药物含量测定

1、关于药物的含量测定第一张，PPT共七十三页，创作于2022年6月第一节 概述药物的含量测定 评价药物质量的主要指标。运用化学、物理或生物化学的方法和技术，测定药物中主要有效成分的含量。定义第二张，PPT共七十三页，创作于2022年6月药物的含量测定化学、物理学、生物学方法方法 利用某些生物学特性或特殊反应来定性、定量化学反应如光吸收特性、浊度第三张，PPT共七十三页，创作于2022年6月药物的含量测定基于化学或物理学原理的含量测定。分两类基于生物学原理的效价测定。基础生物检定法，微生物检定法，酶法。目标含量测定。第四张，PPT共七十三页，创作于2022年6月含量方法要求化学原料药（API)：根

2、据药物的化学结构、理化性质等特点综合考虑适宜的含量测定法。选用的含量测定法应能准确测试有效成分的含量，其准确度和精密度均高。制剂：可能时应选用与原料药相同的测定方法，共存药物、辅料、附加剂有干扰时，可考虑增加预处理或改进方法,但专属性要强。第五张，PPT共七十三页，创作于2022年6月 含量表示方法（一）原料药含量的表示法原料药一般以百分含量表示，指样品中被测成分（一般为活性物质）的百分含量。一般按干燥品计算。药典凡例规定： “按干燥品（或无水物，或无溶剂）计算”时，除另有规定外，应取未经干燥（或未去水，或未去溶剂）的供试品进行试验，并将计算中的取用量按检查项下测得的干燥失重（或水分，或溶剂）

3、扣除。因此：含量%（干燥品计）=直接测得量（1-干燥失重）第六张，PPT共七十三页，创作于2022年6月（二）药物制剂含量的表示法一般以相当于标示量的百分数表示，指一个制剂单位中平均含有的药物成分为制剂标准的“规格”项规定量的百分数。如：对乙酰氨基酚片，规格0.5g，经含量测定测得平均每片含对乙酰氨基酚0.45g，则标示量为90%。第七张，PPT共七十三页，创作于2022年6月固体制剂含量测定结果的计算 %100%=标示量每片实测含量含量100平均片重=标示量供试品重测得量标示量平均片重供试品重测得量100第八张，PPT共七十三页，创作于2022年6月原料药制剂第九张，PPT共七十三页，创作于

4、2022年6月 物质的量 效价 生物学法（基于生物学原理） 药物含量测定方法化学法（基于化学原理） 容量分析法、重量分析仪器分析法（基于物理学原理） 光谱法、色谱法第十张，PPT共七十三页，创作于2022年6月具体方法容量分析法：包括重量分析法、滴定法（直接、间接滴定法）光谱分析法：UV、IR、色谱分析法：HPLC、GC第十一张，PPT共七十三页，创作于2022年6月第二节、容量分析法 为经典方法，原料药分析常采用。常产生滴定误差，如指示剂和仪器容量 特点：1、快速,准确（RSD103 ，n越大柱效高进样tRh0.5hWh/2Wt第四十三张，PPT共七十三页，创作于2022年6月7.分离度 R

5、2（tR2tR1）/（W1W2）R1.5 认为分离完全W1W2TR2-tR1第四十四张，PPT共七十三页，创作于2022年6月（二）基本原理 待分离物质在两相间进行分配时，在固定相中溶解度较小的组分，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定相中溶解度较大的组分，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。 依固定相与流动相极性的不同，分为正相色谱和反相色谱1.正相色谱法 流动相极性小于固定相一般用极性物质作固定相，非极性溶剂(如苯、正己烷等)作流动相，主要用于分离极性化合物，极性小的组分先流出，极性大的组分后流出。2.反相色谱法 流动相极性大于固定相一般用非极性物质作固定相，极性溶剂(如水、甲醇

6、、己腈等)作流动相，主要用于分离非极性或弱极性化合物，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。第四十五张，PPT共七十三页，创作于2022年6月（三）固定相和流动相1.固定相 常用化学键合相，分极性和非极性键合相，如十八烷基硅烷键合硅胶（C18或ODS）和辛基硅烷键合硅胶（C8）为最常用的非极性键合相，用于反相色谱法； 氨基和氰基硅烷键合相为常用的极性键合相，用于正相色谱法。2.流动相 有机溶剂+水混合一般为色谱纯试剂，经0.45um的微孔滤膜过滤，需脱气处理 第四十六张，PPT共七十三页，创作于2022年6月（四）仪器的基本结构 第四十七张，PPT共七十三页，创作于2022年6月1.色谱柱柱

7、管-不锈钢，填充硅胶和化学键合固定相 内径4.6mm长15cm、20cm和25cm的三种，如安捷伦色谱柱、 Waters色谱柱、迪马色谱柱等。 第四十八张，PPT共七十三页，创作于2022年6月2.检测器常用紫外检测器其次有二极管阵列检测器(DAD)荧光检测器示差折光检测器蒸发光散射检侧器电化学检测器和质谱检测器等 第四十九张，PPT共七十三页，创作于2022年6月（五） 系统适用性试验定义：指用规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。包括柱温、柱长、固定相、流动相；理论板数：说明分离过程，色谱柱的塔板数越多，柱效越高； 分离度：应大于1.5；重复性：相对标准偏差应不大于2.0%；等；第五

8、十张，PPT共七十三页，创作于2022年6月 （六）在杂质检查和含量测定中的应用 1.内标法（加校正因子）方法：内标物+对照品对照溶液，进样，测定，计算校正因子。RRssCACAf=校正因子CR对照品浓度As内标物峰面积CS内标物浓度AR对照品峰面积供试品+内标供试品溶液，进样，测定供试品和内标物质的峰面积或峰高，计算含量f= AS / CSAx /CxCx=f AxAS / CSCx样品浓度Ax样品峰面积第五十一张，PPT共七十三页，创作于2022年6月例.HPLC法测定盐酸阿夫唑嗪片（规格：5mg）的含量：取盐酸特拉唑嗪约20mg，称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，

9、得内标溶液。取盐酸阿夫唑嗪对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液，精密取该储备液1ml，置100ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液；另取本品20片，精密称定，研细，精密称细粉适量（约相当于阿夫唑嗪10mg），置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10ml，置100ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得样品溶液。分别精密取对照品溶液和样品溶液各20l注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算含量。第五十二张，PPT共七十三页，创作于20

10、22年6月操作：对照品取样为10.1mg，20片重为1.6020g，取样细粉称重158.2mg，测得对照品溶液中盐酸阿夫唑嗪和内标的峰面积分别为5470124和6126012，样品溶液中阿夫唑嗪和内标的峰面积分别为5219986和61198978，计算本品的含量。 第五十三张，PPT共七十三页，创作于2022年6月解：对照品浓度：0.0101mg/ml,内标浓度：0.01mg/mgf=(AS/CS)/(AR/CR)=(6126012/0.01)/(5470124/0.0101) =1.13 CX=fAX/(AS/CS)=1.135219986/(6119898/0.0100) =0.00973

11、5mg/ml=（0.00973510010/158.2)（1.6020/20）/5100%=98.58% 100平均片重=标示量供试品重测得量含量标示量平均片重供试品重测得量100第五十四张，PPT共七十三页，创作于2022年6月第五十五张，PPT共七十三页，创作于2022年6月例.HPLC法测定单硝酸异山梨酯注射液（规格：5ml:20mg）的含量：取间三甲氧基苯约20mg，称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得内标溶液。取单硝酸异山梨酯对照品约8mg，精密称定，置100ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20l注入液相色谱仪，记录色谱图；

12、另取本品2ml，同法测定，按内标法以峰面积计算含量。已知：对照品取样为8.1mg，测得对照品溶液中单硝酸异山梨酯和内标的峰面积分别为5467824和6125843，样品溶液中单硝酸异山梨酯和内标的峰面积分别为5221345和6122845，计算本品的含量。第五十六张，PPT共七十三页，创作于2022年6月解：f=(AS/CS)/( AR/CR)=(6125843/0.01)/(5467824/0.081)=9.07 CX=fAX/(AS/CS)=9.075221345/(6122845/0.01)=0.07735mg/ml 100装量=标示量取样量测得量含量标示量装量取样量测得量100=(0.

13、7735100/5)2/20100%=96.68%第五十七张，PPT共七十三页，创作于2022年6月2.外标法对照液（R）： AR CR 供试液（X）： AX CXCX CRAX ARCXCR AXAR要求：进样量准确、操作条件稳定第五十八张，PPT共七十三页，创作于2022年6月A总=Ai=A1+A2+An (%)=Ai / A总100% 例题7 用气相色谱法检查大豆油的脂肪酸组成，相应于棕榈酸、硬酯酸、油酸、亚油酸和亚麻酸的峰面积分别为129758、43286、296522、654868、92570，按峰面积归一化法，计算上述脂肪酸的百分含量。 3、面积归一化法第五十九张，PPT共七十三页

14、，创作于2022年6月二、气相色谱法1.分离原理注入进样口的样品经加热气化后，被载气带入色谱柱，由于其分配系数的不同进行分离，各组分先后进入检测器，信号记录仪、积分仪和数据处理系统记录色谱信号。分配系数小的组分先流出，分配系数大的组分后流出。第六十张，PPT共七十三页，创作于2022年6月2.色谱仪的基本结构由载气源、进样器、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成 第六十一张，PPT共七十三页，创作于2022年6月.载气（流动相）： 如氦、氮和氢等 .进样器：直接进样或顶空进样 微量注射器第六十二张，PPT共七十三页，创作于2022年6月. 固定相和载体 色谱柱为填充柱或毛细管柱 常用的固定

15、液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。毛细管柱填充柱第六十三张，PPT共七十三页，创作于2022年6月. 检测器 火焰离子化检测器（FID)、热导检测器(TCD)、氮磷检测器（NPD)、火焰光度检测器(FPD)、电子捕获检测器(ECD)、质谱检测器(MS) .色谱系统适用性和含量测定中的应用同高效液相色谱法第六十四张，PPT共七十三页，创作于2022年6月第五节 药品含量测定方法验证 1 专属性 2 线性及其范围 3 精密度 4 准确度 5 检测限 6 定量限 7 耐用性第六十五张，PPT共七十三页，创作于2022年6月一、专属性(Specificity) 指有其他成分

16、（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。 分析复杂样品混合物时衡量其是否受到干扰的一种方法。A- 对照品B- 样 品C- 阴 性第六十六张，PPT共七十三页，创作于2022年6月二、线性与范围(Linearity And Range)线性：在设计的范围内，测试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。 Y=a+bx （r0.999) 范围：达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。eg.原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的80%120%；制剂含量均匀度检查，范围应为测试浓度的70%130%，根据剂型特点，如气雾剂、喷雾剂，范围可适当

17、放宽；溶出度或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的20%第六十七张，PPT共七十三页，创作于2022年6月1、定义：在规定的测试条件下,同一个均匀样品经多次测定所得结果彼此符合程度。三、精密度2、表示方法： 偏差（d）： 标准偏差(SD): 相对标准偏差(RSD):第六十八张，PPT共七十三页，创作于2022年6月重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度至少用9次测定结果评价：制备三个不同浓度样品，每一浓度样品测三次。中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度目的：考察随机变动因素的影响，如日期、分析人员重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验，结果应记载在起草说明中。第六十九张，PPT共七十三页，创作于2022年6月四、准确度1、定义：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。2、测定法：用百分回收率（R）表示，测定回 收率的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法” 第七十张，PPT共七十三页，创作于2022年6月（1）回收试验法 空白B+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。R = 测得量加入量100%（2）