可变波长建立泸州纳溪GAP基地栀子药材高效液相色谱指纹图谱

1、可变波长建立泸州纳溪GAP基地栀子药材高效液相色谱指纹图谱【摘要】目的建立泸州纳溪GAP基地栀子药材高效液相色谱(HPL)指纹图谱。方法以栀子苷为参照物，采用DikaDiansil18(2504.6，5)色谱柱，以乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱，变波长检测。结果建立了纳溪栀子的HPL指纹图谱，并确定了19个共有峰，共有峰的参数符合“中药注射剂指纹图谱技术要求的有关规定。结论方法准确，重复性好，建立的指纹图谱检测标准，可作为纳溪栀子质量评价与品种鉴别的重要根据之一。【关键词】栀子;HPL;指纹图谱;可变波长栀子为茜草科植物栀子GardeniajasinidesEllis的枯燥成熟果实，具有泻火

2、除烦、清热利尿、凉血解毒的成效1。栀子主要含两类有效成分：环烯醚萜苷(栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、异栀子苷、栀子酸等)和藏红花素(西红花苷-、西红花苷-、西红花苷-、西红花酸等)2。由于两类成分最大吸收波长分别在240n和440n，其紫外吸收光谱扫描显示几乎无穿插吸收区域，要让两类成分均在同一指纹图谱中反响出来，需用可变波长技术，分别在二者最大吸收波长处检测。目前国内文献关于栀子的指纹图谱研究多为采用单一波长或多波长检测，分别建立环烯醚萜类和藏红花素类的指纹图谱35，此方法不能反映栀子的整体指纹特征。栀子主要生长在长江以南各省，主产于浙江、江西、湖北、湖南、四川等地，四川纳溪栀子以品质高而出名，

3、全区种植面积约2000ha，年产量近1000吨。不同来源的栀子，由于受到产地、气候、采收时间及加工方法的影响，致使其有效成分的含量存在着一定的差异，从而影响其临床疗效。为全面评估四川纳溪地区栀子有效成分的变化及差异，试验采用二极管阵列检测器的可变波长检测功能，分别在环烯醚萜类和藏红花素类的最大吸收波长处测定，建立了泸州纳溪GAP基地栀子的HPL指纹图谱，为其质量控制、药材鉴别以及进一步开发利用本地区的栀子资源提供科学根据。1仪器与试药戴安高效液相色谱仪(P680A四元低压梯度泵，PDA-100二极管阵列检测器，T-100柱温箱，hrelen色谱工作站);瑞士Preisa电子天平(XR205S-

4、DR);QX25-06超声波清洗器(上海必能信超声，功率250，频率25kHZ)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DikaKrasil18(2504.6，5);流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱：0in20in50in，乙腈5%15%45%;检测波长：030in，240n，3050in，440n;柱温：35;流速：1.0lin-1;进样量：10l。理论塔板数按栀子苷计不低于5000。2.2溶液的制备2.2.1参照物溶液的制备取栀子苷对照品适量，精细称定，加50%甲醇溶解制成每毫升含栀子苷0.306g的对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品细粉约0.25g，精细称定，置具塞锥形瓶

5、中，精细参加50%甲醇25l，称定重量，超声处理45in，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，即得。2.3稳定性实验取供试品溶液，分别于制备后0，4，8，16，24，48h检测指纹图谱。以栀子苷峰的保存时间和峰面积为参照，各共有峰的相对保存时间及13号色谱峰的峰面积比值根本一致，其RSD均小于3%，相似度均在0.99以上。符合指纹图谱的技术要求6，说明供试品溶液在48h内稳定。转贴于论文联盟.ll.2.4精细度实验取供试品溶液，连续进样6次，检测指纹图谱。各共有峰的相对保存时间及13号色谱峰的峰面积比值根本一致，其RSD均小于3%，相似度均在0.99以上。符合指纹图

6、谱的技术要求，说明仪器精细度良好。2.5重复性实验取栀子样品6份，按“2.2.2项下方法制备供试品溶液，分别检测指纹图谱。以栀子苷峰的保存时间和峰面积为参照，各共有峰的相对保存时间及13号色谱峰的峰面积比值根本一致，其RSD均小于3%，相似度均在0.99以上，符合指纹图谱的技术要求，说明本方法重复性较好。2.6指纹图谱的建立及共有指纹峰的标定精细汲取栀子苷参照溶液和栀子供试品溶液10l，分别注入液相色谱仪，记录50in的色谱图，即得。比拟不同批次样品的色谱图，其中19个色谱峰是共有的，确定为共有指纹峰，见图1。图1栀子标准指纹图谱2.7共有指纹峰技术参数确实定比拟10个批次栀子样品的色谱图，根

7、据?中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)?6，以栀子苷峰作为参照峰(S峰)，计算各共有指纹峰的保存时间、相对保存时间、峰面积、峰面积百分比和峰面积比值，见表1。结果说明各共有指纹峰的相对保存时间、峰面积比值相对固定，符合?中药注射剂指纹图谱的技术要求?6。2.8指纹图谱的相似度评价根据?中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南(试行)?7，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2022A版(国家药典委员会)对10批栀子药材的指纹图谱进展相似度分析，以第1批药材的指纹图谱作为参照谱图，以平均数法生成10批药材的对照指纹图谱，10批栀子与对照指纹图谱相似度分别为：0.972，0.968，0.985，

8、0.993，0.998，0.998，0.997，0.998，0.989，0.996。符合指纹图谱技术要求。10批栀子HPL指纹图谱叠加图见图2。表1栀子HPL指纹图谱技术参数3讨论实验中曾选择了多组流动相系统，结果说明，各组流动相中以乙腈-0.05%磷酸溶液作正文梯度洗脱最正确，能保证栀子药材中绝大局部色谱峰都能获得良好的别离，可用于指纹图谱分析，同时该色谱条件也合适栀子药材中各主要成分的含量测定。实验采用二极管阵列检测器在190600n范围内分别扫描供试品溶液中各成分的紫外吸收，试验发现30in前的所有色谱峰均在240n左右有最大吸收，而30in后的所有色谱峰均在440n有最大吸收，由于二类

9、成分几乎无穿插吸收区域，采用单一波长检测会导致某些主要活性成分色谱峰相对丰度降低甚至丧失，故根据两类成分保存时间的差异，在30in前以240n检测环烯醚萜苷类，在30in后以440n检测西红花苷类，使两类成分均可获得较强的丰度，以表达药材的整体指纹特征。通过实验研究，纳溪大渡口栀子GAP基地所产10批栀子药材HPL指纹图谱相似度较高，均大于0.95，说明其化学组成一致性较好，质量稳定。该产地的药材作投料药材用，可保证药品质量稳定可控。该方法也可作为该地区栀子药材品质及真伪鉴别的根据。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2022：173.2谢学峰，张俊慧，马爱华.中药栀子研究进展J.时珍国医国药，2000，11(10):943.3韩建萍，陈士林，张文生，等.不同产地栀子药材HPL指纹图谱研究J.世界科学技术-中医药现代化，2022，9(4):56.4郑云枫，彭国平.栀子药材HPL指纹图谱的研究J.南京中医药大学学报，2022，21(1):45.5曹敏，陈