液相色谱仪原理及使用操作规程、原子吸收仪使用规程

1、 液相色谱仪原理及使用操作规程原理液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。测定各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；测量各峰的峰面积，即可作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定相

2、应组分的含量。液相色谱仪工作原理图高效液相色谱仪是实现液相色谱分离分析过程的装置，如上图所示。贮液器中存贮的载液（用作流动相的液体常需除气）经过过滤后由高压泵输送到色谱柱入口（当采用梯度洗脱时，一般需用双泵系统来完成输送）。样品由进样器注入载液系统，而后送到色谱柱进行分离。分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录仪或数据处理装置。如果需收集馏分作进一步分析，则在色谱柱出口将样品馏分收集起来，对于非破坏型检测器，可直接收集通过检测器后的流出液。其中输液泵，色谱柱及检测器是仪器的关键部件。仪器使用操作步骤1、打开主机（Waters1525泵）；待泵稳定后（大约需要25秒钟，即有两次“嘀”的响声）

3、打开紫外检测器；检测器预热需要610min钟的时间，在此时间内你可以执行第2步操作。2、打开电脑（电脑必须进入英文界面）待检测器稳定后，方可打开Breeze应用程序，应用程序有个自检过程（需要12分钟）。3、建立新方法（打开Breeze程序时，系统默认为上次使用的方法和文件名。如果需要建立新的文件名和方法，你可以继续下一步操作）：（1）点击“ManageBreeze按钮f“Makeanewprojectf“Nextf在“projectName框内输入新的文件名，也可以在omment内输入需要说明的一些注释,也可以不填f“Finish”；（2）建好新的文件夹后，还要转换到该文件夹中，即在“Man

4、ageBreeze”界面下点击“changeproject/user”按钮f在project内选择刚建立的或是需要的文件名f“OK”；（3）此时已经在刚建立的新文件夹下，那么，现在应该再建立一个新的方法，操作步骤是：、点击“ViewMethod”f选择“LC或GPC”f点OK-点击“pump”在“IsocraticFlowA/B”内输入A/B流动相的比值（例如：A：B=70：0且流速为1ml/min，那么，就在A下输入0.7,在B下输入0.3；再如A：B=70：30且流速为0.8mL/min，那么，就在A下输入0.56，在B下输入0.24；依此类推）；、点击“UVDet（紫外检测器）”f选择“

5、Channell”f在“wavelength/nm”框内输入检测波长；（4）保存新方法，点击菜单栏中的“File”选择“saveAs.”f在“Name”框内输入刚建立的新方法的名称，如“LCmethodl”，然后点击“save”按钮，即可保存刚刚设立的各项色谱条件。4、用新建的方法平衡系统：单击左下角的“Equilibrate”f在“methodforEquilibrate”内选择新建立的方法（如：LCmethod1）f点击“Equilibrate”即开始基线平衡（基线平衡大约需要20min）。5、待基线平衡后即可进行单次进样：（1）点击单次进样按钮f在“SampleName”内输入样品名称，

6、或备注（可不填）f注意：在“method内一定要选定需要的方法(如“LCmethod1)f“vial内选1,表示这是第1次进样(用于自动进样器)f在“runtime”内输入所要运行的时间f单击“inject(进样)”按钮；待进样图示出现后,方可进样(若发现进样时的方法选错了,可以点击图示右下方的“abortinject”来取消这次进样操作，然后重新点击进样按钮，确保进样时method选择的是你所需要的方法)；在进样过程中，要注意的是：a、取样要力保一致；b、在将进样环从“Load”位移到“inject”位时间要停留1.2秒以上，因为在1ml/min的流速下，样品完全脱离定量环所需要的时间0.0

7、2min(1.2秒)；c、要保证运行时间的一致性，每次进样后将“Load”位移到“inject”位时间要停留的时间必须一致；6、每次进样后，都要对运行的结果进行数据处理：点击“ViewData”f点击“PrecessingParameteryWigard”或点击采集栏右下角的“senddatatoreview；选择“startnewprocessingporameters”如果是进行同一个样品且在此之前有过数据处理可以选择第二项，点OK；在“start”内输入要处理峰值的开始时间，在“end内输入结束时间，然后单击下一步；确保“clearpeakwidthandthreshold”不被选中，然

8、后多次点击“下一步”直到对话框结束。7、若要更换洗脱剂，必需要对泵、检测器进行冲洗(点击冲洗灌注按钮按照提示一步一步操作)：将需要更换的洗脱剂，先超声20min后换上；用注射器，抽出两泵内原有洗脱剂大约各10mL，然后打开参考阀进行冲洗灌注；冲洗灌注后，关紧参考阀；用新的方法平衡系统(大约需要20min)。8、梯度洗脱程序的设置：在第3步（3）项步骤中点击“pump栏内选择“Gradent（梯度）”后，将出现一个表格，在“时间”栏内输入要开始梯度洗脱的时间和结束时间，在A、B“内输入开始洗脱时的“A、B”流动相的比例和结束时的比例。在最后一栏内输入所需要的洗脱程序的变化曲线。9、样品组方法的建

9、立及运行：在建立样品组方法前必须先建立好所需要的洗脱程序并命名：（1）点击命令栏内的“samplequeue”，将出现样品组工作窗口；（2）点击样品组工作窗口左上角的“wizard”按钮，出现“selectlocationofstandards页面，在此页面中，可选择Nostandards或其他，“startloadingvialsintrayposition”可选择1,然后单击“下一步”；（3）是手动进样，必须确保Eachstardardvialcontainsadifferentlevelstandard”被选中（默认选项），然后单击“下一步”；（4）在Numberofstandardvi

10、alsineachgroup中输入1（默认值）；在Numberofinjectionspervial内输入一个数（自动进样器用）；在Runtime内输入每一个样品所需要运行的时间；在injectionvolume内输入需要进样的的量如10ul；在method内选择需要的洗脱方法，然后点击“下一步”；（5）可输入所用分析柱的型号和规格，如“KF-C187um也可不填，点击“下一步”；（6）可以什么都不管，各项均采用默认值，点击“下一步”；（7）选择运行模式：如果只运行而不需要报告可以选择“runonly；如果既想运行且需要打印出过程可以选择“runandprocess”；如果既想运行且需要打印出

11、结果可以选择“runandreport”。（注：“runandreport”只是将图打印出来，并不给出峰值。）（8）单击“Next”后出现“summary界面，点击此界面中的“options”按钮，在出现的对话框中需要在“Function栏中选择Equilibrate”，在“method”中选择需要的方法，在“Runtime”内输入平衡系统的时间（一般为20min）；（注：此步可以不做，但在运行样品组前，必需先平衡系统。）（9）点击“完成”，并保存样品组方法；（10）运行样品组方法注：如果没有做第（8）步必需先平衡基线，待基线平衡后才可以进行此步操作:点击采集栏中的runcurrentsamp

12、lesetmethod”（在单次进样按钮的下方）按钮，在“Nameforthissamplese”内输入样品组方法名（默认为刚建立的样品组方法），在runmode内选择运行模式，然后点击“Run”，待出现进样图示后，按第5步（2）、（3）项操作。参照WatersBreeze入门指南，P53。（附：打开您建立的样品组方法，点击样品组工作栏上方的“Opensamplesetmethod”按钮，选择您需要的方法，点击“Open”。）10、分析结束后，必须充分冲洗色谱柱：先用原A、B两相洗脱液的比例，再逐步增大甲醇比例，直到甲醇占冲洗液的100%，例如：原洗脱液A:B=甲醇:水=50:50，则分别用A

13、:B=：50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，每个梯度均要冲洗至基线稳定（一般要20min左右）方可改换下一个梯度，直到完全冲洗净为止。再关泵、检测器和主机。特别注意：1、任何物质测定完后，都不得不冲洗泵而直接关机！2、溶剂多为挥发性有机溶剂，易燃，故室内严禁吸烟！WatersBreeze高效液相色谱系统操作规程1.开机依次打开泵以及检测器、柱温箱的电源，等到检测器口检完毕后，打开计算机，登录Windows,并进入Breeze软件。2.灌注泵2丄配制准备流动相，过滤并超声后置于清洁的溶剂瓶内，将溶剂过滤头放到222.3.单击采集栏上的“Purgewizardn

14、选择鱼1purgepump冲洗该泵，然后单击“Next”。若未灌泵，应使用灌注注射器，打开排液阀并抽取l（）ml的洗脱剂，（般为超声过滤的注射用水）关闭排液阀，再单击“Nex（”24打开参比阀（右边）25如果冲洗时的流速低于默认的流速5ml/min,在标尺下方的文本框屮输入新的流速，单击Next,此时开始冲泵。“Purgetime计数器监视冲洗时间,26（默认时间为5分钟）在完成之前，单击“Stoppurge”按钮停止清除操作。冲洗完毕，关闭对话框。3.平衡3.J.单击采集栏上的IaEquilibrateJ,a3.2.在下拉列表屮选择所;需方法，单击“EquilibnHe”。3.3.系统留出约

15、20min时间进行平衡，或直到基线稳定。（单击Run”退出基线监视器）“abort34手动进样3.5.单击采集栏上的“makesingleinjection*36对话框(SpecifySingleInjectFJarameters)将出现,SpecifySingleInjectParaweters在此框中输入样品名称(SampleName),方法(method)进样体积(InjectionVolume)运行时间(runtime)o单击“Inject”，弹出进样对话框。把进样器于柄扳到载样位置(load)39用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量供试品溶液八如川定量环(Wop)满载样，则注射器抽

16、取量应不少于定量环容积的5倍，用微量注射器定屋进样时，进样量不得多/环容积的50%,在排除气泡后方能向进样器小注入供试溶液。30把注射器的平头针直插至进样器的底部，注入供试溶液，除另有规眾外，注射器不应立即取下。H.将手柄扳转至进注样位置(Inject),定量环内供试溶液即被流动相带入流路口结束采样及数据处理。采样完毕后，单击囤AbortRun退出基线监视器。42单击命令栏上的FindData,选择Results选项卡。4.3.单击uReviewData,选择柑应的色谱。44单击壓J(处理方法向导1ProcessingMethodWizard)，出现下图：ProcessingParameter

17、sWizard辽I区YoucanusetheProcessingParameterswizardtoeditthecurrentprocessingparametersortostartnewprocessingparameters.StartingnewprocessingpatametetsusingthewizardalwaysstartsanewcalibfationlotthenewprocessingpafametersIfyouareeditingthecunentprocessingparameterswiththeProcessingParameterswizard,youc

18、anchoosetoeitherkeeplheexitingcalibrationordearthecdibfation朗dstartanewcalbalionforthemodiedpoce$singparametefs.StartNewProcessingPafametersEditExistingProcessingPacametefsandKeeptheCaftwationEditExistingProcessingParametersandCleartheCabbrationOK|Cancel|Help|选择“StartNewProcessingParameters然后单击OK。弹出

19、44Integration-IntegrationRegion-Uvchlv对话窗,输入积分开始时间(Sstart)及积分结束时间(End),选择Next”。弹岀Tmcgnition-PcakWidthandThrcshold-Uvchl”，确保没冇选屮44clearPeakWidthandThreshold,然后单击“Next,采用默认的参数。弹出aIntegration-PeakRejection对话窗，使用鼠标左键，放大最小的所关注峰值，然后单击选川该峰值(峰值变为红色)。弹出uCalibration-General-UVchlv对话窗，单击Next,即可。单击wCalibration-

20、NamesandRetentionTimes-Uvchf删除不需要的峰。弹岀Calibration-DefaultAmounts-Uvchf,单击“Next”。弹出Calibndion-IrHc门kiIStandards-Uvchl”対话窗，选择44ExternalStandardCalibration”,单击Next弹出“MethodName-Uvch1”对话窗，填入方沙、名称43.单击44ProcessingParametersn,选择Suitability在CalculateSuitabilityResultsw前打“J”,在“VoidVolumeTime(min)处，输入“1.0”单击

21、Integrate,再单击ReviewMainWindow,即查看USP理论板数(USPPlateCount)n及分离度(Resolution)拖尾因子(SymmetryFactor)单击“SaveAll”，保留数据。4J6.在!FindData“FindDatr屮，选择Results,选定所打印文件名，单击右键，选“Pwview,点击Uj;ethefollowingRcpoilMethod选择所需方法，单击“OK”，点击Print即可。5试验操作后的仪器维护若流动相含盐类物质,先用超声过滤的注射用水冲洗30min后，用甲醇梯度洗脱后，纯甲醇保存柱子。在实验结束后，换上水或甲醇活洗色谱柱的过程

22、中，用洗瓶或者次性针筒吸取蒸锚水，缓缓注入色谱泵淸洗孔，以清洗泵杆与密封圈上可能附右的盐类物质。在实验结束后，换上水或甲醇清洗色谱柱的过程屮，用注射器吸取清洗溶液对进样器进行清洗,洗去进样阀中可能残留的杂质,Z后再插上保护针和外盖。6注意事项在开机后冲洗色谱泵时，若所使用的流动相为缓冲溶液，则应先用10%甲醇-水溶液冲洗30分钟，再用流动相平衡，若所使用的流动柑为纯有机溶液,则立接用流动相冲洗平衡。在仪器工作时，应随时观察爪力的变化，若压力过高，则应立即停止工作*检査仪器是否正常，管道绘否堵寒.在冲洗色谱柱时流速不能过高，否则容易损坏色谱柱前的过滤装置.在更换流动和吋应将滤头缓慢放入,以防止产

23、久气泡,若在冲洗时，发现柱床力不升高或不能吸入流动和，则应检査仪器杲否漏液或进气泡；进液管道迢否堵塞。若所使用的流动相若为进I丨的色谱纯试剂，对以百接使用，若所使用的流动柑为非进II色谱纯试剂，则应过滤并去除气泡后方可使用。6.5.用微量进样器进样时，.应先用供试溶液润洗进样器三次，再吸取适虽溶液进样，吸取时应尽量避免气泡产生，应先将气泡排除后方可进样。WFX110A型火焰原子吸收分光光度计操作步骤确保气路、电路连接正确，主机与电脑信号连接好。打开电脑，打开主机开关，运行其专用程序（WFXSTOP图标）。待主机各机构自检完成后，自动进入条件设置页面；设置各项仪器条件：文件f创建f主页面，选择测定兀素f波长、光谱带宽（狭缝）、灯号位置f选择火焰法f选择仪器参数，编辑项目信息等内容f输入标准曲线各浓度参数（如：Sl:0.0,S2: