病毒学检验第二章鸡胚与动物接种技术

1、关于病毒学检验第二章鸡胚和动物接种技术第一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月2本章内容第一节 鸡胚接种技术第二节 动物接种技术第三节 鸡胚和动物接种技术在 病毒检验中的应用第二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月3掌握鸡胚接种途径及方法、病毒的检测实验动物的种类、实验动物接种途径和接种方法熟悉鸡胚孵育与检查、鸡胚接种所需实验材料与器械实验动物编号和分组、接种后的观察等问题了解鸡胚的解剖与生理；鸡胚和实验动物接种技术在病毒检验中的应用教学要求第三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月4方法 应 用 价 值 存 在 问 题动物接种应用最早；方法简便；结果易于观察自身带

2、病毒；有的接种后不敏感；动物饲养问题鸡胚培养来源客观，易于管理，带病毒机会少；多途径接种敏感病毒谱窄细胞培养应用广泛，敏感病毒谱广设备技术要求条件高病毒分离培养常用方法第四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月第一节 鸡胚接种技术第五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月6概况1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次氏体。第六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月7鸡胚接种技术的优点鸡胚为一整体，有神经血管的分布及脏器的构造；鸡胚的组织

3、分化程度低，可选择适当途径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体含大量病毒；来源充足，操作简单，通常是无菌的，对接种的病毒不产生抗体。第七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月8鸡胚接种技术的缺点通常不产生特异性的感染指征；食入的抗生素会传递给鸡胚，使病原体在鸡胚中的繁殖受到抑制；某些细菌和病毒能够从感染的鸡传递到鸡胚。 第八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月9一、 鸡胚的结构与生理鸡胚是由外胚层、中胚层和内胚层三个胚层发育起来的，它们共同构成了胚胎的组织与器官。 卵白尿囊腔卵黄气室卵壳壳膜绒毛尿囊膜羊膜羊膜腔鸡胚胎911日龄鸡胚结构第九张，PPT共一百三十四页，创作于202

4、2年6月10第十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月11卵壳与壳膜卵壳位于最外层的坚硬壳层壳膜位于卵壳的下层，允许气体和液体分子交换气室功能主要是呼吸和调节压力绒毛尿囊膜壳膜之下，主要是胚胎的呼吸器官羊膜胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。第十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月12尿囊腔位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器官；含520ml尿囊液，含大量的尿酸盐卵黄囊主要营养的储藏场所，为胚胎提供营养卵白外于卵的锐端，为胚胎发育晚期提供营养第十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月13第十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月14二、 鸡胚的孵育和

5、检查一、受精鸡卵的选择没有受到病毒和细菌的污染如新城鸡瘟病毒、布氏杆菌等； 培养立克次体和衣原体，不能来自食用抗生素的鸡群。二、鸡胚的孵育孵育的温度 3839 孵育的湿度 4070 翻卵 每天180转动鸡胚12次 通风 排出CO2，吸入O2 第十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月鸡卵发育中的胚胎发育中的胚胎破壳而出的小鸡卵白卵黄系带胚盘第十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月16第十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月17三、检卵目的了解鸡胚的存活情况，标记气室边界和胚胎位置；观察接种后胚胎的状况观察内容血管是否明显 有无胎动 绒毛尿囊膜发育之界线第十七张

6、，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月18第十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月19三、鸡胚的接种途径及方法一、实验材料与器械受精鸡卵孵卵箱 检卵灯、照明灯、卵杯、卵盘、鸡胚开孔器其它器材第十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月20二、接种途径与方法羊膜腔接种：主要用于临床材料（如患者咽漱液等）分离流感病毒。绒毛尿囊膜接种：常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离；病毒滴定、中和试验。尿囊腔接种：广泛应用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒、新城鸡瘟病毒的适应和传代。卵黄囊接种：主要用于虫媒病毒、衣原体、立克次体等分离和繁殖；抗流感病毒药物实验。第二十张，PPT共一

7、百三十四页，创作于2022年6月211、羊膜腔接种分离流感病毒，收获羊水和尿囊液。羊膜腔接种示意图第二十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月接种步骤与方法将1012日龄的鸡胚在检卵灯上照视，标记气室及胚胎的位置。消毒气室部位的蛋壳，在气室顶端钻出一约10mm6mm的长方形裂痕，注意勿钻破壳膜。再次消毒钻孔区后，用灭菌的小镊子除去长方形卵壳和外层壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便观察胚胎的位置。将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿，当进入羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动，此时可注入O.10.2ml病毒液。拔出针头，孔区消毒后用沾有碘酒通过火焰的小

8、块胶布将卵壳的窗口封住，于3335孵育4872h，要保持鸡胚钝端朝上。第二十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月解剖与收获收获前鸡胚须置4冰箱6h或过夜，但不能放置时间过长(过长会引起散黄)。如急于收获亦可置-20冰箱lh左右。预冷的目的是，将鸡胚冻死，使血液凝固，避免收获时流出红细胞，并同尿囊液的病毒发生凝集，造成病毒滴度下降。病毒通过胚胎机体后被排泄入尿囊腔，因此当羊水过少时，可用同胚少量尿囊液冲洗羊膜腔并吸取该洗液。第二十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月242、绒毛尿囊膜接种牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离，可在膜上可形成斑点状或痘疱状病灶。病毒滴定，感

9、染性病毒颗粒的数目可以通过产生的斑和痘的数目来计算。抗体滴定，即在有抗体存在的情况下，痘疱形成受到抑制。第二十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月25定位将胎盘部分及自然气室部分用铅笔画出；在与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育较好的卵壳上划一直径约1cm的等边三角形卵窗接种步骤与方法第二十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月26绒毛尿囊膜接种示意图取卵壳；造人工气室；接种；消毒；培养。第二十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月27用2.5的碘酒和75的酒精分别消毒人工气室上的卵壳，去除窗孔上的胶布。用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下，放入加有灭菌生理盐水的培养皿内，

10、观察病灶形状或用于传代，或用50甘油保存。同时作无菌培养。 解剖与收获第二十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月283. 尿囊腔接种流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的传代。尿囊腔接种示意图第二十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月29照胚：取911日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置，标出气室底边，在无大血管处标出尿囊腔注射部位。接种步骤与方法第二十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月30标记气室和胚胎位置第三十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月31消毒气室向上放置鸡胚于卵架上；先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋壳所标记的位置。 打孔在所标记注射

11、部位用剪刀尖端打孔；注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。距气室底边0.5cm 第三十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月32接种部位消毒第三十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月33注入病毒材料用1mL注射器抽取接种物；针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内；注入待接种的病毒液：接种量为0.10.2mL。第三十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月34封孔用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。孵育与观察气室朝上于37温箱中孵育；以后每天检卵12次。弃去24h内的死亡鸡胚：机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。第三十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022

12、年6月35收集24h后死亡鸡胚，置4冰箱过夜，以免收获时流血;取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面；用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜；以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取尿囊液，置无菌容器中保存备用。一般能尿囊液6-10mL。取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。解剖与收获第三十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月36收获尿囊液每枚鸡胚收获尿囊液68ml第三十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月374. 卵黄囊接种用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖。卵黄囊接种示意图第三十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月38

13、四、病毒的检测（一）无菌试验目的：证实鸡胚收获物是否受到细菌的污染。方法：将鸡胚组织或收获的第一滴液体接种无菌肉汤； 37培养36h。结果判定肉汤清亮透明，说明没有污染；肉汤混浊，或有菌落出现，说明鸡胚被细菌污染。第三十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月39（二）检测方法直接观察法绒毛尿囊膜上形成损害或痘疱：如痘类病毒和疱疹病毒。引起鸡胚死亡：如新城疫病毒、流行性乙型脑炎病毒。造成鸡胚特殊损害和胚胎生长迟缓，如马流感病毒。 实验检测法血凝和血凝抑制试验：流感病毒补体结合试验：腮腺炎病毒其他：PCR等第三十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月40第四十张，PPT共一百三

14、十四页，创作于2022年6月第二节 动物接种技术第四十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月42实验动物（experimental animals）是指经人工饲养，遗传背景明确、来源清楚，控制其携带的微生物，用于科学研究、教学、生产、鉴定以及其它科学实验的所有动物。 第四十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月43发现年份发现人所用动物血液循环1628哈维蛙、蛇、鱼、蟹、其他醚麻醉1846玛登鸟类、其他细菌与疾病的关系1878科赫牛、羊、其他细菌致弱用免疫1880巴斯德鸟类狂犬病免疫1885巴斯德鸟类、家兔虫媒传播疾病1898史密斯等牛蚊传播疟疾1898罗斯鸟类医学科学的重

15、大发现与动物实验的关系第四十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月44发现年份发现人所用动物肿瘤的病毒病原1910洛斯鸡 胰岛素1921班定狗休克治疗1927博莱罗克狗抗细菌药物（百浪多息）1935多麦克小鼠 心肺旁道器1953葛明猫小儿麻痹症疫苗1954索尔克恒河猴变性脑病的病毒病原1965格但斯克猩猩心脏移植1967伯纳德狗医学科学的重大发现与动物实验的关系第四十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月45 登革病毒对新生乳鼠的致病作用 1-3日龄乳鼠接种病毒6日后，小鼠陆续 出现体弱、弓背、行动迟缓等症状。第四十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月46一、实

16、验动物的种类和基本操作方法（一）实验动物的种类按微生物控制分类普通动物（CV）、清洁动物（CL） 、无特定病原体动物（SPF） 、无菌动物（GF）和悉生动物（GN）按遗传学控制分类近交系、封闭群、突变系、杂交群、转基因动物第四十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月47按微生物学控制分类1、普通动物一级动物，指不携带主要人兽共患病病原和动物烈性传染病病原的动物。实验结果不稳定；仅供教学示范及 作为预备试验。 第四十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月482、清洁动物二级动物，除不携带普通动物病原体外，要求 不携带对动物危害大、对实验干扰大的病原体。适用于大多数教学和科研实

17、验。第四十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月493、无特定病原体动物(SPF)三级动物，除普通动物、清洁动物不得携带的病原体外，还要求排除潜在感染或条件致病的病原体。目前国际公认的标准级别的实验动物。第四十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月50饲养管理：SPF动物必须饲养在温湿度衡定的空气净化的屏障系统中，实行严格的微生物控制。第五十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月514、无菌动物和悉生动物四级动物。无菌动物要求现有的检测技术在动物体内外的任何部位均检不出任何微生物和寄生虫。悉生动物又称已知菌动物 ，是指在无菌动物体内植入已知微生物的动物，必须饲养于隔

18、离系统。第五十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月52无菌动物饲养条件：无菌隔离器。第一代通过无菌手术剖腹取胎,饲养在无菌隔离器内，人工喂乳或保姆代养培育而成。 第五十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月53悉生动物饲养条件：无菌隔离器。来源：人为将已知的微生物投给无菌动物，使其体内带有已知菌，可分为单菌动物、双菌动物和多菌动物。 第五十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月54按遗传学控制分类1、近交系(inbred strain) 概念：又叫纯系，经过连续20代以上全同胞或亲子交配培育的动物品系。特点基因型相同，表现型一致；对外来刺激反应一致；实验结果重复

19、性好，可比性强。 第五十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月55第五十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月56 常用近交系小鼠名称缩写 品系名 缩 写 品系名 缩 写 AKR AK C57BL/10 B10 BALB/c C C57BR BR CBA CB DBA/1 D1 C3H C3 DBA/2 D2 C57L L HRS/J HR C57BL/6 B6 STS S 第五十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月57C3H/He系BALB/c系C57BL 第五十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月582、封闭群(closed colony) 概念

20、：也称远交群，在不从其外部引入新个体的条件下，以非近亲交配方式至少连续繁殖4代以上生产的一个实验动物种群。特点群体遗传特异性相对稳定；个体间具有杂合性，存在一定差异。 第五十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月59常用封闭群的啮齿类的实验动物昆明（KM）小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、ICR小鼠、Wistar大鼠、SD大鼠、Hartley豚鼠、大耳白兔和青紫蓝兔等。KM小鼠青紫蓝兔Wistar大鼠第五十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月603、突变系(mutant strain) 概念：由于遗传基因发生突变而具有某些特殊性状的动物，如肥胖症小鼠、糖尿病小鼠等。 BAL

21、B/cA-nu 1973年丹麦的C.W.Friis在BALB/cA近交系小鼠中发现自发性突变的无毛小鼠，该突变小鼠胸腺发育不良，免疫T细胞缺失，而培育成了BALB/cA-nu。 第六十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月61突变系小鼠SCID小鼠裸小鼠第六十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月624、杂交群概念：又称异系杂交，是由不同的品系杂交所产生的后代。由两个近交系之间交配产生的动物称为杂交一代。特点：杂交一代动物遗传和表型均一性好；生命力、适应力和抗病力较近交系动物强；实验结果重复性好，适应实验范围更大。 第六十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月63繁

22、殖方法：将两个用于生产杂交一代的亲本品系或种群进行交配，所得第一代即为F1动物。 第六十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月645、转基因动物与基因缺陷动物将外源性基因插入生殖细胞基因组并能正常繁衍的动物称为转基因动物。采用基因剔除技术构建基因缺陷动物，通过删减单一基因或相关基因组，研究基因的功能。 第六十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月65二、常用实验动物第六十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月66（一）小鼠近交系BALB/c、C3H、DBA、C57BL、615、129等。 突变系nude、scid、dw、hr等。 封闭群KM、ICR、NIH、CFW

23、等。 第六十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月67 1、昆明小鼠(KM) 远交群，基因库大，基因杂合率高。第六十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月682、 BALB/c小鼠 近交系，白化小鼠，血压较高。易患慢性肺炎。BALB/c白化第六十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月693、裸鼠 先天性无胸腺的突变系小鼠。 裸鼠是肿瘤研究的常用模型，也可研究病毒感染与特定免疫功能的关系。 第六十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月704、SCID鼠(severe combined immunodeficiency, SCID) 体液免疫和细胞免疫严重联

24、合缺陷的突变系小鼠。 缺乏T和B淋巴细胞免疫功能。 目前多用于病毒免疫学 和肿瘤学的研究。 第七十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月71（二）豚鼠 在免疫学和病毒学实验中豚鼠可制备补体和抗体及提供红细胞做血吸附实验等。 第七十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月72（三）家兔免疫学和病毒学实验中常用动物。免疫反应灵敏，血清量产生较多；对许多病毒和致病菌非常敏感，适用于各种微生物学的研究新西兰兔青紫蓝兔大耳白兔第七十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月73三、实验动物常用基本操作技术（一）实验动物的捕捉和固定小鼠第七十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022

25、年6月74先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉。第七十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月75 在鼠向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤。第七十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月76将鼠体置于左手心中，把后肢拉直。第七十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月77以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。 第七十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月78第七十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月79大鼠第七十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月80先用右手抓取大鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉。第八十张，PP

26、T共一百三十四页，创作于2022年6月81在鼠向前爬行时，用左手拇指和食指抓住大鼠的两耳和颈部皮肤。第八十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月82 以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。如果大鼠体积太大, 可由第二个人协助固定后肢。第八十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月83第八十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月84豚鼠第八十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月85先用手掌迅速扣住鼠背。第八十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月86抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，中指和无名指轻轻扣住胸廓。第八十六张，PPT共一百三十四页，创

27、作于2022年6月87抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，中指和无名指轻轻扣住胸廓。第八十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月88或像抓取大鼠一样抓住双耳和颈背部皮肤。第八十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月89另一只手托住臀部。第八十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月90家兔第九十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月91按住兔子的双耳和颈背部。第九十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月92一只手抓住兔子双耳和颈背部的毛皮提起。第九十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月93然后另一只手托其臀部，让其体重的大部分集中在这

28、一只手上。第九十三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月94注意：不能单纯抓双耳或抓提背腹部的毛皮。第九十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月95第九十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月96将兔子放入盒式固定器内；露出头部。第九十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月97（二）实验动物编号和分组1、编号：区别实验组和对照组动物打号法：适用于耳朵较大的动物针刺法：适用于大小鼠、豚鼠染色法打孔或剪缺口法第九十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月98染色法3% -5%苦味酸溶液，可染成黄色。0.5% 中性红或品红溶液,可染成红色。第九十八张，P

29、PT共一百三十四页，创作于2022年6月99打孔或剪缺口法第九十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月1002、分组分组应按随机分配的原则。每组动物数量应按实验周期长短、实验类型及统计学要求而定。为了实验的科学性和客观性，实验中必须设置对照组。 第一百张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月101（三）实验动物常用的麻醉方法 局部麻醉浸润麻醉：普鲁卡因、利多卡因全身麻醉乙醚吸入、戊巴比妥钠、氨基甲酸乙酯第一百零一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月102（四）实验动物接种途径和接种方法皮下接种第一百零二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月103腹腔接种第一百

30、零三张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月104 以一只手抓取和固定动物，使腹部向上，以及使鼠头稍朝下大约15度角（头低位）。第一百零四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月105用消毒酒精进行进针部位消毒。第一百零五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月106另一只手将注射器针头于左（或右）小腹部刺入皮下。第一百零六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月107静脉接种第一百零七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月108将小鼠放进固定器里。第一百零八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月109露出尾巴。用4550的温水浸润尾部半分钟或用酒精擦拭

31、使血管扩张和使表皮角质软化。第一百零九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月110 用食指和中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，大拇指再轻轻按住尾部。第一百一十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月111右手持注射器，使针头与静脉平行（小于30度角），从尾下四分之一处（约距尾尖2-3厘米）处进针。第一百一十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月112将兔子放入固定架第一百一十二张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月113先拔去注射部位的被毛；用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈； 用消毒酒精消毒注射部位。第一百一十三张，PPT共一百三十四页，创作于2

32、022年6月114用一只手的食指和中指托住注射部位的耳缘，大拇指顺势按在耳上面固定住兔耳。第一百一十四张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月115另一只手持6号针头（连注射器）尽量从静脉的远端刺入。第一百一十五张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月116当针头有回流血时，移动拇指于针头上以固定针头。第一百一十六张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月117将药液以均匀的速度注入；或以均匀的速度抽取血液。第一百一十七张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月118注射（采血）完毕，用消毒棉球（签）轻轻按住针眼，拔出针头。第一百一十八张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月119用消毒棉球（棉签）压迫针眼片刻止血。第一百一十九张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月120消化道接种第一百二十张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月121 右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿口腔顶壁和咽后壁徐徐插入食道。第一百二十一张，PPT共一百三十四页，创作于2022年6月122鼻腔接种颅内接种角膜接种第一百二十