2022年体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则-生物芯片类试剂生产

1、体外诊断试剂生产及质量掌握技术指导原就 生物芯片类试剂生产及质量掌握技术指导原就（报批稿）本指导原就所定义的生物芯片诊断试剂是指将多个生物探针（包括DNA片段,寡核苷酸、抗原、抗体,组织,细胞等）按预先设计的排列方式固定在特制的基质（包括玻璃 片,尼龙膜,硝酸纤维素膜等）上,用特定的方法提取生物靶分子并进行标记,然后与固 定在基质上的生物探针特异性的结合,再用相应的检测设备（如激光扫描仪、CCD 检测仪 等）和分析方法（包括软件）进行检测、记录、分析,实现对生物靶分子的定性或定量检测的试剂；依据芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分为核酸芯片、蛋白芯片、细胞芯片、组 织芯片等；本指导原就是针对

2、核酸和蛋白为检测靶分子生物芯片的生产及质量掌握技术指 导原就,其它类型靶分子检测的芯片诊断试剂可参考本指导原就；国家食品药品监督治理部门将依据科学技术发展的需要,适时组织修订；一、基本原就（一）试剂研制、生产用各种原料、辅料等应制定相应的质量标准,并符合有关法规的要求；（二）试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及相宜的生产环境,获得医疗器械生产许可证；同时,应依据体外诊断试剂生产实施细就（试行）的要求 建立相应的质量治理体系,形成文件和记录,加以实施并保持有效运行；仍应通过体外 诊 断 试 剂 生 产 企 业 质 量 管 理 体 系 考 核 评 定 标 准 （ 试 行 ） 的 考

3、核 ；（三）生物芯片类试剂在研制时,应当依据科学、规范的原就组织研发,各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理；（四）试剂研制、生产过程中所用的物料及工艺,应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜；（五）生产和质量掌握的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳固、工艺可控、检测有效二、原材料质量控；制（一）核酸检测芯片核酸芯片检测时,从生物样本中提取的核酸可用荧光标记、金标记和酶标记；检测方法 包括光谱学方法和化学显色；下面为荧光标记芯片技术指导原就,采纳金标记和酶联显色等 的 生 物 芯 片 诊 断 试 剂 可 参 照 核 酸 芯 片 和 蛋 白 芯 片 相 关 部 分 ；1、主要生物原料核酸检测芯

4、片的主要生物原料包括模板DNA 、dNTPs、引物、探针、标记物等；主要生物原料如为企业自己生产,其工艺必需相对稳固,企业应依据工艺要求对这类生物原料进 行质量检验,以保证其达到规定的质量标准；如购买,其供应商要求相对固定,不能随便 变更供应商,同时,供应商应供应相应的质量保证证明和相应的质检报告,达到生产规定 的质量标准；假如主要原料（包括工艺）或其供应商有变更,应依据国家相关法规的要求进重组行变更申请；（1）模板DNA DNA ：经测序验证,关键碱基或序列没有错误；1TE 溶解,浓度为100ng/ l以上 , -20 保 存 ； 作 为 阳 性 参 考 品 时 , 其 稀 释 度 由 企

5、业 根 据 产 品 标 准 确 定 ；1 / 6 （2）dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）HPLC 纯 , PCR 级 , 无 DNase 、 RNase 污 染 , -20 以 下 保 存 ；（3）引 物生产中的引物原材料为冻干粉,PAGE 纯或 HPLC 纯；用标准 DNA 模板扩增,电泳检测,谱带单一,大小正确,与对比引物比较,产物量一样；符合视为合格引物,-20以下保 存；（4）探 针（用 于 阵 列 制 备）重组 DNA, 冻干粉（或 1TE 溶解液）：至少满意一个批次的用量,酶切鉴定分析图谱；PCR 产物,冻干粉（或 1TE 溶解液）：至少满意一个批次的

6、用量,PCR 电泳鉴定图谱；合成寡核苷酸：PAGE 纯或 HPLC 纯,至少满意一个批次的用量,供应当产品的 PAGE电 泳 分 析 图 谱 或 HPLC 分 析 图 谱；探 针 序 列 的 正 确 性 ： 应 用 克 隆 鉴 定 的 标 准 DNA 杂 交 鉴 定 或 测 序 鉴 定 ；纯度和浓度检测：采纳电泳方法,电泳图谱没有杂带,目的条带的强度与已知浓度的标准 DNA 条带进行参比运算其强度；纯度较高的DNA ,可用紫外分光光度计进行定量；检验合格后入库5,避光、-20标以下保存；（）记物含 有 激 发 光 波 长 和 发 射 光 波 长 介 于280.680nm 的 所 有 荧 光 分

7、 子 , HPLC 纯 ；（6）Taq DNA 聚 合 酶SDS检测,纯度95%,具有 DNA 聚合酶活性,无核酸内切酶活性；具热稳固性 , 94 保 温 1 小 时 后 仍 保 持 50 活 性 ； 产 品 -20 保 存 ；（7）尿 嘧 啶 糖 基 化 酶（UNG）具尿嘧啶糖基化酶活性,无核酸外切酶及核酸内切酶活性；1U UNG 37处理 3 分钟后 , 103 拷 贝 以 下 含 U 模 板 被 降 解 后 不 能 产 生 扩 增 产 物 ； 产 品 -20 保 存 ；（8）RT 酶具 有 逆 转 录 活 性,无 核 酸 内 切 酶 活 性,-20保 存；（9）RT-PCR 酶具逆转录酶

8、活性和 DNA 聚合酶活性,无核酸内切酶活性,具热稳固性,94 1 小时后仍 保 持 50% 活 性；产 品-20保 存；（10）缓 冲 液各 类 酶 制 品 所 需 的 反 应 缓 冲 液 由 厂 家 随 酶 制 品 提 供 , -20 保 存 ；2、主要生物辅料主要生物辅料包括酶类（蛋白酶、核酸酶等）、核酸提取试剂、鱼精DNA 、封闭用蛋白、杂交液等,企业应建立相应的质量标准；主要生物辅料如为企业自己生产（配制）,其工艺必需相对稳固,并依据工艺要求对这类生物原料进行质量检验,以保证其达到规定的质量标准；如购买,其供应商要求相对固定,不能随便变更供应商,同时,供应商应提供 相 应 的 质 量

9、 保 证 证 明 和 相 应 的 质 检 报 告 , 达 到 生 产 规 定 的 质 量 标 准 ；3、主要化学残原辅料化学原材料的质量标准参照中国生物制品主要原辅材料质控标准（2022 年版）分析纯级别进行检验；主要的检测指标包括：溶液外观、一般盐类检测、溶液pH 值、溶解情况、干燥失重、炽灼渣等；主要化学原材料的供应商要求相对固定,不得随便发生变更；化学原材料在购入时,原材料的生产商必需供应当批次化学原材料的质量保证材料和质检报告,其质量标准应达到生2 / 6 产所4需、的质量他标物准；其料（1）载玻片外 观 ： 明 亮 处 用 肉 眼 观 察 无 缺 刻 , 无 划 伤 等 ； 规 格

10、按 设 计 要 求 ；激 光 扫 描 仪 扫 描 （ 波 长 为 芯 片 检 测 波 长 ） ： 包 被 层 基 本 均 匀 ；（2）试管、吸头、试剂瓶等一 次 性 使 用 , 由 生 产 厂 家 提 供 质 量 保 证 , 达 到 设 计 要 求 ；（3）其他：包括试剂瓶标签、铝箔袋、衬垫、可密封塑料袋、说明书、干燥剂和包装外盒等,应参 照国家食品药品监督治理局颁布的体外诊断试剂说明书编写指导原就和医疗器械说明书、标签和包装标识 管理规定建立相应质量标准 ；（二）蛋要白生检物测芯片1主原料与生产的产品质量最亲密相关的生物原料包括各种自然抗原、重组抗原、单克隆杭体、多克隆抗体以及多肽类生物原科

11、；这类原料可用于点膜、标记相关酶、纳米金、光学基团及中和反应用抗原或抗体等；使用前应依据工艺要求对这类生物原料进行质量检验,以保证其达到规定的质量标准；主要生物原料如为企业自己生产,其工艺必需相对稳固；如购买,其供应商要求相对固定,不能随便变更供应商,假如主要原料（包括工艺）或其供应商有变更,应依据国家相关法规的要求变更申请；主要生物原料的常规检验项目一般包括：外观肉眼观看,大部分生物原料为澄清均一液体,不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒；或 者 为 白 色 粉 末 , 不 含 其 他 颜 色 杂 质 ； 特 殊 生 物 原 料 应 具 备 相 应 外 观 标 准 ；纯度和分子量生物原料经SD

12、S电泳后,利用电泳扫描仪进行分析；也可用其他相宜的方法,如高效液相法等进行分析；依据所检测生物原料的分子量挑选相宜聚丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳；一般每个电泳道加样量为5 g；电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色；染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量,纯度应达到相应的质量标准,分子量大小应在正确的条带位置；蛋白浓度蛋白浓度可通过Lowry 法、 280nm 光吸取法、双缩脲法或其它相宜方法进行检测；价效效价的测定一般依据蛋白含量测定结果,通过倍比稀释法进行；效价应达到规定的要求功能性实；验功能性试验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情形,一般考查使用该原料的试剂的 灵 敏 度 、

13、特 异 性 和 稳 定 性 等 , 并 比 较 其 与 上 批 次 原 料 的 相 关 性 ；2主要生物辅料生物辅料指的是在生产过程中作为蛋白爱护剂用途的一类生物原料,主要包括小牛血 清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等；这些生物原料的质量标准应符合中国生物制品主要原辅材料质控标准（2022 年版）规定的质量标准要求,并且要适合于企业生产；异：建议作以下检验牛血清或羊血清外观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体,无溶血或物3 / 6 无菌试验：将血清直接 37放置 7 天,放在光明处观看,不得显现混浊或沉淀；总 蛋 白 含 量： 用 双 缩 脲 法 测 定, 标 准 为 不 小 于 32mg/ml；球蛋

14、白含量：取待测血清 1ml,采纳饱和硫酸铵法进行沉淀；沉淀溶于 0.85%NaCl 溶液至 1ml,用 Lowry 法 测 定 蛋 白 含 量 不 能 大 于 2mg/ml； 牛 血 清 白 蛋 白：外观：应为浅黄色、黄色或乳白色的冻干粉末,无吸潮,无结块,无肉眼可见的其它杂质 颗 粒；溶解性：将牛血清白蛋白配成 10%溶液,溶解时间在 18-26时应不大于 15 分钟； p值 应 为 6.5.7.1；总 蛋 白 含 量 ： 用 双 缩 脲 法 测 定 , 其 标 准 为 不 小 于 干 重 的 95 ；总蛋白中的 BSA 含量：采纳硝酸纤维素膜电泳法,其标准为不小于总蛋白含量的 95%；BS

15、A 的 净 含 量 ： 总蛋白 含 量 乘 总 蛋 白 中的 BSA 含 量 ,其 标 准 为 不小 于 90% ； 酪 蛋 白：应 符 合 生 产 所 需 的 质 量 标 准； 标 记 用 酶应在产品的质量标准中明示所使用的标记用酶的名称（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）,同时应依据不同生产厂家的检验方法和质量标准进行检验,酶的纯度3.0RZ 值（OD403nm/OD280nm）应大于；对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等,仍应进行功能性试验,即以其为 原 料 配 制 一 定 浓 度 的 稀 释 液 作 为 样 品 , 进 行 测 定 , 均 不 得 出 现 非 特 异 性 反

16、应 ；生 物 辅 料 的 供 应 商 同 样 要 求 相 对 固 定 , 不 得 随 意 变 更 供 应 商 ；3化学原辅料参照中国生物制品主要原辅材料质控标准（的检测指标包括：溶液外观、一般盐类、溶液2022 年版）分析纯级别进行检验；主要 pH 值、溶解情形、干燥失重、炽灼残渣等；主要化学原材料的供应商要求相对固定,不得随便发生变更；化学原材料在购入时,原材料的生产商必需供应当批次化学原材料的质量保证材料和质检报告,其质量标准应达到生产4所需的其质量基标物准；他料质以硝酸纤维素膜为例：孔径符合设计要求（0.45 m、0.22 m等）、均一性（厚度及毛细迁移速度20）、尺寸（与标识吻合）由产

17、厂家试供剂瓶,和干燥求剂生提质量保证达到规定要；其他：说明书、包装外盒等应参照国家食品药品监督治理局颁布的体外诊断试剂说明书编写指导原就和医疗 器械说明书、标签和包装标识治理规定建立相应质量掌握标准,如数量、规格等；三、试剂盒各组分的生产生物芯片主要包括DNA 芯片、蛋白芯片、组织芯片和细胞芯片等；生物芯片诊断试剂产品基本可分成二个部分,一部分是芯片,另一部分检测用工作液；假如有配套的检测仪器,仍需对仪器及处理芯软件的应用加以说明；（一）片的生产芯 片 生 产 的 基 本 过 程 包 括 探 针 的 获 取 方 法 , 纯 化 , 点 样 , 固 定 ；1探针获取4 / 6 不同芯片,主要是探

18、针不同,生物芯片的探针主要包括以下几类,其它探针可参考制定相应的技术及质量标准；指（1）DNA探针的获取探针的形式包括PCR 产物、克隆DNA 、人工合成DNA 片段等；要求有生产程序和质量；标及检测方法,要进行纯化,有固定的纯化程序（2）抗原的生产抗原获得方法包括细胞培育、从生物材料中分别提取、基因工程表达以及合成肽等；基因工程表达产物又分3为纯抗原蛋白、融合蛋白等；（）抗体抗体分单克隆抗体和多克隆抗体；抗体制备包括细胞培育,动物腹水,基因工程表达等方（4）式胞和组；细织包 括 细 胞 或 组 织 类 型 , 固 定 方 法 ； 组 织 材 料 包 括 固 定 , 包 埋 , 切 片 等 ；

19、2阵列的排列设计阵列的排列可以是依次排列、随机排列、对角线排列以及其它排列方式,但设计时需考虑重3复次数点和对照等因制素；阵的作使 用 仪 器 的 需 要 确 定 型 号 , 程 序 ； 手 工 制 作 的 也 应 有 标 准 操 作 程 序 ；4固定：包括固定方式,固定条件等；应对芯片生产的过程进行相应的质量掌握,如点样和固定过程的监控、点样均一性检验等（二）工作液配；制1芯片生产所需试剂,包括细胞培育基,探针制备试剂,阵列制作和固定试剂等； 2样品处理试剂,芯片检测靶分子分为核酸和蛋白质；检测核酸的样品处理试剂包括临床取样, DNA 提取或RNA 提取试剂,逆转录试剂,PCR 扩增试剂,核

20、酸标记试剂等；检测 蛋 白 的 处 理 试 剂 包 括 取 样 试 剂 , 蛋 白 稀 释 液 以 及 特 殊 试 剂 等 ； 3反应液：检测核酸时的反应液包括预杂交液,杂交液,洗脱液等；检测蛋白时,包括封 闭 液 , 抗 原 / 抗 体 反 应 液 , 洗 脱 液 , 显 色 液 , 显 色 终 止 液 等 ；1（标三依据）包括数off据的确判依据；读判断准及,Cut 值定2数据判读方式：人工仍是软件判读； 3假如是软件判读,应供应软件判定的科学依据（包括生物学原理、数据猎取原理和判断 实 验 是 否 成 立 的 依 据 ） 以 及 实 验 测 试 的 原 始 报 告 （ 或 数 据 ） ,

21、 并 需 要 说 明 ： 软 件 的 来 源 ：购 买 或 自 己 编 制, 是 否 获 得 注 册 等 ； 软 件 的 用 途 ： 包 括 对 数 据 的 分 析 、 存 储 、 解 读 、 含 义 等 ； 软 件 的 使 用：基 本 的 使 用 程 序；四、半 成 品 质 量 控 制（一）抽 样检 验 人 员 按 批 号 抽 取 检 验 需 要 数 量 的 半 成 品 , 作 好 标 记 , 待 检 ；（二）半成品检验利用上一批检验合格的试剂盒的相应组分,对本批生产出的各种试剂盒组分分别进行检验,检验结果达到产品的质量标准；半成品检验,一般使用国家标准品（参考品）或经国家标准品（参考品）标化后的企业参考品进行；如某类试剂没