8 细胞骨架的观察

1、实验七 细胞骨架微丝的 光学显微观察实验目的概述实验原理仪器、材料与试剂实验步骤实验报告及思考题下一次实验预告1 实 验 目 的掌握用考马斯亮蓝R250染色观察植物细胞内微丝的方法。 细胞骨架的观察2微丝概述细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament，MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅仅是活细胞的支撑结构，决定细胞的形状，

2、而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切相关。观察骨架方法？3实 验 原 理 本实验观察由微丝平行组成的纤维束，当细胞充分铺展时，经考马斯亮蓝R250染色可看到沿细胞一定方向伸展的纤维束。考马斯亮蓝R250可以染各种蛋白，并非特异染微丝，实验中用1%Triton X-100抽提掉胞质中的蛋白（除骨架蛋白外），能清楚地显示微丝束呈深兰色。（？） Mg2+ 高浓度Na+ K+诱导 G-actin F- actin 含ATP Ca2+ 低Na+ K+ 细胞骨架的观察4仪器、材料与试剂仪器：光学显微镜材料：植物洋葱每二人一套的用具:平皿或试管，

3、镊子 、吸管；每人一套的用具:载玻片（为区别细胞的正反面，作个标记 ) 盖玻片、吸水纸等。试剂 (1) 磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH .）， (2) 0.2mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）， (3) M-缓冲液， (4) 1Triton X-100（用M-缓冲液配） (5) 0.2%考马斯亮蓝R250， (6) 3.0%戊二醛（用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制） 细胞骨架的观察5M缓冲液配方咪唑（Ph6.7） 3.4gKCl 3.73gMgCl26H2O 0.10gEGTA 0.38gEDTA2H2O 0.04g巯基乙醇 70l甘油 294.8ml水定容 1000ml6 实 验 步

4、骤 1）取PBS液4ml培养皿中,再驳取洋葱鳞茎内表皮约1cm2若干片，放入盛有磷酸盐缓冲液的培养皿中（每二人用一个容器）。 2）吸去缓冲液，用1%TritonX-100 4ml处理洋葱表皮25-40 min。 3）除去TritonX-100，用M-缓冲液充分洗3次，每次约10 min 4）加3.0%戊二醛固定液4ml（用0.2 mol/L的磷酸缓冲液pH 6.8配制） 固定0.5h 。 5）用PBS洗3次，滤纸吸去残留液体。 6）0.2%考马斯亮蓝R250染色30min。 7）用蒸馏水洗数遍，降低背景。 8）将样品置于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察。 9）结果：微丝束呈深蓝色 细胞骨架的观察7实 验 报 告 及 思 考 题1 画出所观察到的微丝图像。2 说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？3 说明M-缓冲液的作用是什么？ 细胞骨架的观察8 光