主要组织相容性复合物10

1、第六章主要组织相容性复合物主要组织相容性复合物，是表达于脊推动物有核细胞表面的一类具有高度多态性、含有多个基因座位，并紧密连锁的基因群。这些基因表达的蛋白就是主要组织相容性抗原。最初是从小鼠中发现的，年等在用经典遗传学方法分析肿瘤和其他组织移植引起的排斥现象时发现，机体识别某一移植物是自身的还是非自身的现象是有其遗传基础的。让同一代小鼠自交，可以得到纯系，在大约代以后，每一个个体的染色体的等位基因都相同，即纯合子。每一自交品系只表达亲代群体中的一类等位基因，不同的自交品系表达不同类的等位基因，即不同自交系个体之间是同种异型t发现自身或同一自交系中的个体间进行皮肤移植，不出现排斥现象，称为自体移

2、植或同系移植。当不同的自交系个体之间进行皮肤移植，即同种异型移植，则出现排斥现象。负责识别某一组织是同源的并予以接受是，外来的则加以排斥的基因被称为组织相容性抗原基因，表达这些抗原的基因就是组织相容性复合物。等鉴定出小鼠的一个遗传区域能导致快速排斥，是编码一种称为多态性血型抗原II的基因，也被称作主要组织相容性一基因，简称一。后来于年在人的白细胞上发现了与小鼠一具有同样功能的人类白细胞抗原e。和因而于年获得诺贝尔奖。研究表明脊椎动物都具有主要组织相容性复合物，但各种动物的名称都不一样，表一列出了一些常见动物的名称。表6-1不同动物种的名称种MHC名称小鼠H2(histocompatibilit

3、ysystem!)大鼠RTl(AB)人类HLA(humanleukocyteantigens)兔RLA(rabbitleukocyteantigens)豚鼠GPLA(guineapigleukocyteantigens)家猪SLA(susdometicusleukocyteantigens)猴RhLA(rhesusmacaqueleukocyteantigens)最初是因免疫移植排斥现象而被发现，但是它对免疫应答所起的重要作用是在研究小鼠和豚鼠对合成的多肽抗原免疫应答强度影响时发现的。进一步研究表明，在抗原递呈和免疫应答调控方面具有极为重要的功能。由于群体中不同个体之间存在高度多态性不同个体对

4、抗原的免疫应答强度和能力也存在一定的差异，因而在对疾病的易感性和抗性也有所不同。被认为是一组重要的免疫应答基因s由于具有高度多态性特点.近年来的研究显示定型及多态性分析与器官移植配型及移植成功率合关。又是法医个体识别的性差异.以及免疫应：答效应的的差异。忻本节A世赳罔：H响祀专一、第一类主要组织相容性抗原（一I）分子i类分子的基本结构完整的一类分子含有两条多肽链：一条是a链，又称重链，人的一I类分子的a链相对分子质量约x小鼠约x0另一条称p链，又称p微球蛋白pIpu相对分子质量约x是由非基因编码。一类分子a链有一个寡糖基连接位点，而小鼠有个。a链有个主要的结构域，即a端、a、a、跨膜区及胞质区

5、（被端），总长约36个7氨基酸残基左右。其中a1、a2、a3各含约9个氨基酸残基，跨膜区约个残基，胞质区约个残基。在a与跨膜区之间含有木瓜蛋白酶剪切位点。等使用木瓜蛋白酶剪切一I类抗原分子得到细胞外部分的分子结晶，并用于射线衍射晶象分析得到分子构象图图一。a、a形成与抗原肽结合的区域，a和a分别形成和约个残基的二硫键连接的环。由于a和p与免疫球蛋白恒定区氨基酸顺序同源，所以共同构成样区图一。与该区域以非共价键（次级键）相联系的P微球蛋白（P）约个氨基酸残基，对稳定以分子空间构象有重要意义。在胞质区近羧基端含有潜在的磷酸化位点，这与细胞内信号传递有关。胞浆内区（约90个残基）木瓜蛋白醃匚约為个残

6、基_-.LLLLL_rrrJIJJJ_J1S.S.1（约和个残基）艙结合区糖基化位点Ig样区（约100个残基）穿膜结2类a和a行的p片层。其中构由a区肽成的结合槽表残基的肽段。肽才能与I类分子结合决定区区最为多样性而和结合。a图为T的HC和P类分子结构域示意圈合。抗原表肽内图硫键；叫叱心:代表相应第三三个结互域域；觥代表血橄球脊所识Z别。a和p链口yI类分子肽结合槽两边的a螺旋则与细胞受体的的样区与细胞毒细胞或称杀伤性细胞,的的共受体一结合。这与一类分子参与肽抗原介导的对靶细胞裂解杀伤作用相关图一。0与aia及a区相互作用，对维持一类分子膜外正常的空间构象具有重要作用。0分子不是由基因编码的。

7、人的0基因定位于一，小鼠在第号染色体上。0全长约含个氨基酸残基，含一个链内二硫键由第和位的两个半胱氨酸构成。氨基酸序列以上与的恒定区相似，所以也是免疫球蛋白超家族，成员之一。由于0分子较小，血清蛋白电泳位置处于02区，故得名。当肾在重吸收功能下降时（如肾炎、肾移植等肾功能损害时，尿中可检测到0员在a链的跨膜区由约个疏水氨基酸残基构成而在胞质区近羧基端有许多磷酸化位点如果去掉羧基端的这一部分，则会抑制一类分子的内部化，说明羧端还与一分子胞内流动有关。?m抗原肮TCRMllC-Ig-MHC-1图6-3MHC-I类分子与拉原駄及I细胞受体形成三元体复合物向化细胞递呈、抗原信息第二类主要、才一兀APC

8、j抗原递恳塑胞;TCR：T细胞抗原受体:Tr；-一H细分薜性T细施II类分子是田两条非共价键相联的多肽链构成的：一条链长约个氨基酸残基左右，另一条0链长度也在23个0氨基酸残基左右。两条链结构非常相似图一。a链相对分子质量约为.x.x，0链相对分子质量约为x3x0a链较p链重，主要由于a链有两个连接的糖基化基团，而p链仅有一个。每条链都分个区，如a链由、a、跨膜区和胞质区构成。p链则由p1、p2、跨膜区和胞质区构成。a1、a2、P及P区各由约个氨基酸残基构成，其中p、p、a各含有一个链内二硫键。一II类分子的a和p区共同构成与抗原肽结合的结构域-，与一类分子的a、a区构成的肽结合区很相似，但I

9、I类分子是由两条链构成图一。I、氨基酸残基以上的肽段可以突出到结合槽以外。一i类进行分别由构成a原肽结合。分子结合抗原肽后，其肽表位与细胞受体的结合，而II类分子肽结合槽两边的a螺旋则分别与的和结合，形成对细胞的约束。a和p区序列较为保守，与恒定区同源，称样区。II类分子的该区域与细胞表面的分子结合。是的共受体.是辅助性细胞特征性表面标记分子。因此一II类分子具有与辅助性细胞结合及抗原信号传递的限制性。分子这些不同的特异性识别是发挥免疫功能的分子基础。，三、肽与分子结合的结构基础肽与分子是非共价键结合，两者相互作用的解离常数约为-/1是可达到饱和的，结合速度慢解离速度更慢。肽和之间的亲和力较抗

10、原与抗体之间的亲和力低得多。抗原与抗体相互作用的解离常数为-/L肽与一II类分子达到饱和结合需。一旦结合，二者可保持结合状态几小时，甚至几周时间。一类分子与肽的解离速度很慢，有时甚至需要破坏P与a链的联系才能将肽分开。这种相对稳定的构象进一步保证了与细胞的相互作用。每一个分子在同一时间里只能与一个肽结合，多种不同的肽可以与同样的分子结合。某一种肽与复合物被细胞识别的功能可因加入另一种结构相似的肽面板抑制。细胞识别肽复合物是高度特异的。不同肽与同一种结合就可以形成不同的表位，可与不同的细胞结合。因而能够识别这些抗原表位的细胞受体也有多种多样，每种只识别某种特定的与结合的抗原肽。抗原的种类成千上万

11、，也决定了体内及其相伴随的细胞克隆也有成千上万种。这就构成了在同一个体内，不同细胞之间的基因及其表型的高度多样性rI分子结合的肽通常为氨基酸，而一II类分子结合的肽为一氨基酸甚至更长，并不影响其抗原递呈效果。经过对不同类分子结合槽中的肽以酸洗脱，以高效液相层析分离纯化，并进行肽序列分析。结果发现它们有一些共同的结构特征，如与I分子结合的肽段内，某个位点和羧基端常有相同或性质相似的残基图。这些残基是肽与某种分子相生作用的“锚定残基”d分子近氨基端与肽结合的结构域中，序列的差异导致了对抗原肽结合的特异性也有所不同。序列的差异也就是构成分子多态性的分子基础。分子的多态性不仅影响与肽结合的特异性，也影

12、响肽一复合物与细胞结合的特异性。的主要功能将抗原肽递呈纪细胞受体，在免疫应答中起关键性作用。具体的有关这些信号传递及其产生效应时的过程将在第八章章讨论。MHC-la囤E0SraffllZIEELljyjc5g国卫卫回应mEcudE圈rammraramEmmra画ssniEmEEramraMIIC-JESSSQQQrDjQSQSSrasrau:i3ssralirassraLRimraraas根据多个不同子有、在每一个、许体细胞中卫二节电要组织相容性抗抗原基因构及遗传回卫CHC为DR、MH要基因1座位，同的子:有D、D、DP等主匚几个内因座代位。I地酸处圧仪鬥XJ阴影框内为口MHC结介的锚定位也图

13、座位从不同的同时在抗原细合槽中洗下来的肽序列分析结果是复等位亠因共显性中洗，所以在同，体细胞中、面可存在多种不问的C子。一、的遗传及多态性单1元型在每一个个体、每一个基因座位上都有两种可能的基因型和中型，当然可以是相同的，也可以是不同的。由于基因位于同一条染色体上，其多基因座位上的基因型组合相对稳定，很少发生同源染色体间交换，这就构成了以单元型，也称单倍型为特征的遗传。同一条染色体上紧密连锁的一系列等位基因的特殊组合，称为单元型。例如某一个体两条染色体的单元型可能是和，这两个单元型基因存在于同一个体的体细胞中。共同组成该个体的基因型。由于是共显性发达，所以个体的表型和基因型相同，也为。.连锁不

14、平衡及单元型遗传各基因并非完全随机地组成单元型，某些基因常紧密的连锁在一起、而另一些则不常连锁在一起，这就呈现出连锁不平衡l例如：在汉族人群中的基因频率为，的基因频率为，如果、基因座位上的基因随机组合，则和基因组成的单元型预期频率应该符合一平衡定律。一单元型理论上频率应该为x，但是实际观察值为。这说明一和一基因之间存在着连锁不平衡，两个数值相差一二。这个数值被称为连锁不平衡参数，用表示。对于一个随机婚配的群体来说，认识和了解连锁不平衡参数，具有一定的实际应用价值。在选择器官移植供体时可对单元型进行推算。如已知基因型则根据单元型连锁关系可以推测的可能型别。这些紧密连锁的单元型各基因通常很少发生交

15、换，并成簇地传递给下一代，形成了以单元型为特征的遗传。.基因的多态性是目前发现的最具多态性的紧密连锁的基因群，存在于所有脊椎动物的基因组。编码的分子主要分为类，即I类分子，II类分子和III类分子。每一类基因都有许多基因座位。如人的一类基因就有等基因座位。II类基因至少有个基因座位，主要基因座位有、等，每个座位又有许多等位基因，如人类仅、座位就已经发现至少有如如个等位基因。这仅是对人类部分群体的初步调查分析结果。人群中基因虽具有高度多态性，但每个人对每个基因座位上最多取用两种等位基因。这两个等位基因可能相同也可能不同。由干基因座位较多，而每一种基因座位又有多种取用的可能性，因此这种多座位及其不

16、同等位基因的组合，可以形成群体中数以百万计的基因型和表型。不同的个体，我们甚至存几万个个体中找不到一对基因型和表型完全相同的人。这种高度多态性的基因群的形成是也长期进化过程中基因突变和环境中多样性抗原的选择压力下形成的。已经发现人的的某些基因型与一些疾病易感性有关，而另一些基因型与某些疾病的抗性有关。例如：-II类的*基因与类风湿关节炎易感性成正相关，该基因携带者明显易患类风湿性关节炎，但是*基因携带者却对该病有抗性。由于分子是抗原递呈和免疫应答中的重要分子，环境致病因子抗原的高度多样性及其区域分布的差异性对脊椎动物群体形成了选择压力，从而产生高度多态性，因此也形成了对环境的多种适应性。这对群

17、体进化中种的保存具有重要意义。二、小鼠一基因结构小鼠是常用的实验动物，所有我们应该对小鼠的（即一）结构有一定了解。年，首先把小鼠与组织移植排斥有关的抗原命名为组织相容性抗原，编码这些抗原的基因称为组织相容性基因（）,即基因。由于在先前的研究中发现小鼠血型抗原主要有I、II、III、W型，而II型被证实就是组织相容型抗原，其基因就是一。后来通过进一步研究确定一基因与已知的位于第号染色体断臂上控制鼠尾的-基因连锁（为有尾，为无尾）。证明一基因定位于号染色体断臂上,约长，由个主要区域组成，即、I、（图一）。其中区又可分为两个亚区（），即和。在每个区或亚区内又有许多基因座位（）u区有一和一两个基因座位

18、。一亚区有a和0两个基因座位。一亚区含a和0两个基因座位。区有个基因座位。从基因类别来说，和为一I类基因，区为II类基因，区为III类基因，主要编码补体，、因子（f性限制蛋白（）、肿瘤坏死因子（）等。现重组。这种重组交换可以发生在染色体任何位置。可以用不同单元型的鼠之间交配繁殖，以分析其重组交换值。各基因座位之间重组可能产生新的单元型。l-AMMHC-ID7着丝粒大纟这些连锁I的各等位基因共同构成小鼠I的单元型。单元型位于条染色体上，并给予一个代号，例如：小鼠的单元型是一，鼠的单元型是一（表一）。了解单元型对研究的结构和功能很有帮助。图6-6小鼠主要纽织相容性复合物（H-2）结构示意图单元型。

19、单元型位于小鼠的长度约厘0摩。不同基因型可出表6-2实验中常用的同系小鼠的单元型鼠系名单元型H-2各等位基因kaesiC57BL/6;C57BL/10bbb-b:BALB/C;DBA/2dddd(1.AKR;CBA；C3Hkkkkk:SWRqqqqq1SJLss9-S人的又称基因，位于第六号染色体短臂上，长约相当于大肠杆菌整个基因组的长度）。在经典遗传学中，这么长的基因片段相当于c这意味着个体之间的杂交有以上的重组率。基因有几十个基因座位图一。按结构功能和组织分布情况不同分为类：.类基因在远离着丝点约一的范围内，经典的I类分子基因有、基因座位，每个基因座位又有几十个以上的等位基因，见表一和图一

20、。在类区还发现、等基因座位，称为类样基因I:它们编码一分子，这些分子也是可以与P微球蛋白结合的膜蛋白，确切的功能尚在研究之中。II类基因在近着丝点的范围内，经典II类分子主要有、等基因座位。由于II类分子是由两条链a、0链编码。每条链又有多个基因座位，女如编码分子a链，有和、编码分子0链，又有和、这些基因每个座位又可能有许多等位基因表一。一II类分子由a链和0链组成的异二聚体。a链基因有4个外显子构成，0链基因由6个外显子构成。一II类基因具有高度多态性图一，这些多态性的产生主要由第二个外显子编码的a或0区氨基酸序列差异性所决定的。HLA-1类基因位實图HLA-11类基因位實應DMADBlDP

21、ADPR7LMP2MBTAPILMP7D0JB2DDRB：DPR11HLA-I类区域HLA-n区域HLA-IB类区域HLA-AHLA-DRC2BdrbiC4ACDRB2C4BEDRB3BfFDRB4GDRR5HDRB6JDRB7DRB8DRB9HM-DQAlDQA2DQB1DQR2DQB3DOBDMADMBDNAHIA-DPA1DPA2DPB1DPB2DMAR表6-3HLA区域中的基因位点212处理和ABCD(tDRpDQ(XSQODPnHrot类HLA-H癸图e-与类基主哽基因座位的等位基因多态件统汁性抗丿蛋白的功能与和I类基因都高度相关。数立界1人基主递呈岀的等而皋悯数是胞质非糖基化蛋白，

22、相对分子质量很大，为.X组成的一个形似长筒状的复合物。每条多肽链亚基相对分子质量约为XX0是真核细胞中普遍存在的蛋白酶体。这种蛋白酶体有非溶酶体降解蛋白作用，也称多催化活性蛋白酶复合物。它是一巨大胞内的蛋白酶，是由一II类区和基因编码的。基因的开放阅读框编码一个长氨基酸残基的蛋白产物。编码的蛋白质有个残基。内源性抗原指胞质内合成的蛋白抗原、经过降解成肽段通常为一肽后，不具有信号肽结构。这种肽段要进入内质网与新合成一类分子结合需要在的帮助下才能完成。一类分子只有与抗原肽结合后才能表达于细胞表面，将抗原肽递呈给淋巴细胞，诱发特异性免疫应答。有一种基因突变的细胞瘤的细胞株,其表面则不能表达一类分子。

23、而属于一超基因家族成员、是位于内质网上的膜蛋白。它以和异二聚体形式发挥作用。目前已确认的至少有种基因型，至少有种基因型。因此至少有种表型。的长约2k约个氨基酸残基,则有长链型约个残基和短链型个残基两类。不同的表型对同一种抗原肽的亲和力可能不一样，并表现出对不同抗原免疫应答强弱的差异。Hl类基因在第六号染色体近着丝点一范围内，位于类基因和II类基因之间。该区域内发现有基因座位60多个，部分基因功能已经清楚，但仍有相当部分在研究之中。已发现的基因有补体、见第四章、肿瘤坏死因子基因、淋巴毒素、羟化酶一、基因和热体克蛋白基因，。就目前研究结果看Hi类区基因在免疫应答和调控中也起着相当重要的作用，值得深

24、入研究。四、的发现及基因的命名年在多次输过血病人体内检出含白细胞抗体的血清。他所试的27份这种血清样本中行20份样本几乎能与所有的供血者的白细胞发生凝集反应，另外7份样本只能与大约60的法国人的白细胞反应，而不能与这7位病人自身的白细胞起凝集反应。他把这份血清中的抗体称为抗体。当抗原阴性的病人接受抗原输血后便诱发产生抗抗体。家系调查中表明抗原酌遗传遵守孟德尔定律。这就是首次发现人的白细胞抗原，后来命名为抗原。年友倡导下，举行了第一届国际组织相容性专题讨论会，。在年第三届后，在世界卫生组织（）的支持下，成立了命名委员会。对特异性命名，通常在基因座位后加上数字，数字代表不同等位甚因，女口：2一12

25、等。的定型以往主要有血清学和细胞学方法。有些座位所用的定型方法很局限，且仅在小范围内异体等位基因抗血清定型发现的，这些仍需要进一步鉴定，则常在座位名后加一个小写，如：w,等。命名委员会的任务是根据研究的不断进展，确定新发现的座位和等位基因命名，并修订和补充原来的命名。19年第十一届国际专题讨论会，第一次引用了分型，女如聚合酶链反应t分型技术，序列特异性寡核苷酸探针l杂交分型技术，以及测序分型技术，使分型进入核酸的基因密码分析水平。较以往的以分析蛋白质和细胞功能的免疫学方法为主的分型技术前进了大步，分型相对更准确可靠。基因型的确定由于序列的分析已经相当精确，每个座位每个型的特TOC o 1-5

26、h z异性通常又有许多等位基因，如一I类等位基因命名*0*、*,这表示“座位名/*型特异性/等位基因序号”一II类基因由于有编码a链和p链之分，所以基因命名与类不同，在基因座位名上要注明a链或p链。有时编码a链或p链各有几个基因座位，则分别以序号缀后，女如:*，*，,*,*等。这些通过都可以检索到序列和蛋白质序列。III类抗原主要是一些可溶性分子，其分型不同于一1、II类抗原，是由补体遗传专题讨论会，命名的。,第三节的检测原理及应用的检测包括表型检测和基因型检测。对及其表达产物,的检测无论是对临床分析和实际应用，还是免疫遗传学研究都具有重要价值。2世纪年代前对的检测是以血清学和细胞学方法为基础

27、的表型分析为主，这些经典方法检测准,确性和重复性常令人不太满意。由于是共显性基因，基因型通常与表型是一致的假基因例外，所以近十几年来血清学和细胞学方法有被水平上的基因定型方法取代的趋势。基因定型方法在准确性和重复性方面都较好。下面以为例介绍分型技术及其应用。一、一类抗原的检测I类抗原、基因座位上的检测，国际上常规使用补体依赖的微量淋巴细胞毒试验，。它是依据型特异性抗体介导的补体系统对靶细胞溶解的原理进行的。试验必须有抗标准血清抗体）这些标难分型血清中抗体与待检淋巴细胞上相应的结合，使抗体分子的空间构象改变面暴露补体结合部位，此时加入的补体（通常是兔补体，被活化使淋巴细胞膜上形成孔道面导致细胞死

28、亡。随后加人细胞染液，如伊红或台盼蓝，受损或死亡的细胞可被染色，即为细胞毒阳性，说明待检个体的抗原型类与已知标准血清型一致。如果细胞未受损，活的细胞不被染色，则为阴性，说明型别与标准血清不一致。,这,种方法常遇到的问题是标准血清来源困难及是否标准的问题。这些血清多取自经产妇或接受标准抗原免疫的志愿者血清。二、一II类抗原的检测II类抗原的、分型方法与类基本相同。不同的是由于II类抗原主要表达于细胞从各种抗原递呈细胞，如巨噬细胞等。因此在检测时首先要分离这些细胞，一般都用分离的细胞。但由于类抗原表达于所有的有核细胞，所以细胞表面除有II类抗原外，还有类、抗原。在检测时所用的标准II类、分型血清，

29、必须先用多个个体血小板混合物吸收除去类抗体。其余操作方法与类相同。对和特异性进行检测不能用上述法，要用细胞学方法分型。方法的原理基于混合淋巴细胞反应，。同种异体淋巴细胞的一P抗原不同时，将两种淋巴细胞混合培养，将会刺激对方细胞发生分裂增殖反应，通过检测淋巴细胞增殖的程度来了解两者抗原同源性程度。实际操作中常采用单向方法和预致敏淋巴细胞分型法t.单向将已知型别的标准定型细胞通常为纯合子分型细胞，g事先以丝裂霉素处理或经强度的射线照射处理，使标准细胞失去增殖能力，但仍保持完整的细胞形态和抗原性。以此处理过的标准细胞与待检淋巴细胞混合培养一，在终止前一h加一氚标胸腺嘧啶核苷）收集细胞，以液体闪烁计数

30、仪测定同位素掺入情况数。以处理过的标准细胞与其自身细胞做同样的细胞混合试验为对照，计算出刺激指数。实验组对照组当I时为阴性，表明二者一或型相向。同胞兄妹中呈这种阴性反应的为理想的移植供体。如果有一个单元型不一致的同胞兄抹，建议的极限值可达0大于此值则不能用于器官移植供体。个单元型完全不一致的非亲缘关系个体之间值可达以上。此外，也有人用相对应答为指标来表示型别差异的情况。.预致敏淋巴细胞分型法单向法操作时间太长，而且标准细胞来源困难，于是发明了分型法。该法原理是将标准细胞与另一不相关个体淋巴细胞作单向法培养，时间延长到一4反应细胞的分裂增殖逐渐停止，而出现形态上静止的小淋巴记忆细胞，称之为处理细

31、胞。这种细胞就是预致敏淋巴细胞。这种细胞可以进行冻存备用。当这种细胞再次与第一次培养时相同的抗原细胞共培养时，则迅速出现二次反应。即可表现快速增殖，可以节省大量时间和标准细胞。结果的分析也用一掺入法，但以阳性结果定为与型别相同有人称之为“阳性分型法”。而单向定型法是以阴性结果表明与型别相同又称为“阴性定型法”）三、基因定型法年第届国际专题讨论会上提出了的分型方法，这类方法近年来在研究和实际应用方面发展非常快，有取代其他方法的趋势。.限制性内切酶酶切片段长度多态性检测法不同的基因型的碱基序列是不同的，这些不同的序列可能被不同的限制性内切酶识别，则形成不同长度的酶切片段。在酶切后电泳并以相应的基因

32、探针杂交，与标准基因型对照，即可得知检测的结果。以往常采用白细胞基因组直接酶切并杂交分析，但因基因组太大，太复杂，酶切位点或是太多而使片段混杂或是太少不能精确区分，而且必须要与标记的探针杂交分析相结合才能完成这种方法，实际应用时太繁琐。近年来，由于聚合酶链反应技术的应用，使方法有了较大进展。目前发展起来的一分型法是一个简便快速的分型方法。首先在要分型的基因两端保守区选择设计一对或几对引物，然后以扩增该区段的，得到等长的扩增片段。再选择适当的限制性内切酶对该片段酶切，得到不同长度的片段，电泳就可直接观察到不同的条带类型。从已知序列即可推测该个体的基因型。如果格局与已知的不一致，则可能是一种新的等

33、位基因。同.或一法是方法与等位基因特异性寡核苷酸，探针或顺序特异性寡核苷酸，探针杂交法。先以扩增待分析的基因片段，扩增的产物点样固定于尼龙膜或硝酸纤维膜），然后以同位素或非放射件标记的探针与之杂交，根据阳性斑点判断个体基因型。出了等位基因非常多，就需要很多的探针对每个样品要进行多次杂交（甚至十几次）才能完成定型分析，操作也十分繁琐。于是在此基础上发展起来一种反向杂交法h将各种不向的探针固定于同一张膜上，再将产物标记，以产物待检测基因反过来与探针杂交。这样做的好处是只要进行一次杂交，即可完成多个等位基因分析，但不同探计的杂交条件的统一非常重要（如温度，离子强度等）。即产物自接测序法以扩增所要分析

34、的基因片段，然后，直接对进行序列分析，可以直接得到基因型别。近年来由于测序仪的自动化程度不断提高，大大的方便了的基因分型。四、检测的应用的分型和检测对人类免疫遗传学研究非常重要，对了解人类各民族起源和迁徙及临床医学实践和法医学个体识别都非常重要。实际应用中主要有以下几方面：器1官移植配型同种异体器官移植时，供体与受体之间不同，则会产生排斥反应。因而需要在人群中通过配型来选择供体。同卵双生的同胞之间型完全相同，移植物可以长期存活。在家庭内选择供器官者，两者通常会有一个单元型相同，排斥反应就会较无亲缘关系的供体弱。在具有多个供体可供选供的情况下，通过定型分析可以选择最人程度相配者，即同源性最高者。有关问题我们将在后面讨论见第十章）.与疾病易感性的关系早在世纪年代后湖，人们就注意到与某些免疫性疾病相关，如以上的强直性脊椎炎患者带有一抗原，而正常人携带者只有%左右。类风湿性关节炎病人基因携带为7,而正常人只有中国人群）世界各国学者大约对多种疾病进行了关联分析，巳发现有多种疾病上数病因和机理痪購的某种性常用险病ii.sk其：直直