7900型荧光定量PCR仪中文操作手册

1、 # #美国应用生物系统公司ABIPrism7900HT型荧光定量PCR仪操作手册 # # 美国应用生物系统中国公司技术服务部2003年ABIPrism7900HT中文操作手册目录ABIPRISM7900HT型荧光定量PCR仪简明手册快速入门3ABIPRISM7900HT型荧光定量PCR仪简明手册绝对定量4TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark20开机4 HYPERLINK l bookmark22新建文件4探针设置4 HYPERLINK l bookmark132参数设置5 HYPERLINK l bookmark50填样品表6 HYPERLINK l book

2、mark62启动循环7 HYPERLINK l bookmark64数据分析7 HYPERLINK l bookmark66查看结果7ABIPRISM7900HT型荧光定量PCR仪简明手册相对定量9开机9 HYPERLINK l bookmark86新建文件9探针设置9参数设置10 HYPERLINK l bookmark100填样品表11启动循环12 HYPERLINK l bookmark32数据分析12设置STUDY12 HYPERLINK l bookmark116查看结果12ABIPRISM7900HT型荧光定量PCR仪简明手册终点读板.14开机14 HYPERLINK l book

3、mark122新建文件14 HYPERLINK l bookmark128设置DETECTOR和MARKER15参数设置16 HYPERLINK l bookmark134填样品表16终点读板16数据分析17 HYPERLINK l bookmark148查看结果17ABIPrism7900HT中文操作手册ABIPrism7900HT中文操作手册 ABIPrism7900HT型荧光定量PCR仪简明手册快速入门开机开电脑显示屏电源，启动电脑，进入WindowsNT操作系统，以用户名Administrator登陆，密码7900。待鼠标沙漏消失，电脑完全启动后，开7900HT电源，红橙绿灯依次闪动2

4、次，然后绿灯点亮。双击桌而图标，打开SDS应用软件。新建文件菜单File-*New,新建一个空白文件。Assay代表试验类型,实时定盘选AbsoluteQuantification；终点读板选AllelicDiscrimination：Container指反应板类型,根据需要选择96孔板、384孔板或微虽反应卡；Template项用丁调用事先设直好的模板文件:Barcode是反应板的条形码,可以用扫描仪扫入或者手工输入。设置完毕，点OK确认。填样品表设定Detector：菜单Tools-*DetectorManager,点New新建探针，设定名称、报告基团、淬火基团等相关参数：选定探针后点Co

5、pytoPlateDocument复制到板文件，指定各个孔所用探针、样品名和样品类型（未知样品、标准品和对照，标准品并输入拷贝数），扫描或输入条形码。循环参数切换到Instrument口，在Thermalprofile选单下设定、修改PCR循环的温度、时间、反应休枳等。其中AddADissociationStage指令仪器进彳了融解曲线试验，只适用TSYBRGreenI荧光染料法：保存文件设世完毕，保存文件；也可以保存为模板文件，方便以后调用。启动PCR在Instrument口点击Open/Close按钮，弹出样品架（在主机的右侧）。把样品板置入托盘，再单击Open/Close按钮，样品架动收

6、回并关闭上样门。按Start开始实验，开始时有样品架到位、扫描头到位、惣盖丑温等工作，筹待出现RemainTime若干时何后即开始U：式运行。数据分析实验结束，H动或F工设艸基线和阈俏，单击Analyze分析结果,切换到Result窗口査看扩增曲线、标准曲线、腹始数据、实验报告等试验结果。保存数据，也可以Export各种数据。ABIPrism7900HT型荧光定量PCR仪简明手册绝对定量ABIPrism07900HT型荧光定虽PCR仪支持使用标准曲线法对核酸进行实时绝对定虽。请严格按照顺序开机，以便仪器系统能够正确地初始化，在乞个部分之间建立通讯联络。实验开始前，主机和机械惰需预热W分钟以上。

7、电源打开以后，主机即开始加热热盖，直到105co如果热盖尚未达到105C就开始实验，仪器将Il动暂停，等待热盖温度达到后才开始PCR。打开电脑显示屏的电源：启动电脑：启动机械臂，电源开关在背而；启动7900HT主机，可以看到红橙绿灯依次闪动2次，然后绿灯点亮，说明仪器启动完毕。二、新建文件启动软件按照下述路径启动SDS软件:Start-Programs-AppliedBiosystems-*SDS2.1-SDS2.1也可以双击桌而上的快捷方式图标启动SDS软件。如果使用的是SDSEnterpriseDatabase,登录时输入用名和密码，点OK。新建文件选择菜单File-New。在Assay下

8、拉菜单中选AbsoluteQuantification(StandardCurve)(实时定呈模式，用丁核酸的绝对定星研究)：在Container下拉菜单中根据需要选择所用的反应板类型：96孔板、384孔板或微量反应卡；在Template下拉菜单中选BlankTemplate如果只测一块板，在Barcode栏扫描或者输入反应板的条形码。点OK,软件打开一个空白的反应板文件。三、探针设置新建探针在SDS软件中，选择菜单Tools-DetectorManager,打开DetectorManager窗口。如果是第一次使用软件，或者探针(Detector)没有设直好，在DetectorManager对

9、话框中点New,新建探针。在AddDetector对话框的Name栏输入探针的名字，建议使用所研究的基因座的名称，如GAPDH、RNaseP等。不同探针给以不同的名字。(可选)在Description栏，输入简短的说明，32个字母以下。指定ReporterDye和QuencherDye。报告基团通常是FAM或者VIC：TaqMan探针的淬灭基团选TAMRA,MGB探针的淬灭基团选None。点Color,在弹出的调色板中任意选择一种颜色，点OK。（可选）在Notes栏输入200字以下说明。设代完成后，点击OK保存探针并返回DetectorManager页而。该探针即出现在探针列表中。重复设置更多

10、的探针。复制探针文件探针设捏好后，在DetectorManager页而.从探针列表中选择探针.或者按住Ctrl键点击.选择多个探针，这些探针即被选黑；再点击CopytoPlateDocument按钮，探针被复制到板文件的WellInspector中。点Done关闭DetectorManager樹口。应用探针在样品表中，选择含有第一种探针的所有样品孔。在WellInspector对话框中探针列表的Use项下的方框中，打钩选择要用的一个或多个探针，该探针即显示在样品表的相应孔中。重复1-2,设籃其余样品所用的探针。设置样品类型使用Ctrl和Shift键，在样品表中选择同一类型的所有样品孔。在Wel

11、lInspector对话框中探针列表的Task的下拉菜单中选择样品类型：空白对照选NTC：耒知样品选Unknown：C知拷贝数的标准品选Standard。对丁标准品，还要（Quantity栏中输入DNA模板的拷贝数，输入后按Enter。四、参数设置切换到SDS软件的Instrument页而。根据需要，选择或者不选9600Emulation如果选择9600Emulation.SDS软件将降低7900HT的升降温速率，使之与7700样。根据需要，修改PCR参数。在7900HT系统默认的参数中，50C2min是UNG酶起作用的步骤，UNG爾可以预防先前的PCR产物可能对木次定量PCR造成的污染；如果

12、所用试剂中没有UNG酶，请去掉此步；95C10min的作用是激活金牌Taq酚，同时火活UNG爾：如果用的不是金牌Taq爾，请去掉此步：后而40个循环的95C15sec和60C1min是定戢PCR的循环步骤。调整温度/时间：拖动臥标，选中需要修改的温度或时间，输入新的数值，回车：增加保温、循环或步骤：点击需要插入步骤处的左边，出现粗黑竖线后，点击AddHold、AddCycle或者AddStep按钮，分别插入保温、循环或步骤：删除步骤：选中想要删除的步骤，点击DeleteStep按钮。融解曲线试验：点AddADissociationStage按钮。注意：融解曲线试验只适用TSYBRGreenI荧

13、光染料法，不适用丁荧光探针法。AutoIncrement：每循环1次，温度和时间増加或减少一定幅度，一般不需设定。指定信号收集点：切换到DataCollection页而，点击每一个PCR循环步骤的平台线或升降温线,即出现信号收集标志；再点击一次，即消去信号收集标志。最好每一步都收集信号。有关信号收集可以使用默认设进，一般不需要改动。ABIPrism7900HT中文操作手册ABIPrism7900HT中文操作手册 # /BiosymsABIPrism7900HT中文操作手册 设世反应体枳：定戢PCR的标准反应休枳是：96孔板50pL,384孔板10jjL,微呈反应卡2pL：如果想修改的话，建议9

14、6孔板大T25pL,384孔板大T5jjL另外，同一块板上所有孔的反应体积必须一样大小。设理参比荧光：如果使用的是ABI公司的定ffiPCR试剂，TaqManUniversalPCRMasterMix或者SYBRGreenPCRMasterMix.参比荧光(PassiveReference)选ROX：如果所用试剂中没有参比荧光，请选None。五、填样品表(可选)保存为模板菜单FileSaveAs：对丁企业版软件，选择File-*SaveTemplatetoDatabase给文件另外取一个名称。在文件类型下拉菜单中，选SDSTemplates(.sdt)oOK。设置样品名在反应板上选中含有第一个

15、样品的所有反应孔。在SampleName栏输入样品名，回车。重复1和2,命名其余样品。增加或编辑条形码、备注在SDS软件中.选择ToolsDocumentInformation。在对话框中编辑条形码或者备注。完成后，点OK。保存到数据库在File下拉菜单选择SaveDocumenttoDatabasec在UniqueName栏输入文件名，Barcode栏扫描或者输入条形码。在Comment栏，输入简短的文件说明，点OK。在SaveDocument对话框，点OK。保存到文件系统在SDS软件的File下拉菜单中选择SaveAs。选好路径，在FileName栏输入文件名，也可以扫描或者输入条形码。点

16、Save。六、启动循环准备好反应板。切换到SDS软件的Instrument页而。在Real-Time或者Plate-Read子页面，点Open/Close,弹出样品架(在主机的右侧)。把样品板放在托盘上，再单击Open/Close按钮，样品架H动收回进入仪器里面，并关闭上样门。点击Start按钮开始实验。开始时有样品架到位、扫描头到位、热盖升温等工作，等待屏幕上显示PCR进程和剩余时间后即开始正式运行。程序结束后点FileSave保存实验结果。七、数据分析设代基线和阙值：在SDS软件中，选择AnalysisAnalysisSettings；在Detector下拉菜单中选择探针：在Analysi

17、sSettings对话框中选择|动或者手T确定6值，如果选择手工方式，先输入阈值，然后选择H动或FT设代基线。基线（Baseline）的起点和终点确定脈则为：起点要避开前而几个循坏dll-Stage2的95C高温所导致的荧光信号增高（特别是国产试剂，升高比较明显），设在信号开始达到本底的地方，一般在第3到第6个循环之间：肉为基线是指PCR开始时信号很低、处丁本底水平的那个阶段：终点要设定在荧光信号有明显增高处的询而，一般选在本组实验中最小的Ct值前再3个循环处：另外起点到终点之间的距离应该大丁8个循环。菜单Analysis-Analyze,SDS软件即开始分析数据，并在Results页面显示计

18、算结果。选择FileSaveResultstoDatabase.保存实验结果。八、查看结果扩增曲线切换到Result页面，在AmplificationPlot口査看扩增llll线。在默认的情况下，扩增Illi线的纵坐标代表经过ROX和空白校正后的相对荧光信号强度，横坐标代表PCR循环次数（从1到40）；纵坐标以对数表示，横坐标以线性表示。如果要看完全线性的S形图谱，请双击纵坐标轴线，打开坐标设代谢口，将纵坐标改成线性形式。原始数据切换到Component口，査看原始数据。正常惜况下，报告基团FAM的信号强度基线时约为4000-5000点，扩增完成后达到约25000-30000点，中间呈S形増长

19、；VIC的信号强度基线时约为4000-5000点,扩增完成后达到约15000-20000点,中间也呈S形增长;淬灭基团TAMRA的信号强度基线时比FAM稍低一点,到报告基团开始指数增长时它反而会向下降低：ROX信号比FAM的基线水平稍低一点，而且是水平稳定的，不随PCR进程而改变，肉为ROX是以固定的浓度加入到PCR试剂中的，并不参与PCR反应。原始数据切换到Spectra子页面，可以査看另一种脈始数据。与Component的区别是：Component显示的是信号强度随时间也就是PCR循环次数的变化，是纵向的；Spectra显示的是每个PCR循环点上信号强度在不同波长上的分布，是横向的。标准曲

20、线切换到StandardCurve口，査看标准曲线。注意：只有在Setup时输入标准品的拷贝数后，软件才能H动生成标准曲线。实验报告切换到Report窗口，査看实验报告。确认无误后，保存结果。也可以从File菜单中选择Export.再选择数据类型，输出不同的数据，包括信号强度、療始数据和实验结果等。输出的数据可以用Excel打开，并可在Excel中垂新生成扩増曲线、标准曲线等图谱。ABIPrism7900HT中文操作手册ABIPrism7900HT中文操作手册 /BiosymsABIPrism7900HT中文操作手册 #ABIPrism7900HT型荧光定量PCR仪简明手册相对定量ABIPri

21、sm07900HT型荧光定虽PCR仪支持使用6值比较法对核酸进行实时相对定虽。请严格按照顺序开机，以便仪器系统能够正确地初始化，在乞个部分之间建立通讯联络。实验开始前，主机和机械惰需预热10分钟以上。电源打开以后，主机即开始加热热盖，直到105co如果热盖尚未达到105C就开始实验，仪器将H动暂停，等待热盖温度达到后才开始PCR。打开电脑显示屏的电源：启动电脑：启动机械臂，电源开关在背而；启动7900HT主机，可以看到红橙绿灯依次闪动2次，然后绿灯点亮，说明仪器启动完毕。二、新建文件启动SDS软件按照下述路径启动SDS软件：Start-Programs-AppliedBiosystems-*S

22、DS2.1-SDS2.1也可以双击桌而上的快捷方式图标启动SDS软件。如果使用的是SDSEnterpriseDatabase,登录时输入用名和密码，点OK。新建文件选择菜单File-New。在Assay下拉菜单中选RelativeQuantificationDDCT（实时定呈模式，用丁核酸的相对定戢研究）:在Container下拉菜单中根据需要选择所用的反应板类型：96孔板、384孔板或微虽反应卡：在Template下拉菜单中选BlankTemplate。如果只测一块板，在Barcode栏扫描或者输入反应板的条形码。点OK,软件打开一个空白的反应板文件。三、探针设置新建探针在SDS软件中，选择

23、菜单Tools-DetectorManager,打开DetectorManager窗口。如果是第一次使用软件，或者探针（Detector）没有设直好，在DetectorManager对话框中点New,新建探针。在AddDetector对话框的Name栏输入探针的名字，建议使用所研究的基冈座的名称，如GAPDH、RNaseP等。不同探针给以不同的名字。（可选）在Description栏，输入简短的说明，32个字母以下。指定ReporterDye和QuencherDye。报告基团通常是FAM或者VIC：TaqMan探针的淬灭基团选TAMRA,MGB探针的淬灭基团选None。点Color,在弹出的调

24、色板中任意选择一种颜色，点OK。（可选）在Notes栏输入200字以下说明。设代完成后，点击OK保存探针并返回DetectorManager页而。该探针即出现在探针列表中。重复步骤设且更多的探针。复制探针文件探针设咒好后，在DetectorManager页而.从探针列表中选择探针.或者按住Ctrl键点击.选择多个探针，这些探针即被选黑；再点击CopytoPlateDocument按钮，探针被复制到板文件的WellInspector中。点Done关闭DetectorManager樹口。应用探针在样品表中，选择含有第一种探针的所有样品孔。在WellInspector对话框中探针列表的Use项下的方

25、框中，打钩选择要用的一个或多个探针，该探针即显示在样品表的相应孔中。重复1-2,设習其余样品所用的探针。设置样品类型使用Ctrl和Shift键，在样品表中选择同一类型的所有样品孔。在WellInspector对话框中探针列表的Task的下拉菜单中选择样品类型：未知样品选Target：内对照（即管家基因）选EndogenousControL四、参数设置切换到SDS软件的Instrument页而。根据需要，选择或者不选9600Emulation如果选择9600Emulation.SDS软件将降低7900HT的升降温速率，使之与7700样。根据需要，修改PCR参数。在7900HT系统默认的参数中，5

26、0C2min是UNG酶起作用的步骤，UNG爾可以预防先前的PCR产物可能对木次定量PCR造成的污染；如果所用试剂中没有UNG酶，请去掉此步；95C10min的作用是激活金牌Taq酚，同时火活UNG爾：如果用的不是金牌Taq爾，请去掉此步：后而40个循环的95C15sec和60C1min是定戢PCR的循环步骤。调整温度/时间：拖动就标，选中需要修改的温度或时间，输入新的数值，回车：增加保温、循环或步骤：点击需要插入步骤处的左边，出现粗黑竖线后，点击AddHold、AddCycle或者AddStep按钮，分别插入保温、循环或步骤：删除步骤：选中想要删除的步骤，点击DeleteStep按钮。融解曲线

27、试验：点AddADissociationStage按钮。注意：融解曲线试验只适用TSYBRGreenI荧光染料法，不适用丁荧光探针法。AutoIncrement：每循环1次，温度和时间増加或减少一定幅度，一般不需设定。指定信号收集点：切换到DataCollection页而，点击每一个PCR循环步骤的平台线或升降温线,即出现信号收集标志；再点击一次，即消去信号收集标志。最好每一步都收集信号。有关信号收集可以使用默认设直，一般不需要改动。设代反应体积：定虽PCR的标准反应休枳是：96孔板50|JL.384孔板10pL,微呈反应卡2pL；如果想修改的话,建议96孔板大T25pL,384孔板大丁5pL

28、。另外,同一块板上所有孔的反应体积必须一样大小。设理参比荧光：如果使用的是ABI公司的定MPCR试剂，TaqManUniversalPCRMasterMix或者SYBRGreenPCRMasterMix.参比荧光(PassiveReference)选ROX：如果所用试剂中没有参比荧光，请选None。五、填样品表(可选)保存为模板菜单FileSaveAs：对丁企业版软件，选择File-*SaveTemplatetoDatabase给文件另外取一个名称。在文件类型下拉菜单中，选SDSTemplates(.sdt)oOK。设置样品名在反应板上选中含有第一个样品的所有反应孔。在SampleName栏输

29、入样品名，回车。重复1和2,命名其余样品。编辑条形码、备注在SDS软件中.选择ToolsDocumentInformation。在对话框中编辑条形码或者备注。完成后，点0K。保存到数据库在File下拉菜单选择SaveDocumenttoDatabasec在UniqueName栏输入文件名，Barcode栏扫描或者输入条形码。在Comment栏，输入255字以下的文件说明，点0K。在SaveDocument对话框，点OK。保存到文件系统在SDS软件的File下拉菜单中选择SaveAs。选好路径，在FileName栏输入文件名，也可以扫描或者输入条形码。点Save。启动循环准备好反应板。切换到SD

30、S软件的Instrument页而。在Real-Time或者Plate-Read子页面，点Open/Close,弹出样品架(在主机的右侧)。把样品板放在托盘上，再单击Open/Close按钮，样品架|动收回进入仪器里面，并关闭上样门。点击Start按钮开始实验。开始时有样品架到位、扫描头到位、热盖升温等工作，等待屏幕上显示PCR进程和剩余时间后即开始正式运彳亍。程序结束后点File-Save保存实验结果。七、数据分析/SSBiosymsABIPrism7900HT中文操作手册/SSBiosymsABIPrism7900HT中文操作手册 /BiosymsABIPrism7900HT中文操作手册 #

31、在SDS软件中，菜单Analysis-Analyze,SDS软件即开始分析数据,并在Results页面显示计算结果。八、设置Study(EnterpriseSoftwareonly)在SDS软件中，确保板文件是打开的。选择File-SaveResultstoDatabaseo点击Study按钮。在SelectStudy对话框，点New。在Name栏输入名字，可以长达128个字母：Creator栏显示操作者的账号名称，不可编辑：在Description栏输入说明，可以长达255个字。点0K。选中新Study,点OK。在下而3种情况下，实验数据被作为Sessiondata附加到Study中：每块板

32、在定蚩PCR完成后立即被附加到Study中：如果使用机械臂，AutomationController软件在操作过程中|动完成附加：SDSManager或RQManager软件在分析数据的过程中|动完成附加。九、查看结果扩增曲线切换到Result页面，在AmphficationPlot窗口査看扩增llll线。在默认的惜况下，扩增曲线的纵坐标代表经过ROX和空白校正后的相对荧光信号强度，横坐标代表PCR循环次数(从1到40)；纵坐标以对数表示，横坐标以线性表示。如果要看完全线性的S形图谱，请双击纵坐标轴线，打开坐标设代窗口，将纵坐标改成线性形式。原始数据切换到Component口，査看原始数据。正

33、常惜况下，报告基团FAM的信号强度基线时约为4000-5000点，扩增完成后达到约25000-30000点，中间呈S形增长；VIC的信号强度基线时约为4000-5000点,扩增完成后达到约15000-20000点，中间也呈S形增长;淬灭基团TAMRA的信号强度基线时比FAM稍低一点,到报告基团开始指数增长时它反而会向下降低:ROX信号比FAM的基线水平稍低一点，而且是水平稳定的，不随PCR进程而改变，肉为ROX是以固定的浓度加入到PCR试剂中的，并不参与PCR反应。原始数据切换到Spectra子页面，可以査看另一种脈始数据。与Component的区别是：Component显示的是信号强度随时间

34、也就是PCR循环次数的变化，是纵向的；Spectra显示的是每个PCR循环点上信号强度在不同波长上的分布，是横向的。标准曲线切换到StandardCurve口，査看标准曲线。注意：只有在Setup时输入标准品的拷贝数后，软件才能M动生成标准曲线。实验报告切换到Report窗口，査看实验报告。确认无误后，保存结果。也可以从File菜单中选择Export.再选择数据类型，输出不同的数据，包括信号强度、療始数据和实验结果等。输出的数据可以用Excel打开，并可在Excel中垂新生成扩増曲线、标准曲线等图谱。ABIPrism7900HT型荧光定量PCR仪简明手册终点读板ABIPrism7900HT型荧

35、光定量PCR仪支持各种使用TaqMan探针的等位基肉鉴定实验.包括SNP筛査、基因突变检测、物种鉴定、+/-检测、等位基因鉴定等。所有等位基因鉴定实验都可以分为两个阶段：1、PCR扩增：2、PCR后的荧光信号读取(Post-read)和数据处理。第一步既可以在9700、9600等普通的PCR仪上进彳亍，也可以在7000、7900等定呈PCR仪上进行：第一步则必须在定虽PCR仪上进行。以下只叙述第二步Post-Read和数据处理的操作方法。如果第一步也在定量PCR仪上进行，请按实时定嵐的实验方法设代软件和运彳亍；待PCR完成、数据保存好后，再按以下步骤操作。、开机请严格按照顺序开机，以便仪器系统

36、能够正确地初始化，在乞个部分之间建立必要的通讯联络。实验开始前，主机和机械惰需预热10分钟以上。电源打开以后，主机即开始加热热盖，直到105Co如果热盖尚未达到105C就开始实验，仪器将暂停等待热盖温度达到后才开始运转。打开电脑显示屏的电源：启动电脑：启动机械臂，电源开关在背而；启动7900HT主机，可以看到红橙绿灯依次闪动2次，然后绿灯点亮，说明仪器启动完毕。二、新建文件启动SDS软件按照下述路径启动SDS软件:Start-Programs-AppliedBiosystems-*SDS2.1-SDS2.1。也可以双击桌而上的快捷方式图标启动SDS软件。如果使用的是SDSEnterpriseD

37、atabase,登录时输入用名和密码，点OK。新建文件选择菜单File-New-在Assay下拉菜单中选AllelicDiscrimination；在Container下拉菜单中根据需要选择所用的反应板类型：96孔板、384孔板或384孔微虽反应卡:在Template下拉菜单中选BlankTemplateo如果只测一块板，在Barcode栏扫描或者输入反应板的条形码。点OK,软件打开一个空白的反应板文件。三、设置Detector和Marker新建Detector在SDS软件中，选择菜单Tools-DetectorManager,打开DetectorManager窗口。如果是第一次使用软件，或者

38、探针(Detector)没有设直好，在DetectorManager对话框中点New,新建探针。在AddDetector对话框的Name栏输入探针的名字，建议使用所研究基因位点的等位基因名称，如AlleleRAllele2等。（可选）在Description栏，输入简短的说明，32个字母以下。指定ReporterDye和QuencherDye。报告基团通常是FAM或者VIC：TaqMan探针的淬火基团选TAMRA,MGB探针的淬火基团选None。点Color,在弹出的调色板中任意选择一种颜色，点OK。（可选）在Notes栏输入200字以下说明。设代完成后，点击OK保存探针并返回Detector

39、Manager页而。该探针即出现在探针列表中。重复1-8,设置更多的探针。新建Marker在SDS软件中，选择菜单Tools-MarkerManager,打开MarkerManager口。如果Marker没有设代好，在MarkerManager对话框中点New,新建Marker。在MarkerEditor对话框的Name栏输入Marker的名字，建议使用所研究的基因位点的名称，如D3S1169等。设雄完成后点OK,该名称即出现在位点列表中。在左边的位点列表中选中该名称，然后在右边的探针列表中Use项下方框中打钩，选择该Marker所用的Detector。一般每个Marker选两个Detecto

40、r,FAM、VIC各一。如果需要，重复步骤3-4,设置更多的Marker。注意：实时定呈PCR只耍求设置Detector即可，而SNP实验必须进一步设ftMarker,二者有区别。应用Marker在SDS软件的MarkerManager页而，在左边的位点列表中选择所需Marker,点击CopytoPlateDocument按钮，该Marker的信息即分3行出现在WellInspector窗口中。根据需要继续选择其他所需Marker。点击Done关闭MarkerManager窗口。在样品表中，选择含有第一种Marker的所有样品孔。在MarkerInspector对话框中Marker列表的Use

41、项下的方框中，打钩选择要用的Marker,该Marker即显示在相应的样品孔中。根据需要，重复步骤3-4,设置其余Marker。设置样品类型使用Ctrl和Shift键，在样品表中选择同一类型的所有样品孔。在WellInspector对话框中Marker列表的Task下拉菜单中选择样品类型：空白对照选NTC：所有样品选Unknown。设捏参比荧光：如果使用的是ABI公司的定MPCR试剂，TaqManUniversalPCRMasterMix或者SYBRGreenPCRMasterMix.参比荧光（PassiveReference）选ROX：如果所用试剂中没有参比荧光，请选None。点击右上角的X按钮关闭WellInspector窗口。四、参数设置切换到SDS软件的Instrument页而。PCR热循环程序只有60C一个步骤，不需要修改。ABIPrism7900HT中文操作手册/SSBiosymsABIPrism7900HT中文操作手册 /BiosymsABIPrism7900HT中文操作手册 #设世反应休枳：终点读板的标准反应休枳是：96孔板25pL,384孔板5pL.微虽反应卡2pL