高效课堂同步课件：5专题整合《DNA的蛋白质技术》（选修1）

1、专 题 整 合提取DNA利用的是DNA、RNA、蛋白质和脂质的理化性质的差异。具体地说，DNA与其他物质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，再通过冷酒精进一步去除其他杂质。另外DNA对高温和洗涤剂的耐受性较高，不易被破坏。鉴定时可采用二苯胺试剂沸水浴加热呈蓝色来判断DNA的存在。DNA与蛋白质的提取 提取与分离蛋白质是根据蛋白质的分子形状和大小，所带电荷的性质和多少，溶解度、吸附性质以及对其他分子的亲和力等理化性质，将不同种类的蛋白质分离开。凝胶色谱法可以将相对分子质量不同的蛋白质有效分离。DNA与蛋白质的提取技术比较电泳法可将带有不同电荷的蛋白质分离。DNA血红蛋白材料选取鸡血细胞等DNA

2、含量相对较高的生物组织哺乳动物的成熟红细胞细胞破碎加蒸馏水、加洗涤剂和食盐搅拌、研磨加蒸馏水和甲苯充分搅拌去除杂质用不同浓度的NaCl溶液处理用酒精溶液处理用蛋白酶处理透析处理纯化处理鉴定加入二苯胺，沸水浴SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量PCR技术与凝胶色谱法的比较 PCR凝胶色谱法过程变性：90 以上高温解旋复性：50 左右引物与单链结合延伸：72 合成子链凝胶色谱柱的制作装填：凝胶装填均匀，无气泡纯化酶需要热稳定性高的TaqDNA聚合酶不需要酶温度高温常温DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较 试剂质量浓度用途原理NaCl溶液2 mol/L溶解DNADNA在NaCl

3、溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在质量浓度为2 mol/L时最大、在质量浓度为0.14 mol/L时最小0.14mol/L析出DNA2 mol/L鉴定时的溶剂酒精95%(体积分数)除去杂质以提纯DNADNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精二苯胺/鉴定剂DNA遇二苯胺(沸水浴)会变蓝色柠檬酸钠0.03 g/mL抗凝剂除去血液中的钙离子，防止血液凝固【典例1】 下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是()。试剂操作作用A柠檬酸钠与鸡血混合溶解细胞中DNAB蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馏水加入到溶解有DNA的NaCl溶液中析出DN

4、A丝状物D冷却的酒精加入到过滤后含DNA的NaCl溶液中产生特定的颜色反应解析在DNA的粗提取与鉴定实验中，柠檬酸钠可以防止血液凝固；鸡血中加入蒸馏水可以使细胞膜和核膜破裂；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在质量浓度为0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低，有利于DNA析出；DNA不溶于酒精，可以获得较纯的DNA；DNA遇二苯胺(水浴加热)产生蓝色反应。答案C(1)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。(2)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。(3)所有的成分都加入后

5、，盖严离心管的盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。PCR技术操作注意事项 (4)PCR实验中应注意各种反应成分的用量，用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等，均有可能导致DNA片段扩增的失败。(5)PCR扩增的是位于两种引物之间的DNA片段，合理设计引物是PCR成功的关键。【典例2】 PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是()。A反复洗涤B用酒精擦洗C高压灭菌 D在20 储存解析为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小

6、份，并在20 储存。使用前，将所需的试剂从冰箱内拿出，放在冰块上缓慢融化。答案C 【例1】 (2011广东理综，5)下列关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是()。A洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂B猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢解析猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，

7、然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速度较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。故D不正确。答案D【例2】 (江苏高考)下列叙述中错误的是()。A改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出B在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色C用电泳法可分离带电性质、分子大小和形状不同的蛋白质D用透析法可去除蛋白质样品中的小分子物质解析提取DNA的原理，是DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同。DNA在质量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，因此如果将NaCl浓度调至质量浓度为0.14 mol/L会使DNA溶解度变小而呈析出状态。答案A考情分析：本专题内容包