免疫印迹技术ANA谱测定

1、epi丈第华西医院XFCHINAIIOSFITAI5ICHCANUNIVFRSITY免疫印迹技术ANA谱测定罗俐梅医院Q卩|丈普华XFCHINAIIOSFITAI5ICHCANUNIVFRSITYWesternblot法SDS电泳转移电泳3131条带印迹法SmSS-BScl-7OPM-SclJo-1nRNP/SmCENPBdsDNSNukleos.Histonerito.P-Prot.AMA-M2KontrolleQP|丈第华西医院纯化抗原的免疫印迹法纯化可提取性细胞核抗原(ENA)包被于硝酸纤维膜上，待测血清标本与之反应，如存在相应抗体，则会结合上去，并进一步结合酶标记的二抗，经酶底物显色即

2、可观察到相应的抗体。2卩|丈穆华西医院XFSTCHINAIIOSPTTAISICHUANUNIVFRSITY免疫印迹法检测ENA谱的原理加底物显色,观察结果洗去多余酶标二抗加入酶标二抗反应洗去未反应蛋白加入标本反应纯化抗原膜条（膜条试剂盒）nRNP/SmSmSS-ASS-BScl-70Jo-1CENPBdsDNAHistonesliMIIIControl2QP|丈第华西医院QP|丈第华西医院试剂样本稀释液:直接使用工作洗涤液：直接使用（已配好）酶标记二抗:直接使用（已配好）底物:直接使用操作步骤润膜：取出反应槽，每槽加入1.5ml样本稀释液，缓慢于室温孵育5分钟，将膜条充分润湿，倒掉样本缓冲液

3、加样：然后在每个槽中加入样本缓冲液1.5mL,并加入待检血清或质控血清15uL,充分混匀，缓慢在室温振摇孵育30分钟。洗涤：弃去槽内液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤3次，每次每槽加稀释洗涤液l5inl,操作步骤加酶：每槽加入稀释后酶标抗体1.5mL,混匀，缓慢在室温摇床上孵育30分钟。洗涤：同前洗涤。显色：每槽加入显色液1.5mL,室温反应10分钟终止：每槽弃去反应液，用蒸憾水洗涤三次，取岀膜条，有序贴于结果分析页上，待膜条干后进行结果判断。XFCHINAIIOSFITAI5ICHCANUNIVFRSITYQP|丈第华西医院影响因素未用完的洗涤液弃之，不可留作下次用。全部操作应振摇进行，否则

4、检测敏感性会有所下降。不同血清标本，显色强度会有不同，弱阳性结果需仔细观察。试剂需恢复至室温方可使用，否则会影响检测结果。QP|丈第华西医院QP|丈第华西医院试验准备分为5组,每组取1个病人标本，在一个反应板上试验。其中一组增加阴性和阳性质控O各组需领取以下物资:待测标本1份阴性和阳性质控1份（第1组）反应板和吸水纸样本缓冲液1瓶样本洗涤液（已稀释）1瓶酶标记抗体（已稀释）共用底物1瓶结果解释首先观察第一条质控线应显色才可判读结果，若不显色则说明试剂失效或实验失败,需复查。将膜条上显色区带与抗体位置对应抗体带对照,即可判断出阳性抗体.抗可提取性核抗原(ENA)抗体抗iiRNP抗体：MCTD95-100%(高滴度)抗Sin抗体：SLE标记性抗体(20%-30%)抗SSA抗体：PSS60-75%,其它CTD抗R052抗体：意义不明抗SSB抗体：PSS10-40%,其它CTD抗Sc