粗提取和鉴定

1、选修一专题五课题1DNA的粗提取和鉴定L1一.DNA的理化特性 DNA为白色纤维状固体，微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂。（用乙醇从溶液中沉淀核酸）L2二.RNA的理化特性RNA为白色粉末状固体，微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂。（用乙醇从溶液中沉淀核酸）L3在盐溶液中的溶解度比较DNA和RNA在细胞中常以核蛋白形式存在，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同。 DNA核蛋白 RNA核蛋白 0.14mol/LNaCl - + 1-2mol/LNaCl + -L4盐析(SaltingOut) 在蛋白质溶液中加入大量的中

2、性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的pH至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。三 蛋白质的盐析L5四 提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理和化学特性的生物大分子。筛选生物大分子L6五 .DNA的提取原理1和RNA和蛋白质等其他的生物大分子在不同浓度的NaCl溶液中溶解度

3、不同。通过改变NaCl溶液的浓度，将DNA析出或溶解，进而将之分离出来类比：微生物的筛选和分离通过添加或减少培养基的组成，有利于培养微生物的生长同时抑制其他微生物的生长。L7DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解特点高容低析过低溶L8DNA提取原理2不溶于酒精，而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。用95%的冷却酒精溶解蛋白质，而不溶解DNA，实现除去部分蛋白质杂质的目的。L9L10DNA的提取原理3蛋白酶，高温（60-80），洗涤剂等，会影响蛋白质，细胞膜等，但是不影响DNAL11L12总结：杂质的去除：1 盐析法通过改变盐溶液的浓度使其溶解或析出，分别除去析出或溶解的杂质。L13杂质的去除：2 酶

4、解法L14杂质的去除：3变性法加热至60-75C，可以使蛋白质变性而DNA保持稳定。L15六 DNA的鉴定原理沸水浴，遇二苯胺呈兰色L16对照组实验组L17七 实验流程析出和鉴定材料选取获得DNA滤液去杂质L18L19八 厨房式实验： DNA的提取选材：番石榴，白色洋葱，白萝卜等。用具和试剂：食盐，洗涤剂，冰冷95%酒精，蒸馏水，二苯胺溶液，0。2%的乙醛溶液，2M食盐溶液。研钵，小刀，滤纸，烧杯，试管，玻璃棒，三角架，石棉网，酒精灯，试管夹，火柴。L20问题思考洗涤剂的作用是什么？加食盐的作用是什么？冰冷酒精的作用是什么？需要设置对照实验吗？如何设置？L21实验步骤：取番石榴约1/4，加两药

5、勺食盐，约10毫升洗涤剂，在研钵中充分研磨，用滤纸过滤滤液至烧杯中。在烧杯中加入酒精，用玻璃棒将白色絮状物挑出，溶解到2M食盐溶液中。加二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟，冷却后观察溶液颜色变化。L22L23九 核酸的紫外吸收在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组分定性和定量测定的依据。L24巩固练习1.在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ） A 防止凝血 B. 加快DNA析出 C. 加快DNA溶解 D. 加速凝血 L25巩固练习 2.去除DNA杂质时，可直接在滤液中加入（ ），反应1015m

6、in嫩肉粉 B. 蒸馏水 C. 2mol/lNaCl D. 酒精 L26巩固练习例3 DNA在NaCl溶液中溶解度有二重性，随着NaCl溶液的变化而变化。（1）请在下列NaCl溶液中选出溶解度能使DNA析出最彻底的一种（ ）和溶解度最高的一种（ ）A. 0.14mol/l B. 2mol/l C. 0.15mol/l D. 0.3mol/l（2）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以_，可以推测溶于酒精中的物质可能有_。（3）利用DNA与_变蓝色的特性，将该物质作为鉴定_的试剂。其实验过程要点是向放有_的试管中加4ml的_。混合均匀后，将试管置于_5min

7、，待试管_，观察试管中溶液颜色的变化，这个实验也说明DNA耐_温。 L27巩固练习4 关于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面叙述中正确的时（ ）A. 随着NaCl溶液浓度的增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大B. 随着NaCl溶液浓度的减少，DNA在NaCl溶液中的溶解度也减少C. DNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无关当NaCl溶液的浓度为0.14mol/l时，DNA的溶解度最低 L28巩固练习5. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是（ ） A、氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B、人血也可代替鸡血进行实验 C、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D、DNA

8、不能溶于酒精 L29巩固练习6.在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是（ ）A. DNA溶解于水B. 血细胞破裂，DNA释放C. 稀释血液，防止凝固有利于搅拌 L30巩固练习 7若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是（ ）A. 利于DNA的溶解B. 分离DNA和蛋白质C. 溶解细胞膜D. 溶解蛋白质 L31巩固练习8 DNA不溶于（ ） A. NaCl溶液 B. KCl溶液 C. C2H5OH溶液 D. MgCl溶液 L32巩固练习9 如果在除去杂质时选择方案三，为什么要将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015min（ ）A. 使D

9、NA变性B. 使蛋白质变性C. 使DNA和蛋白质变性D. 分解蛋白质 L33巩固练习以花椰菜为实验材料进行DNA的粗提取实验： （1） 准备材料：将新鲜的花椰菜和体积分数为95的酒精溶液放入冰箱冷却24h。（2） 研磨细胞，获取含DNA的滤液：将花椰菜中加入一定的洗涤剂和食盐，进行成分的搅拌和研磨，过滤后收集滤液 加入洗涤剂的作用是什么？ 加入食盐的作用是什么？ 这一步是实验成功与否的关键，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 此步骤获得的滤液中可能会有哪些细胞成分？（3） 去除溶液中的杂质，也就是DNA的纯化 DNA的纯化利用了DNA的哪些特性？L34巩固练习 根据实际情况，写出你去除杂质的设计方案并写出方案依据的原理？（2） DNA的析出与鉴定 常温下的酒精溶液也可使DNA析出，可实验一般要求采用预冷的体积分数为95的酒精溶液，从理论上分析，冷却的酒精溶液有什么特点？ DNA鉴定的方法有哪些？L35巩固练习11下列操作中，对DNA的提取量影响较小