同济医院检验科ISO15189体系文件04戊型肝炎病毒IgM抗体 (抗HEV-IgM)

1、同济大学附属同济医院检验科免疫组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ204第2版标题：戊型肝炎病毒IgM抗体 (抗HEVIgM)测定第2章 第04号第 PAGE 5 页 共 NUMPAGES 5 页1. 目的：检测血清标本中的抗HEV-IgM抗体。2. 适用范围：同济医院检验科免疫室。3. 项目名称：戊型肝炎病毒IgM抗体。4. 检测方法：酶联免疫法。5. 检测原：本试剂盒采用捕获法原理检测血清或血浆样品中戊型肝炎病毒IgM抗体，微孔中预包被鼠抗人-IgM（）链，加入待检人的血清或血浆样品后，所有的IgM抗体都被捕获，未结合的其他成分（包括特异的IgG抗体）都被洗涤除去。第二步，加入酶标记

2、物，酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）标记的基因重组抗原HEV NE2。特异性的HEV-IgM会与辣根过氧化物酶标记的HEV重组抗原结合，洗去其他未结合物。最后用TMB底物显色，通过酶标仪检测吸光度（OD）从而判定样品中HEV-IgM抗体的存在与否。6. 试剂：6.1 品牌: 北京万泰生物药业有限公司。6.2 包装规格:48人份。6.3 内含物:每盒试剂含以下成分：6.3.1 HEV-IgM酶标板:12孔4；6.3.2 HEV-IgM阳性对照：0.5mll瓶；6.3.3 HEV-IgM阴性对照：0.5mll瓶；6.3.4 HEV-IgM样品稀释液：12mll瓶；6.3.5 HEV-IgM酶联试

3、剂：12mll瓶；6.3.6 浓缩洗涤液 (20)：50mll瓶；6.3.7 显色剂A：6mll瓶；6.3.8 显色剂B：6mll瓶；6.3.9 终止液(2M硫酸)：6mll瓶；6.3.10自封袋：1个；6.3.11封板膜：3张；6.3.12说明书：1份。7. 仪器：意大利Alisei全自动酶免分析仪。8. 操作步骤8.1 打印工作单:8.1.1 打开电脑及打印机电源，8.1.2 双击齐效检验系统，登陆工号与密码；8.1.3 双击报告处理，单击标本申请信息打开标本申请明细信息查询，打开左上角的所有信息，选择未生成报告信息。8.1.4 在检验项目处选择HEV执行查询，点击打印申请单，打印出工作单

4、。8.2 排列待测标本:根据工作单上的库位号从标本架中找出相应标本，并按工作单上的顺序排列在Alisei全自动酶免分析仪的样本架上。8.3 装载试剂：开启Alisei全自动酶免分析仪，根据待测标本数量，点击编辑工作列表，出现试剂及酶标板界面。按照屏幕所示放好洗板液，洗针液，标本试管，预稀释管和试剂。8.4 装载酶标板：点击Alisei全自动酶免分析仪界面的装卸反应板按钮进行装载反应板，按项目顺序进行装载。等所有项目酶标板装载完成后，点击开始按钮，机器开始检测。8.5 Alisei分析仪检测参数：试剂空 白阳性对照阴性对照标 本加样单 孔双 孔三 孔单 孔（10ul标本+100ul样品稀释液）/

5、孔温育37，30分钟洗涤洗涤液350ul/孔 5次酶联试剂100ul/孔温育混匀，37，30分钟洗涤洗涤液350ul/孔 5次显色50ul/孔B液50ul/孔温育混匀，37，15分钟终止50ul/孔终止液判读450/630mn读取OD值8.6 仪器自动记录OD值并可打印测定结果，同时传入LIS中，发送报告详见免疫报告发送程序。8.7 结果判断8.7.1 每个实验的结果独立使用，通过（S/C.O.值）判断结果。8.7.2 计算临界值：Cut-off（C.O）=Nc+0.26（Nc=阴性对照的均值）如果其中一个阴性对照不在质控范围之内，舍去，按照其他二孔的均值，如果其中二个以上阴性对照不在质控范围

6、之内，实验无效，需要重新操作。8.7.3 质量控制：8.7.3.1空白孔（只加显色液和终止液）的吸光度值应不大于0.0808.7.3.2阳性对照的吸光度值应大于等于0.8008.7.3.3阴性对照的吸光度值应小于等于0.100 如果质控是有效的，实验结果就是有效的。建议每个实验室用质控品或已知的患者标本建立适合本实验室的质控体系。8.7.4 结果判定：（S=每孔的吸光度值）8.7.4.1阴性结果（S/C.O.1）:样本的吸光度值小于Cut_off值为阴性，代表该标本中尚未检测出HEV-IgM抗体。8.7.4.2阳性结果（S/C.O.1）:样本的吸光度值大于或等于Cut_off值为阳性，代表该标

7、本中可以检测出HEV-IgM抗体，推荐双孔复试。9. 参考范围：正常人阴性。10. 临床意义：戊型肝炎既往称肠道传染性非甲非乙型肝炎，由戊型肝炎病毒（HEV）感染所致。HEV属杯状病毒科，所以戊型肝炎的临床症状和流行病学都与甲肝相似。11. 病人准备、标本要求：标本为血清时最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它体液标本无特殊要求。12. 注意事项： 此试剂盒为体外诊断试剂，供专业人员使用。为保证结果准确，请严格按照说明书中的实验步骤操作。12.1不同批号的试剂或者不同厂家的试剂不能通用，同是万泰产品的同批号试剂组份可以通用。12.2不要使用超过有效期的试剂。12.3操作注意事项：12.3.1使

8、用试剂前，将试剂放置于室温（18-30）平衡15-30分钟。12.3.2实验完毕立即将试剂置于2-8储存。12.3.3不要接触微孔底部，指纹划痕会影响读数。12.3.4判读时，确保板底干燥且微孔内无气泡。12.3.5吸板是个关健步骤，注意吸板的次数，每孔洗涤时洗液需要注满，不正确的洗涤方式将导致不正确的结果。12.3.6洗涤完毕后，不宜将干燥的酶标板放置太长（超过10分钟），应立即进行下一步操作。12.3.7定期校准移液器，确保准确，每个样本用不同的加样头以避免交叉污染。12.3.8确保温箱内部的温度为371。12.3.9加样时避免加样头接触微孔的底部。12.3.10阳性对照已经无害化处理，但是实验时所有的标本都应视为传染