抗体初筛试验

1、关于抗体初筛试验第一张，PPT共三十页，创作于2022年6月HIV抗体检测的目的和要点目的 诊断 血液筛查 监测要点 根据目的选择检测方法及检测策略 ! 严格遵守实验室SOP 筛查试验阳性需做确证试验 筛查试验阴性不应做确认试验 筛查及确证试验均应做好咨询工作第二张，PPT共三十页，创作于2022年6月HIV抗体筛查试验试剂 储存温度 效期样品 血清 血浆 全血方法 酶联免疫吸附试验（ELISA 化学发光或免疫荧光实验 快速检测(RT)及其它检测试验 明胶颗粒凝集试验 （PA） 免疫渗滤试验 免疫层析试验 免疫胶体金法（硒）第三张，PPT共三十页，创作于2022年6月免疫胶体金法 阴性 质控区

2、（C）出现红色反应线 阳性 质控区（C）出现红色反应线 检测区（T）出现红色反应线 无效 质控区 （C）未出现红色反应线HIV抗体筛查试验第四张，PPT共三十页，创作于2022年6月HIV抗体筛查试验酶联免疫吸附试验（ELISA） 方法类型 双抗原夹心法测抗体 双抗体夹心法测抗原 捕获法测抗体 间接法测抗体 竞争法测抗原抗体第五张，PPT共三十页，创作于2022年6月用于检测HIV抗体的ELISA法第一代：使用HIV全病毒裂解物为抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。如日本富士公司生产的HIV-PA试剂。 第二代：使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原，应用间接法原理检测HIV

3、抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原，产品为单一目的基因而非多样性抗原混合，特异性高于第一代试剂。 第六张，PPT共三十页，创作于2022年6月用于检测HIV抗体的ELISA法第三代：使用合成多肽HIV抗原（少数用重组抗原），应用双抗原夹心法原理检测HIV抗体。由于标记HIV抗原可同时检测血清中HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。高纯度的HIV-1/-2型抗原待检抗体酶标记的HIV-1/-2型抗原第七张，PPT共三十页，创作于2022年6月用于检测HIV抗体的ELISA法第四代 此类试剂在第三代试剂盒基础上，将针对P

4、24抗原的抗体与HIV-1抗原一起包被固相载体，可同时检测HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体和P24抗原。增加了敏感性和特异性 第八张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测HIV抗体的ELISA试剂试剂种类 必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准，批批检合格的HIV 抗体检测试剂 使用在有效期内且保存条件符合要求的试剂存放试剂的冰箱温度2-8，使用前要放置室温平衡第九张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测HIV抗体的ELISA试剂完整的ELISA试剂盒包含以下各组分 已包被抗原或抗体的固相载体 酶标记的抗原或抗体 酶的底物 阴性对照品和阳性对照品 定性测定 标本（和结合物）的

5、稀释液 洗涤液 酶反应终止液第十张，PPT共三十页，创作于2022年6月ELISA检测试剂固相载体 固相载体材质 聚苯乙烯 固相载体形状 微量滴定板 第十一张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测HIV抗体的ELISA试剂结合物（酶标记的抗体或抗原） 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)底物 四甲基联苯胺(TMB) 反应后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为450nm 第十二张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测HIV抗体的ELISA试剂洗涤液 常用含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水 终止液 HRP常用强酸，最常见2mol/L硫酸 第十三张，PPT共

6、三十页，创作于2022年6月ELISA试验 标本的采取和保存 加样 孵育 洗涤 显色与终止 酶标仪测定第十四张，PPT共三十页，创作于2022年6月标本的采取和保存 避免溶血 红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记 的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色 避免污染 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应 保存 一周内 28 一周以上 - 20第十五张，PPT共三十页，创作于2022年6月标本送检信息 姓 名 外螺旋盖（带胶垫）血清管 第十六张，PPT共三十页，创作于2022年6月第十七张，PPT共三十页，创作于

7、2022年6月接收样本时，必须填写样本接收记录单 建立样本的唯一性编码 登记有关信息 受检者姓名、性别、年龄、职业、 送检单位、人群类别、检验结果、 送检日期、报告日期 样本的接收第十八张，PPT共三十页，创作于2022年6月样本的接收认真核对样本与送检单提供的信息是否相符、样本有无破损和渗漏。如发现渗漏的，立即将尚存的样本移出，对样本管及包装进行消毒，同时报告主管领导和有关专家检查样本的物理性状。并做好记录。如果样本不符合试验的要求，应将样本安全废弃，同时立即通知送样人第十九张，PPT共三十页，创作于2022年6月样本的接收 实验室工作人员在打开样本容器时，须小心，防止内容物崩溅。样本处理时

8、，须穿戴防护衣，在生物安全柜中操作，同时应戴一次性口罩、防护眼镜，防止皮肤、粘膜污染。用后的包装要进行消毒第二十张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测方法 必须按照试剂盒说明书（sop）中规定的要求进行操作 包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置、试剂、标本加样量、孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等 标本质量 冷冻样品实验前需解冻并混匀，血清或血浆样品如溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，可能会对试验产生影响第二十一张，PPT共三十页，创作于2022年6月加样 移液器 ( 包括单头和多头移液器 ) 是实验室中重要的基本器具，一年至少校准一次 准确加到微孔板底部，避免加在

9、孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，加入后及时放入孵箱检测方法第二十二张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测方法孵育 孵育的温度要控制好，时间要掌握好，严格按照说明书操作 注意封板，避免蒸发 反应板不宜叠放，反应板至水面下的1/3处，以保证各板的温度都能迅速平衡，保证温度的均一性第二十三张，PPT共三十页，创作于2022年6月检测方法洗涤 各种试剂盒的洗液不要混用。按要求稀释，洗液如果结晶应待其融解后配制 检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象 按孔的大小调节好洗液的量 孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡 第二十四张，PPT共三十页，创作于202

10、2年6月检测方法显色与终止 显色剂不用过期显色剂 加终止液时应避免产生气泡。如产生较多气泡，则会导致假阳性 酶标仪测定第二十五张，PPT共三十页，创作于2022年6月 每天（每次） 核对酶标仪滤光片波长 查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象 每周 清洁仪器表面，保护光学零件，不沾灰尘 每月 洗涤时检查各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求，这是保证各孔洗涤均衡一致的前提ELISA 洗板机与酶标仪 (推荐方法)第二十六张，PPT共三十页，创作于2022年6月结果报告分析结果及发出检测报告前，应在试剂盒和外部质控品结果满足要求的前提下，对样品进行分析，试剂盒及外部质控品不合格，样品需要重新检测，复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论，签发人对试验结论进行审核、分析、总结、签字第二十七张，PPT共三十页，创作于2022年6月 结果报告筛查阴性样本，出具具有法律效用的正式报告,血清建议保存1-2个月筛查阳性样本，及时送确证实验室。必要时可出具HIV抗体待复查报告筛查实验室不得保存阳