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文档简介

1、蔷薇组织培养小组成员：实验原理：植物细胞全能性，植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的潜在能力。实验目的：1、初步掌握外植体植物材料的消毒、接种的无菌技术以及外植体愈 伤组织诱导的方法；2、掌握培养基母液的配制方法及基本操作；3、学习用母液法配制MS培养基以及掌握培养基灭菌的方法及操作 过程。4、通过组织培养的方法获得完整的蔷薇植株。材料、试剂及器具：1、材料蔷薇带腋芽的茎段2、试剂6-BA、琼脂、蔗糖、IBA、NAA、75%酒精、NaClO4溶液 (或 0.1%HgCl2)、无菌水。3、实验设备及用具镊子、无菌纸、超净工作台、酒精灯。实验步骤1、无菌材料的获得：

2、取带腋芽的茎段，用自来水冲洗100-200min后，用洗涤剂洗涤，无菌水冲洗干净，经75%乙醇处理8s后，再用0.1%HgCl2溶液表面灭菌8-10min，无菌水冲洗4-5次，接种于诱导培养基上。2、分化与增殖培养培养基的配制：基本培养基为MS培养基。1）诱导与分化培养基 MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+AgNO3 3.5mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 6.5g/L（pH 值 5.8）2）继代增殖培养基 MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L+AgNO3 3.0mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 6.5g/L3）生根 培养基 1/2MS+IBA0.2mg/L+

3、NAA0.2mg/L+AgNO3 4.5mg/L+蔗糖 20g/L+琼脂 4.5g/L4）培养温度为2226C,光强2000-2500Lux.在1）培养基中接种2-3个茎段共接12瓶，1周左右外 植体开始转绿，膨大，2-3周从基部产生愈伤组织或直接发 生丛生芽。一般待芽伸长时，将其分割转移2）中继代增殖， 使其继续分化，每10d左右再分割一次，增值率可达8-15 倍，当扩大到一定数量时，把健壮小植株集中转入3）培养 基中诱导生根，其余芽丛反复转入新鲜的继代培养基中扩大 繁殖。3、诱导生根转入3）培养基中的小植株，5d左右基部开始膨大，并有白色 的根基突起。3）培养基幼苗生根较快。5-7d开始生根，5-15d 即可移栽，根系鲜白充实，绿苗茎叶健壮。4、炼苗与移栽炼苗前揭开培养瓶的封口膜，炼苗5-7d，然后小心取出， 用自来水冲去苗基部的培养基，移栽到灭菌的腐殖质与碎 炉渣（3:2）的混合基质中，前期适当遮阴并保持相对湿度 85%-95%，逐步降至70%，定期喷洒40%多菌灵80

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