萎病。青霉属(Penicillium )分生孢子梗直立，顶端一至多次分枝，构成扫帚状。分枝顶端产生瓶状小梗，小梗顶端产生成串的分生孢子，分生孢

24、子球形、单孢。指状青霉病菌P.digitatum 引起柑桔绿霉病。葡萄孢属(Botrytis )分生孢子梗无色，顶端细胞膨大成球形，上面有许多小梗；分生孢子单胞，无色，椭圆形，着生小梗上聚集成葡萄穗状。灰葡萄孢(B.cinerea)引起多种植物灰霉病。褐孢属(Fulvia )分生孢子梗黑色，顶端或中部构成分枝，分生孢子黑褐色，卵圆形、圆筒形或不规那么形。引起的病害如番茄叶霉病、黄瓜黑星病等。 尾孢属Cercospora分生孢子梗屈膝状，青褐色至黑褐色，分生孢子多细胞，线形、鞭形至蠕虫形。如花生褐斑病、菜豆红斑病、豇豆煤霉病等。 链格孢属(Alternaria )分生孢子梗深色，顶端单生或串生淡

25、褐色至深褐色、砖隔状的分生孢子。分生孢子倒棍棒形、椭圆形或卵圆形，顶端有喙状细胞。大孢链格孢(A. macrospora )引起棉花轮纹斑病。镰孢霉属(Fusarium )大型分生孢子多细胞，镰刀型；小型分生孢子单细胞，椭圆形至卵圆形。麦类赤霉病，瓜类枯萎病。2黑盘孢菌黑盘孢目真菌的分生孢子梗产生在分生孢子盘上。有的分生孢子盘周围或分生孢子梗之间具有黑色的刚毛。黑盘孢目真菌引起的病害如苹果褐斑病、苹果、辣椒、茄子、黄瓜棉花等的炭疽病等。3球壳孢菌分生孢子器球形，暗褐色，分生孢子单胞，无色，圆柱形至纺锤形。分生孢子着生在分生孢子器内。引起的病害如苹果树腐烂病、梨干腐病、苹果及梨轮纹病、棉花褐斑病

26、、芹菜斑枯病、茄子褐纹病等。4无孢菌:除产生厚垣孢子外，不产生任何其它孢子。只需菌丝体，有时可构成菌核。第二部分 微生物病理实验根本操作21 植物病理徒手制片技术一、实验目的 察看植物病害病原物的形状，进展病原物的分类鉴定，研讨受病组织的组织构造病变，受病植物组织与病原物的解剖学关系以及对于难得一见病原物的保管备用等，都需将资料制成适当的显微玻片标本。因此，徒手制片技术也是植物病理学研讨的重要手段之一。经过本次实验系统学习实际常用的徒手制片技术，为普通植物病理学和农业植物病理学的深化学习以及以后开展病理学的有关研讨任务奠定坚实的制片技术根底。二、内容、资料和方法 徒手制片的方法有整体封藏法、徒

27、手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。限于时间本实验实际最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。(一)整体封藏法 对于生长在植物病部外表或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下察看，根据资料的特点和察看的目的可采用不同的方法封藏制片。常用的方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。 1挑：对于在植物受病部位或基质外表生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培育基上的许多培育菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免相互重叠，分辩不清。 取黄瓜霜霉病叶，小麦

28、白粉病叶分别挑取霉状物和粉状物镜检病原菌的形状特点。 2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片替代)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取23次，将刮得的病原蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否那么少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻觅。取玉米小斑病叶，在病斑反面刮制片，镜检分生孢子梗和分生孢子的形状。 3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支

29、解剖针，一支稳定资料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。取小麦全蚀病或白粉病标本，拨小黑点制片，镜检子囊果的形状。 4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形状，而且可以察看病原物与寄主的解剖学关系。 在毛毛雨天自田间取回感染白粉病的麦苗(或在保温箱中取接种染病的麦苗)。用刀片割破叶背表皮再用小镊子悄然撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形状。(二)徒手切片法 欲察看受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形状构造等，都需将有关资料切成薄片，进展镜检，徒手切片是最常用的简

30、便易行的方法，不需求特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作暂时察看，也可进一步制成永久性玻片标本。 徒手切片的根本器具是剃刀或刀片。切片时先选取资料并作适当的修整，以左手的食指和姆指捏住资料，中指顶住资料下端，使资料上端突出于手指以上23毫米。右手握稳刀，从左向右后方斜向切割。留意刀口必需以资料面垂直。否那么所得切面不正。同时双手不应紧靠身体，而是要活动自若。用臂力均匀地沿刀口后部起拉向前方，延续切割45片后，用毛笔蘸水悄然沿刀口取下，放入盛有水的浅玻皿中，在此过程中左手握着的资料不要放下，否那么再切时难按原位置拿资料，此外，在切片过程中，必需常用毛笔蘸水潮湿资料，以免资料干涸不便切割。

31、 对于过于柔软或较薄的资料，可以夹在“夹持物中，进展切片更为方便。新颖胡鲜卜和马铃薯块都可作“夹持物用。实验室中通常将通草、接骨木或向日葵的茎髓，剪成适当大小，浸于70%酒精中备用。 切割一定数量的薄片后，用移置环在浅玻皿中选取合用的资料薄片，放在载玻片的水滴中，镜检合格者即酒精灯上将水烘干并摆正资料，然后加一滴乳酚油或其浮载剂；放在展片台上略加热，镜检如无气泡，即可小心加盖片，用吸水纸吸除多余的浮载剂，最后贴好标签，平放于切片板上，待枯燥适宜时封固。 徒手切片的缺陷是对于微小或过大，柔软、多汁、肉质及巩固的资料不易切取，也难制成延续切片，此外切片的厚薄也难一致。切片机切片即可抑制这些缺陷。三

32、、作业和思索题 1每人交两片符合质量要求的玻片标本。 2整体封藏法和徒手切片法两种根本徒手制片技术都在什么情况下运用? 徒手切法制片有什么优缺陷? 怎样处理这种方法本身存在的问题?22 培育基的配制和灭菌一、 实验目的 微生物的生长发育都有一定的营养需求，培育基即人工培育微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。培育基配好后必需经过灭菌方能用于分别培育微生物实验，因此培育基的配制和灭菌是植物病理实验室中最根本的任务，经过本次实验学习植病实验室中常用培育基的配制方法和高压灭菌锅的运用方法。二、内容、资料和方法 (一)培育基的配制 培育基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培育基、半组合培育基和

33、组合培育基三类，从物理性质上又分为液体培育基和固体培育基两类，培育基的种类不同，配制方法也有差别，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培育基和牛肉膏蛋白胨培育基。1马铃薯蔗糖琼脂培育基PSA 这是植病实验室最常用的培育基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分别和培育，有时也用于植物病原细菌。 成分：马铃薯200克 蔗 糖 10克 琼 脂 20克 加水至1000毫升 方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，参与琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。 马铃薯蔗糖琼脂培育基略带酸性，培育真菌无需调理pH，培育细菌那么调理pH至

34、中性，此培育基留作下次实验分别培育病原真菌用，故不用调理pH。 5人分作一组，1、2组各作此培育基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其他300毫升，分装在3个250300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保管，留待下次实验运用。2牛肉膏蛋白胨培育基NA 这种培育基主要用于细菌的分别和培育 成分：牛肉浸膏 3克 蛋白胨 10克 蔗糖 10克 酵母浸膏 1克 琼脂 20克 加水至 1000毫升 方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开参与，调理pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。 牛肉浸膏和酵母浸膏非常粘稠，不易称

35、重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的分量后，再开场沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。 调理培育基pH至中性的方法如下：配成1N的HCl和NaOH，并另分别稀释配成1/20 N的HCl和NaOH。取培育基2毫升，加蒸馏水7.5毫升，加指示剂溴百里酚蓝指示剂5滴，这时如培育基的测样呈黄色那么用有刻度吸管参与1/20 N的NaOH假设呈蓝色那么参与1/2O N的HCl，使培育基最后呈草绿色即调理到中性，此刻所加酸或碱的毫升数的25倍即等于在1000毫升培育基中所需求参与lN 的NaOH或HCl的毫升数(留意这次是作500毫升培育基)，加蒸馏水稀释的目的防止调理过程

36、中培育基凝固。调理pH至中性的简便方法是用石蕊示纸。也可以用多孔白色瓷板，在孔中加少量培育基和溴百里酚蓝或其它指示剂12滴，根据颜色反响，在所配的培育液中参与少量lN的NaOH或HCl，然后再取样测定，如此反复多次，到达所需求的反响为止。 5人分为一组，3、4两组各作此培育基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约100毫升，灭菌后摆成斜面，其他300毫升分装在3个250300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善存放，留待下次实验运用。 图： 培育基的分装安装与棉塞。A.培育基的分装 1.正确 2.管内太短，外部太松B.棉塞的做法 3.整个棉塞太松 4.管内太紧，外部太短松此外，

37、1、2、3、4各组均制备15管试管装和2瓶三角瓶装的无菌水。 (二)培育基的灭菌 为了得到某种病原物的纯培育，配好的培育基必需经过灭菌才干运用，灭菌是指用物理或化学方法完全杀死器物外表及其内部的一切微生物，灭菌与消毒的概念不同，消毒那么是指消灭器物或植物组织外表的某些微生物(能常称杂菌)，而不是消灭一切的微生物。 灭菌的方法很多，植病实验室常用的有干热灭菌和高压蒸汽灭菌两种方法，普通培育皿、吸管等玻璃仪器用干热灭菌法进展灭菌。而培育基和实验用的土壤，那么用高压蒸汽灭菌法进展灭菌，详细灭菌方法和步骤如下： 1干热灭菌法 (1)将培育皿、吸管等玻璃器皿洗净枯燥后，用旧报纸包好，或装入特制的铁筒中(

38、每个吸管用纸包好后装入铁筒)，包纸时应将汲取的一端放在取时先折开的一端，以便取用时手勿触及要求灭菌的一端。 (2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留有一定的空隙以便流通空气。 (3)关紧箱门，翻开排气孔接上电源。 (4)待箱内空气排出到一定程度时，闭上排气孔，继续加热至一定温度后，用定温固定温度，灭菌温度普通165175坚持1小时即可。 (5)待自然降温冷却后(60以下)才干开门取出玻璃器皿，防止由于温度忽然下降而引起玻璃器皿碎裂。 2高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法又称湿热灭菌，它的原理是利用高压来提高蒸汽的温度，到达灭菌的目的，其操作步骤如下： (1)关好排水阀门放入清水至标度为止，

39、留意水量一定要加足，否那么容易呵斥事故。 (2)将要灭菌的培育基、灭菌水等装入铁丝笼中，并用牛皮纸盖好后放入灭菌锅中，关上器盖，旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度(不要太紧)，然后再旋紧相对的两个螺旋，以到达平衡旋紧，否那么易呵斥漏气，达不到彻底灭菌的目的。 (3)通电加温，同时翻开排气活门，排尽锅内的空气，即活门冲出的全部是蒸气时那么表示彻底，此时可封锁排气活门，假设过早封锁活门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。通常当压力表指针升至5磅时，翻开排气活门放气，降至零点，再封锁活门。 (4)压力表的指针上升时，锅内温度也逐渐升高，当压力表指针升至15磅时，蒸气温度相当于120121(等于

40、一个大气压)，此时开场计算灭菌时间，控制热源，使处于15磅压力坚持30分钟，即能到达完全灭菌的目的，然后停顿加温。 (5)略微翻开一点排气活门，使锅内蒸气缓慢排除，然后逐渐开大活门，气压徐徐下降，留意勿使排气过快，否那么会使锅内的培育基沸腾而冲脱或沾湿棉花塞，但排气太慢又使培育基在锅内，受高温处置时间过长，这样对培育基也是不利的。普通从排气到翻开锅盖以10分钟左右为好。 (6)当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，翻开锅盖取出培育基，如需制备固体斜面培育基时，那么应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘，冷却后便可收起。 (7)最后将高压灭菌器内的剩余水排出。 (8)抽取上述灭菌的培育

41、基，放入25温箱中，48小时后不见杂菌生出，便证明培育基已到达灭菌目的，可以运用。 此外，有些培育基在经高压灭菌后，其营养成分容易分解而失去运用价值，此时可采用间歇蒸气灭菌法，即将培育基放入高压灭菌器内，加热至100，坚持1小时，每天灭菌一次，延续进展三次，即可到达灭菌的目的，又不至使营养物质分解。三、思索题 1培育基有哪几种类别? 各有什么特点和用途? 2干热灭菌和高压蒸汽法适用范围如何? 电热烘箱和高压锅如何操作? 各有哪些运用本卷须知? 3怎样检查培育基灭菌能否彻底?23 植物病原菌的分别和培育 一、实验目的 在研讨病原菌的形状、生理、生态以及病原菌对寄主植物的致病性等多种实验中，经常需

42、求病原菌的纯培育物。然而，在自然情况下，病原菌通常是与其他杂菌混生在一同的，从受病组织或其他基物中将病原菌单独分选出来，叫作分别。分别和培育是植病实验室最根本的操作技术之一。经过本次实验学习植物病原菌分别培育的原理和常用的方法。二、内容、资料和方法 (一)分别资料的选择 分别资料的选择对分别培育的成败有着决议的影响，由于在感病植物受害部位的内外，要有多种腐生菌，为减少腐生菌的污染，分别所用的病害资料应尽能够新颖，并且最好在病、健交接处选材取样。病、健交接处，除资料新颖，污染的能够性小外，病原菌的生活力强、比较活泼，容易分别胜利。 (二)分别方法 病原菌分别的方法因资料不同而异，植病实验室最常见

43、的方法有组织分别法和稀释分别法两种。 1.组织分别法：这种方法适用于大部分病菌的分别，此法又分为小块组织分别和大块组织分别两种方法。分别以玉米大斑病、小麦根腐病和梨褐腐病为试材进展。 (1)叶斑病类病原菌的分别玉米大斑病病菌的分别 取玉米大斑病病叶，在病、健交界处剪取23毫米长的病组织。用10%漂白粉次氯酸钙溶液消毒漂白粉溶液现用现配3-5min，时间长短依病组织不同而异，然后直接移至PSA平板培育基上(为防止细菌污染，可在培育基中参与1000ppm链霉素10毫升)，倒置于2025室温下，待菌落长出后挑取前缘菌丝，回接于PSA斜面培育基上，在25温箱中培育，待菌落颜色变深后，在无菌条件下镜检能

44、否是玉米大斑病菌，弱仅有玉米大斑病菌的孢子，那么阐明已获得了纯培育，否那么，那么需求继续转至斜面培育基上进展纯化，直至获得纯培育。 (2)种子内部病原菌的分别小麦根腐病菌的分别 选择典型的小麦黑胚粒34个，在70%的酒精中浸23秒钟后，以镊子夹住投入0.1%升汞溶液中外表消毒23分钟处置时间可自30秒至30分钟不等，然后取出小麦粒，以灭菌水冲洗3次，再移至已倒好的马铃薯琼脂平板培育基上，留意要以小麦的黑胚部位着靠在培育基上，倒置在25温箱中培育，待菌落长出后，挑取前缘菌丝于马铃薯斜面培育基上培育，培育3-4天后，无菌条件下镜检能否获得纯培育。 (3)病组织内部病原菌的分别梨褐腐病菌的分别 取梨

45、褐腐病病果沾取95%酒精，用酒精火焰三次消毒后，以在灯焰灭过菌的解剖刀在果面病、健交界处切开，挑取豆粒大小的病组织放到马铃薯琼脂平板培育基上，每皿放34块，倒置于25温箱中培育23天。菌丝长出后转至马铃薯琼脂斜面培育基上，培育3-4天后，无菌条件下镜检能否获得纯培育。 2.稀释分别法：稀释分别法适用于细菌、土壤菌及产生孢子多的真菌等病原菌的分别，本次实验以白菜软腐病作为资料进展分类离。 白菜软腐病最易伴生腐生细菌，分别时需以病组织接种安康菜帮上，经数次转种予以纯化，其纯化方法是将菜帮经多次换水冲洗后，再用无菌水洗三次，切成适当大小，放在15厘米直径的培育皿中，菜帮下衬以吸水纸保温。用无菌解剖刀

46、挑取病组织少许抹在菜帮的人为伤口上，培育在2025下，经1天左右呈现腐烂，如此反复转种几次，至病斑纯真为止。 分别时，在新的水烂斑边缘挑取少量病组织在无菌水试管中配成菌悬液，取灭菌培育皿3付，标好次序，其内各置无菌水1毫升，用移置环移取菌悬液一环，放在第1皿水中混合均匀，从中挑取一环稀释液至第2皿，再以同法稀释成第3皿，取熔化后冷至45左右的(普通将化好的培育基瓶接近鼻尖，以不烫为度)牛肉膏蛋白胨培育基，每皿倒约15毫升，沿着桌面悄然摇匀，凝固后倒置于2628的温箱中培育，12日后可见白色，圆形或近圆形直径为12毫米的菌落，从中选典型菌落用移植环划线法移入牛肉膏蛋白胨斜面培育基上培育，每组转4

47、5管，留意过早出现的大型菌落多为腐生细菌。 以上分别实验也可以划线法进展，方法是先取两付灭菌培育皿，每皿倒入约15毫升熔化的牛肉膏蛋白胨培育基，沿桌面悄然摇匀，制成平板，然后用移置环沾取一环稀释好的菌悬液，在第一个培育皿平面培育基的左方长方形区内划平行线57条，再以此移置环继续向右(和左方小区内的几条平行线成一定角度)划57条平行线，依此法划两皿，倒置于2628温箱中培育，12日后挑单个典型菌落移到斜面培育基上，培育待用。 假设因季节关系难得白菜软腐病试材，那么可用黄瓜细菌性角斑病、棉花角斑病、水稻白叶枯病病叶作试材进展分别培育实验。方法是取新颖病叶，在病、健交接处取几小块病组织，以无菌水经多

48、次换洗外表消毒后，放在比色板或凹玻片的凹窝内(凹窝要经两次酒精火焰消毒)，以吸管汲取无菌水滴入窝，并以灭菌的玻璃棒捣碎病组织，静置几分钟可得菌悬液，之后以上述划线法进展分别，留意葡萄糖对稻白叶枯病菌有抑制造用，故分别稻白叶枯病菌不能用葡萄糖配制牛肉膏蛋白胨培育基。平板划线操作表示图三、实验预备 (一)清洁环境：分别任务严厉说应在无菌条下进展，无菌室或无菌箱是分别不可短少的设备。假设限于条件实验只能在普通房间进展时，必需对房间进展彻底扫除，清洁环境、搞好卫生。地上多洒些水，以消除室内尘埃，别分开场前预备好一切用品，防止任务过程中频繁走动，以破坏环境带来杂菌，任务台上铺好湿毛巾，点燃酒精灯。 (二

49、)实验资料及用品预备 本次实验3-5人一组，请仔细检查好下试材和用品能否齐备。 1病组织资料 小麦根腐病黑胚粒5粒。 玉米大斑病病叶1片。 白菜软腐病病帮 3块(相邻两组共用)； 梨褐腐病病果 1个(相邻两组共用)。 2用品预备 0.1%升汞溶液(广口瓶盛装)； 95%酒精(广口瓶盛装)； 1000ppm链霉素； 瓶装牛肉膏蛋白胨培育基； 瓶装马铃薯琼脂培育基； 此外，还有以下备品，无菌水1瓶，灭菌培育皿6付，灭菌1毫升吸管2支，解剖剪、解剖刀和镊子各1把，移植环，移植钩、酒精灯、珐琅盘和试管架各1个，毛巾1条，玻璃铅笔1支及火柴等。四、思索题 1分别植物病原菌常用的方法有几种? 这些方法适用

50、于分别哪类病原菌? 怎样分别? 2分别植物病原物时，为什么要选择新颖病资料，并且在病健交界处取样? 没有新颖病资料怎样办? 3试分析分别任务成败的缘由。24 真菌孢子的萌生 一、实验目的 欲了解病菌生活力的强弱，生存期的长短，有效传播间隔 ，抗药性的大小，生活史，环境与发病的关系以及有些病菌的种类鉴定等，都必需进展孢子萌生实验。孢子能否萌生，萌生率的高低，萌生势的强弱以及萌生的方式等既受病菌本身内在的要素影响，也受外界环境条件制约，因此要到达萌生实验的目的，必需充分掌握萌生所需的各种条件，本次实验主要学习孢子萌生常用的方法，同时经过实验了解各种孢子萌生所需条件不同。二、内容、资料和方法 孢子萌

51、生的方法很多，有些真菌的孢子须用特殊的方法才干萌生，以下仅实验常用的方法。 (一)悬滴法 1资料：玉米大斑病菌斜面菌种。 2方法：在干净的盖玻片中央滴玉米大斑病菌孢子悬浮液一滴，留意滴成圆形，大小适当，菌悬液浓度以显微镜低倍镜头每个视野约20个孢子为宜。然后翻转盖片制成悬滴，并封锁在特制的玻环内，再将玻环放在底部盛少许水的培育皿中，盖好皿盖，放置在2628温箱中培育，45小时后检查萌生结果。 此法也可改用直接用培育皿盖的里面作悬滴进展，即用玻璃笔在皿盖里面划方格，在方格中央滴孢子悬液，然后渐渐转皿盖。盖在盛有少量蒸馏水的皿底上，保温保湿培育，此法的优点是简便，而且适用于大量孢子萌生测定。 (二

52、)液滴法 1.资料：小麦根腐病菌斜面菌种。 2.方法：在培育皿内放一“井字或“U形玻璃棒，皿底加蒸馏水少许或衬上吸水纸或加几个脱脂棉球吸水保湿，玻璃棒上放载玻片，其上分别滴2或3滴小麦根腐病菌孢子悬浮液浓度同(一)，盖好皿盖，置于2628温箱中培育，45小时后，镜检萌生结果。 此法也可开展为将配好的孢子悬液直接加在培育皿中进展萌生，普通一个培育皿中加10毫升左右，不能太多，然后直接镜检萌生结果，优点是一次可测定大量孢子。 (三)琼脂培育基法 对于某些不适于直接在水滴中萌生的真菌可采用此法。 1.资料：新采集的带有夏孢子堆的小麦秆锈病病叶或小麦白粉病病叶。 2.方法：取干净的载玻片，在熔化并冷至

53、50左右的2%水琼脂培育基中沾一下，待凝成薄层后，去掉一面琼脂培育基，将有琼脂培育基的一面朝上，平放在培育皿的“U形玻棒上，再将秆锈菌夏孢子或白粉菌的分生孢子悄然弹落或涂抹在琼脂平面上。保温培育，麦秆锈菌夏孢子培育在20温度下，麦白粉病分生孢子培育在1012下，24小时后镜检萌生结果。 此法也可以直接在培育皿中做成的水琼脂平板上进展。(四)载片引湿法 此法用于不适于直接在水滴中萌生的某些真菌。 1.资料：玉米瘤黑粉病菌的黑粉孢子。 2.方法：在培育皿中放一“V或“U形玻璃棒，其上放一载玻片，再取宽1厘米，长4厘米的滤纸条一个放在皿内。灭菌后皿底加少许灭菌水，将滤纸条横放在载玻片上，崩紧，两端拖

54、入水中，吸滴水，再在纸上滴一滴玉米瘤黑粉病菌黑粉孢子悬浮液，盖上皿盖，在25温箱中培育，逐日检查萌生的结果。三、孢子萌生的记载方法孢子萌生是先吸水膨胀，然后长出芽管，通常以芽管长度超越孢子直径一半(不是正圆形的孢子以短径为准)作为萌生规范，记载萌生的方法有以下几种。 (一)萌生率 即萌生一定时间后，随机取一定数目(至少500个)的孢子，检查萌生的孢子数，求出萌生百分率，假设用该法记录两种或几种不同处置时，要留意严厉掌握检查时间。(二)萌生时间 即测定孢子萌生到达一定萌生率所需时间。 (三)芽管平均长度 即测定一定数目已萌生孢子的芽管长度，求其平均值。 此外，有些萌生实验，如药效测定等，还需留意

55、记录芽管的宽度外形变化以及能否有分枝等。四、思索题1孢子萌生在植病研讨任务中有什么重要意义? 在作萌生实验时，特别要留意哪些问题? 2几种孢子萌生方法各自适用于哪些真菌? 记载孢子萌生的方法有几种? 各种什么优缺陷。25 植物病原物的接种 一、实验目的 人工使病原物与寄主植物感病部位接触，发明条件使病原物侵入并诱致寄主发病叫接种，接种是证病过程的重要步骤，在研讨寄生景象发病规律，测定种类抗病性，药剂防病效果时都需求接种。因此，接种是植病任务者必需掌握的根本技术环节。 植物病害人工接种方法，是根据病害的传染方式和侵染途径设计的，植物病害的种类很多、其传染方式和侵染途径各异。因此接种方法也不一样。

56、本次实验以玉米大斑病，小麦根腐病，小麦秆锈病，梨褐腐病等为内容学习常用的接种方法。二、内容、资料和方法 (一)拌土法(小麦根腐病) 拌土法适于土壤传染的病害，方法是将消毒的土壤分别装入两个小花盆中，其中一盆表层覆以一厘米厚的菌土，菌土是用玉米砂培育菌1份加消毒土5份混合而成，另一盆不接种(不覆菌土)作为对照。将经0.1%升汞外表消毒3分钟并用无菌水洗3次的小麦种子，分别播种在两个花盆内，插上标牌，注明接种日期，方法病害称号及接种人姓名，花盆放在室温下，浇水保湿，遮阴管理，待幼苗出土展开叶子后(大约一周)，察看并记载根腐病发生情况。 (二)喷雾法(玉米大斑病)气流及雨水传播的病害常用此法接种，将

57、培育好的玉米大斑病的斜面菌种一支，用移植钩刮于装有100毫升无菌水的三角瓶中，用力振荡，待孢子洗下后，以纱布过滤，并于滤液中参与0.1克中性肥皂，即成孢子菌丝悬液，用卫生喷雾器均匀喷布在麦苗上。同时设一不喷菌液而喷无菌水的作对照，用塑料罩保湿48小时，揭布后正常管理，7天后作发病调查。(三)涂抹法(小麦秆锈病) 这也是气流传播的病害常用的接种方法，用于禾本科锈病接种。方法是用姆指沾锈菌夏孢子悬液自下向上悄然涂欲接种的小麦叶片，也可先用手指沾水摩擦叶片，使叶表有一层水膜，然后将夏孢子粉抹在上面，以不涂抹孢子悬液或孢子粉的作为对照。塑料罩保湿48小时后揭布，正常管理，7天后作发病调查。(四)创伤接

58、种法(白菜软腐病及梨褐腐病) 创伤接种法是伤口侵入的弱寄生菌常用的接种方法。 1.白菜软腐病：取切成适当大小的白菜帮两块、经水洗，待水稍干后，以10%漂白粉溶液作外表消毒，分放在两个灭过菌的上下铺有吸水纸的培育皿中，用酒精擦过的玻璃棒顺着白菜帮打三排不穿透的孔穴。将培育好的白菜软腐病菌斜面菌种的菌苔以无菌水洗下作成菌悬液。然后，先以灭过菌的兽用注射器汲取无菌水滴于菜帮的第一排内孔作为对照，再用该注射器吸菌液滴于第二、三排孔内。留意无论无菌水、还是菌液都不要滴的过多。以免流出孔穴，另一培育皿的菜帮以同法处置作为反复。盖好皿盖，置于2628的温箱中，24小时后检查发病情况。 2.梨褐腐病：取白梨以

59、酒精火焰外表消毒后，用炽热的解剖刀，在其上切成小手指粗的孔穴35个。取经分别纯化的梨褐腐病菌菌落填抹在已切好的孔穴中，再复以饱含无菌水的脱脂棉或纱布，放在密封的枯燥器或标本瓶中，枯燥器或标本瓶底部装些水，再将枯燥器或标本瓶放于25的温箱中，以未接菌的作为对照，3天后作发病调查。三、接种实验的察看和记载 仔细察看和记录是做好接种实验的重要环节，为了及时正确地分析总结实验结果，必需仔细察看并做详尽的记录，如记录接种时间，接种植物、种类、接种方法、部位、接种用的病菌称号(包括菌系和生理小种)、来源、繁衍和培育方法(培育基、培育温度、培育时间)、接种体浓度、接种的方法和步骤及接种后的管理等。 四、思索

60、题 植物接种常用的方法有哪些? 举例阐明如何根据病害特点选择接种方法?26植物病原生物绘图技术一、实训目的 提高生物绘图技术程度，为今后开展病理学有关任务奠定较好的根底。二、绘图内容、资料和方法(一)病原菌形状图的绘制以点线法绘制黑白图的步骤和方法1.初稿的描画用普通白纸、铅笔(1H)起稿，先确定图幅大小，普通要比制版尺寸大一些，但不能超越一倍，制版时再减少，有提高原图质量的效果，当然如能精良绘制，亦可原图制版，如在一张图上绘出几个内容，如分生孢子梗和分生孢子子囊壳，子囊和子囊孢子，那么应按图幅大小求出初稿上各部比例尺寸，其比例大小需按显微测微尺度量算出。有的目测描画，有的用显微绘图仪描画(见