尿液分析标准化及复检规则的建立

1、尿液分析的现代化观念难点 理学检查 化学检查沉渣检查显微镜检验技术 全自动流式图像分析技术 全自动流式电信号分析技术目测（颜色、透明度）仪器分析（颜色、透明度、SG）手工 半自动分析 全自动分析优点：1、方便快捷 解放劳动力2、大批量自动化分析弊端：1、红细胞 尿液中含有不稳定酶、肌红蛋白和菌尿及高渗尿液，会引起红细胞假阳性2、白细胞：只检测酯酶，淋巴细胞里不含酯酶，（肾移植等发生肾排斥反映的患者） 3、蛋白：只检测白蛋白，不检测球蛋白，本周氏蛋白等4、亚硝酸盐：粪链球菌等菌属不含硝酸盐原酶你们检验科 报告弄错了，镜检跟干化学不符镜下确实看到了！干化学对尿常规检测的影响显微镜检的优缺点优点:方

2、便开展是目前沉渣检查的金标准缺点标准不够统一，速度慢人为主观因素对结果的影响大检查个体差异大，CV40%不能标准化我们结果差距怎么这么大每个人看的视野都不一样，无法一致干化学+显微镜检 仅用干化学筛选做镜检复检率高！ WBC（淋巴及破碎细胞）、RBC（高渗尿、VC阳性）、管型、病理性上皮细胞易漏检 无法做到准确定量（镜检CV40%） 没有统一的标准汗！这到底是多少呀？你的药灵不灵呀！严重了！WBC昨天是10个/HP今天是15个/HP，尿液有形成分检测的重要性 有形成分定量分析可有效修正干化学假性结果 专家的呼吁 “尿液沉渣检查不可忽视” “用显微镜检查发现肾疾病是用其它检查不可取代的“金标准”

3、 “尿液分析标准化”研讨会 意味深长 “尿沉渣镜检为体外的肾活检” “质量取决于态度” 中华检验医学大辞典对尿液分析下了明确定义尿液有形成分检测 势在必行！干化学+尿有形成分分析+显微镜检有这样的标准我们可以申请认可实验室了尿有形成分分析仪能解决的问题1、快速筛选2、流式图像技术防止细胞重叠、降低漏检。3、图文报告，降低镜检率4、定量准确5、新参数ISO15189CAP尿有形成分检验方法进展镜检法尿流式电信号分析法（库尔特微孔技术+荧光细胞染色）非流式影像分析法（自动尿液充池，沉淀后自动分析）真正流式图像分析法（鞘液技术，尿液呈单细胞排列，高速拍照图象分析）图像处理技术UF100in 1995

4、UF50in 1999YELLOW IRISin 1987in 1993in 1990流式细胞技术M500 in 1995M939UDxin 1999流式图像法=流式+图像尿有形成分分析仪发展历程IQ-200in 2002FUS-100/200in 2010UF1000in 2007标准镜检法 方法： 现行全国尿液检验标准化委员会CCCLS所规定的；10ml、5min离心；人工报告 XX个/HP； 优点：基层也可以开展。 缺点：速度慢；主观识别需丰富经验，影响因素多；计数和结果均受主观因素影响。基于“粒子”电信号检测的技术 缺点：太敏感假阳性偏高，需显微镜离心、复检价格偏高,成本高，基层医院尚

5、难承受优点： 多种参数,RBC来源信息,电导率 快速的阴性筛选，100个/小时 使用新鲜未离心尿“阳性”结果必须用显微镜复检确认！非流式影像法尿有形成分分析仪原理：显微镜镜检+计算机自动识别 主要特点： 价格低廉 阴性样本，速度较快 原尿直接检测，不离心 、不染色 异常红细胞形态学分析。不足之处：自动化程度低，阳性样本速度慢缺少核心流式技术保证，易造成成分重叠，聚集，粒子重叠，识 别误差大，粘液丝等基本检测不到分类与计数准确度差，需操作者人工判读与修改才可出报告图像有效采集少，误差率大交叉污染严重非流式影像法尿有形成分分析仪 流式图像法尿有形成分分析仪照相（图像）技术和流式细胞技术两种技术理念

6、的完美结合高速摄像、分割图像、特征提取 人工智能识别系统流式图像技术分析仪原理：层流式流式分析技术保证（鞘液管，鞘液包被有形成分）数字成像技术自动颗粒识别分析技术智能识别 被转换成数字信息的微粒特征通过人工智能软件识别系统，自动将有形成分分为12大类全自动尿液分析工作站干化学与有形成分联机检测组合复检规则的判断 显微镜分类结果离心尿半自动影像分析 病人信息 检测结果 打印机 检测结果 病人信息 数 据 管 理 系 统 本地计算机80%直接报告iQ200存在的问题 1.检验工作越来越依靠仪器的检测，人的作用越来越被忽视！2.仪器结果真实性、可靠性？3.如何保持仪器的稳定性？4.如何实现尿液分析的

7、标准化？ 如何提高质量，弥补不足？一、仪器性能评价是必不可少的尿液干化学分析仪性能评价1.重复性2.分析仪与随机尿试纸条适配的准确度3.稳定性 中华人民共和国医药行业标准（YY/T 0475-2004） 尿液化学分析仪通用技术条件重复性：根据要求选择进行下列一种试验： a) 测试标准灰度条：以分析仪对标准灰度条的反射比进行重复测试10次，计算测试结果的变异系数，要求不超过1%。 b) 测试尿试纸条：随机抽取同一批号20筒尿试纸条，每筒备抽取1条，分别对一份阳性尿液质控液进行检测，计算各检测项目测定结果的符合率，要求不小于90%。分析仪与随机尿试纸条适配的准确度：在分析仪上，以适配的尿试纸条对所

8、有检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测（参考溶液的配制方法依据厂家提供的资料进行），每个浓度水平重复测定10次，比较测试结果与参考溶液标示值的偏差，要求相差同向不超过一个量级，阳性结果不得出现阴性，阴性结果不得出现阳性。稳定性： 根据要求，选择进行下列一种试验： a) 测试标准灰度条。分析仪开机预热后、4h、8h以分析仪分别对标准灰度条的反射比重复测试10次，计算所有测试结果的变异系数，要求不超过1%。 b) 测试尿试纸条：分析仪开机预热后、4h、8h，抽取适配的尿试纸条，分别对一份阳性尿液质控 液进行重笈测试10次，计算各检测项日。测定的结果的符合率，要求不小于90%。 尿液沉渣分析仪性能评

9、价1.精密度2.准确度3.重复性和线性4.携带污染率按照第三版全国临床检验操作规程和尿液沉渣检查标准化的建议进行双盲检测批内精密度：取高值、中值、低值（临界范围）浓度新鲜尿液标本各10 ，连续测定20次，计算平均值、标准差及变异系数。批间精密度：用高、低值2个水平质控品，连续测定20天，计算平均值、标准差及变异系数。准确度：用高、低值2个水平质控品，连续测定30 d，计算均值，与质控品的靶值比较。重复性和线性：选取新鲜尿液高值标本，用生理盐水分别稀释2、4、16、64、256倍，用于RBC、WBC、EC、BACT的线性范围分析；用生理盐水分别稀释2、4、8、16倍,用于CAST的线性分析。每个

10、稀释度测定3次,取均值为检测值,对检测值与期望值进行线性回归相关分析。与厂商提供的性能参数相比较,判断其符合性。携带污染率：取新鲜尿液高值和低值标本，先连续检测异常标本3次（结果记录为H1、H2、H3），随后立即测定正常标本3次（结果记录为L1、L2、L3），计算携带污染率。 携带污染率（）（L1L3）/（H3L3）100二、质控是保证仪器稳定的必要保障 室内质控是保证仪器的精密度 室间质评是保证仪器的准确度尿沉渣检查标准化的建议 全国临床检验尿液检查标准化方案建立依据：JCCLS、NCCLS、ECCLS报告标准化：规定尿沉渣结果必须报 xxxx /ul 检测时间：2小时内完成检验检查内容：R

11、BC、WBC,管型,结晶,细菌,寄生虫（或虫卵）、真菌、精子、粘液等 尿沉渣检查应建立质量保证体系卫生部临检中心,中华医学会检验学会血液学与体液学检验专家委员会 (2002，广州)医疗机构临床实验室管理办法三级甲等医院临床实验室考核检查表（通用要求） 体液实验室应制定如下标准/程序并形成文件 （不仅限于如下标准/程序）：尿液常规分析是否全部显微镜检查，如无全部镜检应制定筛选标准（如流式分析检测结果出现异常计数、警示标志、异常散点图等情况时结果的确认方法和程序）。实现标准化的瓶颈标准化国际标准实验室管理办法专家建议三、复检规则的建立复检规则不是一个统一的规则，制定要根据不同医院的实际情况，不能把

12、别人的方案照抄过来。丛玉隆主任丛玉隆.尿液有形成分检查及镜检筛选标准的制定.中华检验医学杂志，2011,34(6):481-483.陈雨，程敏 等.自动化尿液干化学和有形成分分析复检规则的制定和应用.中华检验医学杂志，2011,34:501-506.马俊龙，丛玉隆，陆玉静 等.尿干化学于流式细胞术联合用于尿液有形成分镜检筛选的研究与应用.中华检验医学杂志，2011,34（6）:494-500.张娟安，王昌富，彭长华等.尿液整体化分析中镜检复查规则的建立与评估J.国际检验医学杂志:2011:32(3):324-326.丛玉隆主任采用分析参数：流式细胞仪（UF）：WBC、RBC、CAST干化学（U

13、RI）：LEU、BLD、PRO2839例样本64种组合分布28条无需镜检规则36条需要镜检的规则 建议复检UriAccess30中文报告及镜检规则运用软件丛玉隆主任通过2839例样本统计结果假阴性病例分析DAIJUN XIANG, YULONG CONG, CHENGBIN WANG. et al. Development of Microscopic Review Criteria by Comparison Urine Flow Cytometer, Strip and Manual Microscopic Examination. Clin. Lab. 2012;58：111-113.通

14、过检测1300份尿液标本，提出4个方案，其中第4个方案联合检测干化学URISYS 2400与UF-1000i尿液分析仪及报警提示建立的复检规则，假阴性率（0.54%）满足国际血液学复审协作组提出的保证患者检测结果安全性的最大可接受假阴性率（5%） ，同时复检率较低（29.15 %）。Sylvie Roggeman, MD, and Zahur Zaman, MD, PhD.Safely Reducing Manual Urine Microscopy Analyses by Combining Urine Flow Cytometer and Strip Results. Am J Clin

15、Pathol .2001;116:872-878如何建立一套适合自己实验室的筛选规则？ 尿液常规标本留取：1、留取晨尿或随机尿的中段尿；2、留尿前清洁尿道外口； 3、选用带盖子的尿杯或试管送检；4、留尿后2小时内完成检测；数据收集1、标本收集：随机连续抽取1000例尿液标本；2、在尿流水线上检测后全部做离心镜检，每例标本要在2个小时内完成检测。3、离心要求 ：400g的离心力下，水平离心5分钟。4、镜检人员要求：要由两位有资历的检验师做双盲法镜检，计数10个视野算均值，计算两人镜检结果的一致性，（可以计算Kappa值，当Kappa 值时表示一致性良好；当时表示高度一致；）符合要求后计算两位镜检

16、者的均值作为镜检结果。5、复检界限值（cutoff）确定方法：可以采用ROC曲线，选择灵敏度、特异性在最佳状态时的复检界限值；或依据镜检结果把漏检率、假阳性率、复检率控制在可接受范围内，干化学的阳性界限由试纸条厂家提供。 通过对收集的数据处理分析建立复检规则根据建立好的复检Cutoff値（临界值），对尿沉渣仪的红细胞、白细胞、管型，以及干化学分析仪的LEU、BLD、PRO进行阴性、阳性分类，然后做排列组合，生成复检规则。每条规则再与收集的标本结果对应组合，然后逐条去分析，依据患者信息等条件，找出需要复检的标本所触发的规则作为复检规则。规则调整：1. 规则调整原则：对所有需要复检的规则进行统计，

17、计算整套规则的复检率、漏检率、假阳性率、灵敏度、特异性来评价规则的适用性。2. 可以根据实验室对复检率和漏检率的要求对规则进行调整。 规则评价指标 通过计算灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、复检率来评价规则的适用性。1. 灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）；2. 特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）；3. 假阴性率=假阴性/标本总数；4. 假阳性率=假阳性/标本总数；5. 复检率=规则阳性标本数/总标本数。 我院采用AX-4280尿干化学分析仪和IQ200尿沉渣分析仪联合检测尿常规， IQ200尿沉渣分析仪为流式图像法尿有形成分分析仪，其结果经有经验工作人员进行人工修饰，对3068例标本进行显微镜镜检验证分析，结果如下： 通过分析，确定我实验室的显微镜复检标准为：对照IQ200尿沉渣分析仪图像结果和尿干