医学专题药分04

1、结构性质（物理、化学性质） 分析方法（鉴别、检查、含量测定）2021/7/20 星期二1醇酚羟基烯醇羟基酚2021/7/20 星期二2胺芳胺芳伯氨基2021/7/20 星期二3羧酸芳酸2021/7/20 星期二4第三章 定量分析样品的前处理方法2021/7/20 星期二5第一节 定量分析样品的前处理方法2021/7/20 星期二6一、含卤素有机药物的分析 含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐结构特点：CX2021/7/20 星期二7（一）卤原子的活泼性1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关

2、系2021/7/20 星期二8（1）乙烯型卤和芳卤 不活泼2021/7/20 星期二9（2）烯丙型卤和苄卤 活泼（3）卤代烷型 介于两者之间2021/7/20 星期二102. 分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显2021/7/20 星期二113. 卤素的种类IBrClF常见的含卤素有机药物：2021/7/20 星期二12三氯叔丁醇六氯对二甲苯2021/7/20 星期二13泛影酸2021/7/20 星期二14胆影酸2021/7/20 星期二15碘他拉酸2021/7/20 星期二16碘番酸2021/

3、7/20 星期二17碘苯酯I2021/7/20 星期二18盐酸胺碘酮2021/7/20 星期二19诺氟沙星2021/7/20 星期二20醋酸氟轻松2021/7/20 星期二21磺溴酞钠2021/7/20 星期二22（二）含卤素有机药物的分析直接回流后测定法碱性或酸性还原后测定法氧瓶燃烧分解后测定法2021/7/20 星期二231. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶液（或定量过量的硝酸银滴定液）后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Volhard法）测定。2021/7/20 星期二24 本法适用于含卤素有机药物

4、结构中卤素原子结合不牢固的药物。 2021/7/20 星期二25 原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。 例三氯叔丁醇的测定 Ch.P（2005）2021/7/20 星期二26CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）(

5、Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010-12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 2021/7/20 星期二27测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加乙醇5ml，溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml，加热回流 15分钟，放冷，加水20ml与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于6.216mg的C4H7Cl3O1/2H2O。2021/7/20 星期二28滴定度，每1

6、 ml滴定液相当于被测组分的mg数，mg/ml滴定液浓度，mol/L被测物的摩尔质量，g/mol1 mol样品消耗滴定液的摩尔数，常体现为反应摩尔比，即1n。反应摩尔比为132021/7/20 星期二29 2. 碱性或酸性还原后测定法 本法是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反应，使有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Fajans法）测定。2021/7/20 星期二30 本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。 2021/7/20 星期二31 （1） 碱性还原后测定法例 泛影酸的测定 Ch.P （

7、2005）2021/7/20 星期二32 取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30分钟，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。2021/7/20 星期二33COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O2021/7/20 星期二34

8、 USP（28）、BP（2004） Ch.P（2005）收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。 2021/7/20 星期二35 （2）酸性还原后测定法例 碘番酸的测定 JP (14)2021/7/20 星期二36 取本品的干燥品约0.4g，精密称定，加锌粉1g及冰醋酸10ml，加热回流30min，放冷，冷凝管用水30ml洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤2次，每次20ml，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于19.031mg的C11H12

9、I 3NO2。2021/7/20 星期二373. 氧瓶燃烧分解后测定法（1）原理2021/7/20 星期二38 氧瓶燃烧法：本法是将分子中含有卤素或硫等元素的有机药物在充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧产物吸收于适当的吸收液中，再采用适宜的分析方法来检查或测定卤素或硫等元素的含量2021/7/20 星期二39 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析2021/7/20 星期二40 本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析2021/7/20 星期二41（ 2） 仪器与材料 仪器装置 燃烧瓶为500、1000或2000ml无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底部熔封铂

10、丝一根，下端呈螺旋状或网状2021/7/20 星期二42称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹2021/7/20 星期二432021/7/20 星期二44吸收液 A. 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态氧气2021/7/20 星期二45B. 吸收液的选择氟 水 氯 NaOH溶液溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液2021/7/20 星期

11、二46（3）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。2021/7/20 星期二47样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。2021/7/20 星期二48样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行检查或测定。2021/7/20 星期二49根据被燃烧

12、分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶。（4）注意事项 Ch.P（2005）规定的燃烧瓶体积为500、1000或2000ml三种，采用常量或半微量分析2021/7/20 星期二50 待分解样品量 燃烧瓶的体积 2030mg（半微量分析）500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多 2000ml或特殊结构的燃烧瓶2021/7/20 星期二51 正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。2021/7/20 星期二52测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶铂丝燃烧时起催化作用应同时做空白试验2021/7/20 星期二

13、53燃烧时要注意防爆燃烧要完全燃烧产生的烟雾完全被吸收2021/7/20 星期二54（5）应用例 磺溴酞钠的含量测定 Ch.P (2005)2021/7/20 星期二55燃烧分解O2HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O22021/7/20 星期二56溴 取本品约0.2g，照氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以0.4%氢氧化钠溶液10ml、浓过氧化氢溶液0.5ml与水10ml作为吸收液，俟生成的烟雾完全吸入吸收液后，用水稀释至100ml，煮沸5分钟，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸银滴定液（

14、0.1mol/L）20ml，摇匀，再加硫酸铁胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于7.990mg的溴(Br)。2021/7/20 星期二57例 碘苯酯的含量测定 Ch.P（2005）碘苯酯I2021/7/20 星期二58原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴-醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色

15、消失即为终点2021/7/20 星期二59 取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水l0ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成100ml)l0ml，密塞，振摇，放置数分钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约35min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2。 202

16、1/7/20 星期二60滴定度的计算 放大反应2mol碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2molNaIO3即2mol碘苯酯2molNaIO32021/7/20 星期二612mol NaIO3+10I-6molI2即2mol碘苯酯1molI2 6molI212molNa2S2O3反应摩尔比为162021/7/20 星期二62二、含金属有机药物的分析 含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物 如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁2021/7/20 星期

17、二63 有机金属药物：金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固 如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利2021/7/20 星期二64酒石酸锑钾2021/7/20 星期二65硬脂酸镁富马酸亚铁2021/7/20 星期二66葡萄糖酸锑钠2021/7/20 星期二67卡巴胂醋酸苯汞2021/7/20 星期二68汞撒利2021/7/20 星期二69含金属有机药物定量分析前的处理方法 不经有机破坏的分析方法 直接测定法;经水解后测定法;经还原-汞齐化后测定法2021/7/20 星期二70 经有机破坏的分析方法 湿法破坏(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸盐法等);干法破坏2021/7/20 星期二71（

18、一）不经有机破坏的分析方法1. 直接测定法 适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些CM键结合不牢固的有机金属药物。2021/7/20 星期二72富马酸亚铁的含量测定 Ch.P（2005） 取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg 2021/7/20 星期二73原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ Fe2+ + e-Fe3+红色浅蓝色OOCCHOHCCO+Fe2+

19、2021/7/20 星期二74 例 葡萄糖酸锑钠的测定 Ch.P（2005） 取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg的Sb。 2021/7/20 星期二752021/7/20 星期二76如枸橼酸铁铵的测定 Ch.P（2000） 取本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中。加水15ml溶解后，加硫酸lml，加热至溶液由暗棕

20、色变成淡黄色，放冷至约15，滴加高锰酸钾试液至溶液显粉红色并持续5s，加盐酸15ml与碘化钾试液15ml，密塞，静置3min，加水50ml稀释后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于5.585mg的Fe。 2021/7/20 星期二772. 用硫酸水解后测定法例 硬脂酸镁的测定 Ch.P（2005） 取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油层澄清，继续加热10min，放冷，加甲基橙指示液12滴，用氢氧化钠滴定液

21、(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg的MgO。2021/7/20 星期二78原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 2021/7/20 星期二79 某些含汞有机药物，由于CHg键不牢固，在水溶液（冰浴）中滴加硫酸使其水解，将有机汞定量转化成硫酸汞，再用硫氰酸铵滴定液滴定。2021/7/20 星期二80例 汞撒利的测定 取本品约0.5g，精密称定，加蒸馏水10ml，置冰浴中，滴加硫酸10ml，随滴随搅拌，至产生的沉淀复溶解，再加蒸馏水5

22、0ml，硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)相当于25.29mg的汞撒利。2021/7/20 星期二813. 经还原-汞齐化后测定法 本法系在酸性或碱性溶液中，加锌粉、加热回流，将药物中有机结合的汞还原析出金属汞，并与过量的锌生成锌汞齐。将锌汞齐溶于硝酸后，选用适当的方法测定汞的含量，并换算成含汞有机药物的含量。 2021/7/20 星期二82如醋酸苯汞的含量测定 取本品约0.5g，精密称定，置100ml烧瓶中，加水15ml，甲酸5ml与锌粉1g，附回流冷凝器，煮沸30min。放冷，滤过，滤纸和锌汞齐用蒸馏水洗涤至洗液对石蕊

23、试纸不显酸性反应。将锌汞齐溶解在稀硝酸(12)40ml中，置蒸气浴上加热3min，加尿素0.5g和足够的高锰酸钾试液至显桃红色。冷却后，加过氧化氢溶液脱色，加硫酸铁铵指示剂lml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每1ml硫氰酸铵液(0.1mol/L)相当于16.84mg的C8H8O2Hg。 2021/7/20 星期二83（二）经有机破坏的分析方法 适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物。2021/7/20 星期二841. 湿法破坏 （1） 硝酸-高氯酸法 本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态。 本法不能用于含氮杂环药

24、物的破坏2021/7/20 星期二85 （2） 硝酸-硫酸法 本法适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态。 本法不能用于含碱土金属有机药物的破坏2021/7/20 星期二86 （3） 硫酸-硫酸盐法 本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。 2021/7/20 星期二87 本法常用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态。2021/7/20 星期二88 （4） 其它湿法 硝酸硫酸高氯酸法 硫酸氧化剂法（过氧化氢法、高锰酸钾） 破坏后，金属呈高价态2021/7/20 星期二892. 干法破坏

25、 适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏2021/7/20 星期二90注意事项：（1）加热或灼烧时，应控制温度在420以下（2）一定要灰化完全（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去2021/7/20 星期二91第二节 定量分析方法特点2021/7/20 星期二92常用的含量测定方法 化学分析法仪器分析法生物学方法酶化学方法2021/7/20 星期二93容量分析法 经典化学分析 重量分析法 现代仪器分析技术 光谱分析法 色谱分析法 电化学分析法 2021/7/20 星期二94 容量分析法（滴定分析法

26、） 酸碱滴定法 氧化还原滴定法 配位滴定法 沉淀滴定法 非水溶液滴定法 一、容量分析法2021/7/20 星期二95 容量法用于常量组分测定。虽专属性不高，但由于其具有准确度较高（一般相对误差可达0.2%以下）、精密度好、仪器设备简单、试验成本低及操作简便、快速等优点，广泛用于原料药的含量测定。化学原料药含量测定首选。 （一）容量分析法的特点2021/7/20 星期二96（二）容量分析法的计算1. 滴定度2. 百分含量的计算 原料药2021/7/20 星期二97 （1）原料药，直接滴定法含量测定结果的计算： 滴定时，供试品消耗滴定液的体积，ml浓度校正因子供试品的质量，g。2021/7/20

27、星期二98（2）原料药，直接滴定法，有空白校正的计算： 滴定时，空白消耗滴定液的体积，ml2021/7/20 星期二99（3）原料药，剩余滴定法，有空白试验，含量测定结果的计算： 2021/7/20 星期二100（4）原料药，剩余滴定法，无空白试验，含量测定结果的计算： 2021/7/20 星期二101光谱分析法 紫外可见分光光度法 UVVis 原子吸收分光光度法 AAS 荧光分析法 二、光谱分析法2021/7/20 星期二102（一）紫外可见分光光度法 根据物质对波长为200760 nm这一范围的光吸收特性建立起来的一种定性、定量和结构分析的方法。 2021/7/20 星期二1031. 基本

28、原理 物质对单色光吸收强弱与吸光物质浓度、液层厚度关系定律 （1） Lambert -Beer定律2021/7/20 星期二104（2） 吸收系数 C以“g/100ml”为单位的吸收系数。 其物理意义为：当吸光物质溶液浓度为1%（1g/100ml），液层厚度为1cm时的吸光度。 百分吸收系数2021/7/20 星期二105摩尔吸收系数 C以“mol/L”为单位的吸收系数。2021/7/20 星期二106 （1）定期全面检定 （2）测定前对波长进行校正 汞灯、氘灯、钬玻璃 2. 仪器的校正和检定2021/7/20 星期二107（3）吸光度准确度的检定 重铬酸钾的硫酸溶液（4）杂散光 碘化钠和亚硝

29、酸钠 2021/7/20 星期二1083. 吸光度的测定方法（1）对溶剂的要求（2）测定波长的确证2021/7/20 星期二109 紫外可见分光光度法测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长2nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。 2021/7/20 星期二110（3）供试品溶液浓度应使测得的吸光度在0.30.7之间。2021/7/20 星期二1114. 在含量测定中的应用（

30、1）吸收系数法（绝对法）吸光度百分吸收系数液层厚度，cm，如无特别注明，L=1cm可在手册或文献中查到2021/7/20 星期二112（2）对照法供试品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度供试品溶液的浓度对照品溶液的浓度2021/7/20 星期二113条件：A. 待测物与对照品在相同 条件下测定B. 待测物与对照品浓度相近（3）计算分光光度法2021/7/20 星期二1145. 百分含量的计算 原料药（1）吸收系数法溶液体积ml稀释倍数2021/7/20 星期二115（2）对照法2021/7/20 星期二1166. 特点 UVVis 灵敏度高，操作简便、快速、仪器价格较低廉，因此应用广泛。但由于仪器

31、和操作的原因，误差较容量分析法大，除甾体激素类药物和某些抗生素外，原料药尽可能避免使用。 2021/7/20 星期二117（二）荧光分析法 物质受光照射时，在吸收某种波长光的同时又发射出比原来波长更长的光，激发光停止照射，光线随之消失，这种光称为荧光。荧光为发射光。利用荧光的物理特性进行定性与定量测定的方法称为荧光分析法。1. 荧光及荧光分析法2021/7/20 星期二1182. 荧光激发光谱与荧光发射光谱 以荧光发射光波长为横坐标，发射光强度（荧光强度）为纵坐标荧光发射光谱（荧光光谱）2021/7/20 星期二119荧光激发光谱（激发光谱） 激发光波长为横坐标，发射光强度（荧光强度）为纵坐标

32、2021/7/20 星期二1203. 荧光光度计（1）激发光源 汞灯、氙灯（2）单色器 两个单色器（3）样品池 低荧光玻璃或石英池（4）检测器 光电倍增管，在与激发光源成直角的方向检测荧光2021/7/20 星期二1214. 在含量测定中的应用 当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件一定时，在较稀浓度范围内药物的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比。 2021/7/20 星期二122对照品比较法RC供试品溶液试剂空白的荧光强度2021/7/20 星期二123片剂含量测定结果的计算 2021/7/20 星期二124片剂，荧光法平均片重，g/片2021/7/20 星期二1255. 特点 荧光法最主

33、要的优点是测定灵敏度高，选择性好。2021/7/20 星期二126 利用物质在流动相与固定相两相中分配系数差异而得以分离，并在检测中能检出其信号，从而达到分离、分析的一类分析方法。（一）色谱法三、色谱法 2021/7/20 星期二127 色谱法是一种物理或物理化学分离分析方法。具有高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快及应用范围广等优点。2021/7/20 星期二128（二）常用的色谱法色谱分析法 高效液相色谱法 HPLC气相色谱法 GC 2021/7/20 星期二1291. GC 常用气液分配色谱，硅藻土为载体，涂高沸点固定液或化学键和相，常用N2作流动相。2021/7/20 星期二130

34、2. HPLC （1）液固吸附色谱法 固定相为硅胶等吸附剂、流动相是烷烃作底剂加入适量极性调整剂2021/7/20 星期二131（2）液液分配色谱法 固定相几乎全是化学键合相2021/7/20 星期二132 流动相极性小于固定相极性。固定相为氰基或氨基健合硅胶，流动相是烷烃作底剂加入适量极性调整剂，用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质 正相色谱法2021/7/20 星期二133 流动相极性大于固定相极性。固定相为十八烷基硅烷健合硅胶（ODS或C18柱）或辛烷基硅烷健合硅胶（C8柱），流动相是甲醇水或乙腈水，主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物 反相色谱法2021/7/20

35、 星期二134 调整流动相pH值抑制组分解离，用于分离有机弱酸、弱碱 反相离子对色谱法 流动相中加入离子对试剂，用于分离有机酸、碱、盐离子抑制色谱法2021/7/20 星期二135（三）高效液相色谱法1. 对仪器的一般要求2021/7/20 星期二136 指用规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。包括理论板数（n）、分离度（R）、重复性和拖尾因子（T）等四个指标。2. 系统适用性试验2021/7/20 星期二137（1）理论板数 色谱柱的理论板数越多，柱效越高。2021/7/20 星期二138（2）分离度 药典要求 R 应1.52021/7/20 星期二139 用对照溶液，连续进样5次，

36、峰面积RSD应2.0%；或配制相当于80%、100%、120%的对照液，加入规定的内标，分别进样3次，计算平均校正因子，RSD亦应2.0%。 （3）重复性2021/7/20 星期二140（4）拖尾因子 峰高法定量时T应在0.951.05之间2021/7/20 星期二141（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量方法 内标物+对照品对照溶液，进样，测定，计算校正因子 3. 在含量测定中的应用2021/7/20 星期二142供试品+内标供试品溶液，进样，测定供试品和内标物质的峰面积或峰高，计算含量2021/7/20 星期二1432021/7/20 星期二144 （2）外标法测定供试品主成分含量

37、供试品供试品溶液对照品对照品溶液进样，测定，计算含量 2021/7/20 星期二145 缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样2021/7/20 星期二146 HPLC 主要用于抗生素、生化药品及含杂质干扰测定的化学药品。广泛用于药物制剂及多组分抗生素的含量测定。在药典中收载率呈大幅度上升趋势。 2021/7/20 星期二147（四）气相色谱法 GC 用于样品本身具挥发性，含有杂质等干扰的品种，如维生素E。2021/7/20 星期二148第三节 药品质量标准分析方法验证 2021/7/20 星期二149一、目的 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证理由、过程和结果均应记载在药品

38、标准起草或修订说明中。2021/7/20 星期二150二、用途（一）建立药品质量标准时，分析方法需经验证。（二）药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。2021/7/20 星期二151三、需验证的分析项目1. 鉴别试验；2. 杂质定量检查或限度检查；3. 原料药或制剂中有效成分含量测定；2021/7/20 星期二1524. 制剂中其它成分（如防腐剂等）的测定；5. 溶出度、释放度等检查中的溶出量等的测试方法。 2021/7/20 星期二153 验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。四、验证内容 2

39、021/7/20 星期二154 （一） 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收率（%）表示。2021/7/20 星期二155 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 2021/7/20 星期二156 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M2021/7/20 星期二157 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M2021/7/20 星期二158 数据要求 规定的范围内，至少用9个测定结果评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度分别

40、制备3份供试品溶液，进行测定。2021/7/20 星期二1591. 含量测定方法的准确度 原料药可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。 2021/7/20 星期二160 制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。2021/7/20 星期二161 中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在95105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90110%范围内。RSD一

41、般在3%以内。 2021/7/20 星期二1622杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。2021/7/20 星期二163 （二）精密度（precision） 精密度是指在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。 2021/7/20 星期二164偏差（d）：测量值与平均值之差相对偏差2021/7/20 星期二165标准偏差（SD或S）2021/7/20 星期二166相对标准偏差（RSD），也称变

42、异系数（CV）2021/7/20 星期二167 1. 重复性 在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9个测定结果评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度分别制备3份供试品溶液，进行测定。或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少测定6次的结果进行评价。2021/7/20 星期二168 2. 中间精密度 同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。2021/7/20 星期二169 3. 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。法定标准采用的分析方法，应进行

43、重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。 2021/7/20 星期二170 （三） 检测限（ LOD , limit of detection） 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。2021/7/20 星期二1711非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 2021/7/20 星期二172 2信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓

44、度或量。一般以信噪比（S/N）31或21时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。2021/7/20 星期二1733数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。 2021/7/20 星期二174（四）定量限（ LOQ， 1imit of quantitation） 指试样中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。2021/7/20 星期二175 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为101时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。 2021/7/20 星期二176 （五）专属性（specificity） 指在其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确

45、测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。2021/7/20 星期二177 （六） 线性 在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。2021/7/20 星期二178（七）范围 指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。2021/7/20 星期二179（八） 耐用性 指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。2021/7/20 星期二180（九）应用 1. 鉴别试验除专属性、耐用性外，其它

46、都不要求。2021/7/20 星期二181 2. 杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。 3. 含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求。2021/7/20 星期二182第四节 生物样品分析2021/7/20 星期二183一、概述 （一）生物样品分析（体内药物分析） 是通过各种分析手段，研究药物在体内数量和质量的变化，获得药物动力学的各种参数、药物在体内的生物转化、代谢的方式与途径等信息，从而为药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究的药物作出估计与评价，以及对药物的改进与发展作出贡献。2021/7/20 星期二184（二）生

47、物样品 生物样品分析的对象是体液、器官、组织及排泄物等2021/7/20 星期二185 生物样品的介质组成比较复杂：高分子蛋白质和低分子糖、脂肪、尿素等有机物，Na+、K+、X-等无机物2021/7/20 星期二186 体内药物存在形式： 游离型原型药物、代谢物; 药物与蛋白质的结合物主要与白蛋白、糖蛋白、脂蛋白结合，通过范德华力、氢键、静电力结合，非特异性结合，可逆过程，动态过程；2021/7/20 星期二187 缀合物药物经代谢后，极性增强，与内源性物质结合，发生缀合反应，共价键结合，不可逆。与葡萄糖醛酸结合葡萄糖醛酸苷，与硫酸形成硫酸酯缀合物。2021/7/20 星期二188（三）生物药

48、物分析的特点 1. 样品成分复杂，干扰物质多，大多需要经过分离、浓集后才能进行测定预处理 2. 样品的药物浓度低，对分析方法的灵敏度有较高的要求灵敏度高 2021/7/20 星期二189 3. 样品量少，且多数需在特定条件下采集，不易重新获得细心操作 4. 数据重现性较差误差大 5. 方法的探索性，在不断发展与完善中创新2021/7/20 星期二190二、常用样品的种类、采集和贮藏 常用样品有血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液2021/7/20 星期二191（一）血液1. 采血方式 分布均匀后取样动脉血、心脏取血动物静脉采血毛细管采血2021/7/20 星期二1922. 全血、血浆及血清的制

49、备离心全血离心上层：血清下层：血细胞（凝块）上层：血浆下层：血细胞血液自然凝结加抗凝剂2021/7/20 星期二193血清一般占全血量的40%左右血浆一般占全血量的50%左右抗凝剂：最常用肝素2021/7/20 星期二1943. 应用 血浆（plasma）和血清（serum）是最常用的生物样品。2021/7/20 星期二195血样采集后应及时分离血浆或血清，最好马上分析；短期保存时应置于冰箱冷藏室（4）中;长期保存时应置于冰箱冷冻室（-20）中。4. 贮存 2021/7/20 星期二196（二）唾液唾液样品的优点： 1. 样品容易获得 2. 取样无损害性 3. 取样方式易被儿童接受2021/7

50、/20 星期二197（三）尿液 体内药物的清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物等形式排出。 2021/7/20 星期二198 尿药测定主要用于药物剂量回收研究，尿清除率、生物利用度的研究，或药物代谢类型的确定。 2021/7/20 星期二199尿样的采集 测定尿中药物浓度时应采用时间尿，即将一定时间内（如8h 、12h或24h等）排泄的尿液全部储存起来，并记录其体积，取一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量2021/7/20 星期二200尿样的保存 采集后应立即测定 不能立即测定时，应加入防腐剂(如甲苯、三氯甲烷、浓盐酸等)置冰箱中保存; 保存时间为2436

51、h，可置冰箱冷藏室（4）中，长时间保存时，应冷冻（-20）2021/7/20 星期二201三 、生物样品分析前处理技术（一）概述1. 生物样品的种类 血样（去蛋白）、 唾液（去除黏蛋白）、尿液（缀合物水解2021/7/20 星期二2022. 被测药物的性质 结构、药理性质等3. 测定方法（1）光谱法2021/7/20 星期二203（2）色谱法 参比方法 HPLC、GC、GCMS、HPLCMS2021/7/20 星期二204（3）免疫分析法 有时作为参比方法 放射免疫分析法（RIA） 酶免疫分析法（EIA） 荧光免疫分析法（FIA） 2021/7/20 星期二205（二）去除蛋白质测定血样时，首

52、先应去除蛋白质1. 加入与水相混溶的有机溶剂 常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、丙醇、四氢呋喃等2021/7/20 星期二2062. 加入中性盐 常用的中性盐： 饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等 盐析方法与有机溶剂提取法并用时，可提高药物的回收率2021/7/20 星期二2073. 加入强酸 常用的强酸：10%三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸-钨酸混合液及5%偏磷酸等 上清液pH为 04，在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。 为避免对下一步测定的干扰，过量的强酸要除去。 2021/7/20 星期二2084. 加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 常用的沉淀剂：CuSO4-NaWO4 Z

53、nSO4-NaOH 2021/7/20 星期二2095. 酶解法 优点：适用于测定酸不稳定及蛋白结合牢固的药物。 缺点：不适用于在碱性下易水解的药物。 最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素2021/7/20 星期二210（三）缀合物的水解 测定尿液中药物总量时，首先应将缀合物水解。方法： 1. 酸水解法 2. 酶水解法 适用于遇酸及受热不稳定的药物 2021/7/20 星期二211（四）分离、纯化与浓集生物样品的分析样品的前处理（分离、纯化与浓集）：仪器分析除去大量内源性杂质；提取出低浓度的被测药物；浓集药物与代谢物的浓度。2021/7/20 星期二2121. 液液提取法 多数药物为亲脂性化合物，而大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质，因此用有机溶剂提取一次即可除去大部分杂质。2021/7/20 星期二213（1）常用萃取溶剂及萃取方法溶剂的选择 最常用乙醚和三氯甲烷溶剂的用量 有机相：水相=