动物实验培训

1、动物实验第一节 医学科学研究与动物实验的关系第二节 实验动物科学在生物医学发展中的作用 第三节 生物医学研究中实验动物的选择原则 第一节 医学科学研究与动物实验的关系1医学科研中采用动物实验，可以把很多人体上非常复杂的问题简单化，可以进行各种因素的细微探讨，而这是临床研究难于做到的。 4药物的长期疗效和远期效应，在实验室采用动物实验方法来观察，没有过多的影响因素，但在临床研究中问题就比较复杂，如病人多吃或少吃药、病人自身停药、病人另外求医、病人又患其他疾病、病人死亡及病人失去联系等均可影响治疗效果的最终判定。 5医学上有些重要概念的确立只有通过动物实验才能作到，临床上是根本作不到的。2通过动物

2、实验，发现了抗原抗体反应，了解了免疫性紊乱疾患的本质和补体的作用，推动了变态反应性疾病的研究。 3通过动物实验，创立了实验肿瘤学，发现了化学致癌物质和致癌病毒，推动了肿瘤学的研究，为肿瘤的防治开辟了广阔的前景。 4通过动物实验，认清了一些多发病的基本性质，对根除和控制这些疾病趁着极大作用。 5通过动物实验，创立了“应激学说”，对临床上广泛应用激素疗法起了重要的指导作用。6临床医学的许多重大技术的创造和发展也与动物实验息息相关。 3巴斯德（Louis Pasteur,18221895）法国微生物学家、化学家、近代微生物学的奠基人。他在病原微生物方面的研究，奠定了医学微生物学的基础。4巴甫洛夫（B

3、aH eTpOBh aBOB,19481936）俄国生理学家，他一生作了大量的动物实验，在心脏生理、消化生理和高级神经活动三个方面作出了重大贡献。 5贝尔纳（Claude Bernard,18131878）法国生理学家，他的最重要的发现为肝脏的产糖功能和血管运动神经。6 莱夫勒（Friedrich Loffler,18521915）德国细菌学家，在白喉研究的早期，证明了实验动物因注射白喉杆菌而死亡时，细菌仍留在注射点的附近。他认为动物死亡是由细菌的毒素所造成。 9洛伊（Otto Loewi），格次茨大学药物学教授。1921年，他以创造性的思维，仅采用简单的动物实验方法，就发现了副交感神经的神经

4、介质为乙酰胆硷。10 .1914年日本人山极和市川用沥青长期涂抹兔耳朵，成功地诱发出皮肤癌，后经分析沥青中主要含有3，4-苯骈芘的化学致癌物，从而证实了化学物质的致癌作用。 医学史上一些科学家采用动物实验而获得重大发现 表7-1 早年医学研究 发现 年份 发现人 所用动物 血液循环 1628 哈维 蛙、蛇、鱼、蟹、其他 醚麻醉 1846 玛登 鸟类、其他 细菌与疾病的关系 1878 科赫 牛、羊、其他 细菌致弱用免疫 1880 巴斯德 鸟类 狂犬病免疫 1885 巴斯德 鸟类、家兔 虫媒传播疾病 1898 史密斯等 牛 蚊传播疟疾 1898 罗斯 鸟类 表7-2现代医学研究. 发现 年 份 发

5、现人 所用动物肿瘤的病毒病原 1910 洛斯 鸡 胰岛素 1921 班定 狗 休克治疗 1927 博莱罗克 狗 抗细菌药物（百浪多息）1935 多麦克 小鼠 心肺旁道器 1953 葛明 猫 小儿麻痹症疫苗 1954 索尔克 恒河猴 变性脑病的病毒病原 1965 格但斯克 猩猩 心脏移植 1967 伯纳德 狗 第三节 生物医学研究中实验动物的选择原则表7-3供肿瘤研究用的纯系小鼠肿瘤名称 动物品系 乳腺肿瘤 C3H、A、DBA、b III、BALB/C肺癌 A、SWR、BALB/C、BL 肝细胞瘤 C3H、C3H2、C3He 白血病 C58、AKR、C57L、BALB/C、DBA/2 胃癌 I、

6、BRS、C3H、C57BL/C 睾丸间质细胞瘤 A、BALB/C 表7-4 供种类实验研究用的纯系小鼠实验研究类别 动物品系心血管疾病 DBA/2N 自家免疫性疾病 NZB/N、NZBNZW 脑积水 C57BL/KaLwN、BIO、D2/nSnN 肾盂积水 C57L/N、STR/N 白内障 STAR/N 卵巢囊肿 C57L/N 肾脏病 A/HeN 白血病 L615、L7212、LS783、和津638、AKR 表7-5人和常用实验动物在解剖、生理及代谢方面的比较 动物 相似点 相异点 小鼠 老龄肝变化 肝脏、脾脏、 网膜循环，大鼠 脾脏、老龄胰变化， 心脏循环，无胆囊，兔 老龄脾变化 肝脏，汗腺

7、 脾脏血管，脾脏，免疫、 细支气管，肺 呼吸神经分布，鼓膜张肌 豚鼠 脾脏、免疫 汗腺 第四节 动物实验基本方法一、动物实验的常用方法二、实验动物的抓取固定方法 三、实验动物编号标记方法 四、实验动物的随机分组方法 五、实验动物给药途径和方法 六、实验动物的麻醉 七、实验动物采血方法 6移植法7生物电、活性观察法8病理解剖学、组织学观察法9免疫学观察法10其它1复制动物模型法 此法是动物实验最基本的方法，是采用人工的方法使动物在一定致病因素（机械、化学、生物和物理）作用下，造成动物的组织，器官或全身的一定损伤，复制成与人类疾病相似的动物疾病模型，来研究各种疾病的发生、发展规律及防治方法。2切开

8、、分离法 此法是以活体动物为对象的整体实验常用方法。习惯上把在麻醉情况下，制备一些实验条件（如活体解剖、分离暴露器官、组织或进行一些手术制备等措施）进行研究。 采用此法应注意麻醉深度更适中，手术要轻巧，少出血、减少创伤，并要熟悉手术部位的神经、血管等解剖。3切除和注入提取液法 常用于研究内分泌器官的生理和病理病变，如研究切除某一腺体后看辐射对机体的影响，切除某一腺体后看出现什么症状而推论这种腺体的功能。 如蝌蚪无甲状腺素，如注入甲状腺素，蝌蚪很快变成了蛙。4离体组织器官法 离体实验是利用动物的离体组织、器官或生物性致病因子（微生物、寄生虫等），置于一定的存活条件下（如温度、营养成分、氧气、水、

9、pH等）进行观察的一种实验方法。 如可利用离体肠管观察药物对肠管动物、吸收、通透性、血流情况等的影响，并进行作用机理的分析。 动物组织、细胞的培养也常用此种方法。5瘘 管 法 用无菌手术方法给动物造成不同的人造瘘管如胃肠道瘘管、膀胱瘘管、唾液腺瘘管、食道瘘管、胆囊瘘管等。这些瘘管可以收集内脏液体，是生理学消化研究的主要方法。 一般是先在无菌操作下制备好实验模型（瘘管法是其中一种），待动物恢复健康后进行研究。6移植法 一般是将动物的器官、组织或细胞进行相互移植的一种方法。 如骨髓移植时，将小鼠A（供体）的骨髓注入到小鼠B的血液中（受体），很快可见脾结节化（脾造血）。脾结节的数量反映了造血干细胞的

10、多少，由此可以观察干细胞的变化。7生物电、活性观察法 对动物体各种生物电用电生理记录仪进行观察记录，如心电、肌电、脑电等；对动物组织中各种活性物质用生物化学法测定，如各种酶，激素等。8病理解剖学、组织学观察法 采用肉眼观察、光镜和电镜检查，来观察、分析动物各种疾病时病理组织学改变。可从组织学的角度来探讨疾病防治机理，由于电子显微技术的进展，不仅可以观察到病变时细胞内细胞器等亚细胞结构的变化，而且也可以运用电子扫描方法对动物器官的微小结构进行完整的表层观察。9免疫学观察法 注入抗原使动物致敏，制备各种抗血清，如常选用新西兰或大白耳家兔制备病原体免疫血清、间接免疫血清、抗补体抗体血清、抗组织免疫血

11、清等。采用免疫荧光技术、酶标记免疫技术、放射免疫测定技术、免疫电镜技术等对动物免疫后各种免疫变化进行检查。10其它方法 如联体动物法，条件反射法、生物遗传法、放射生物法、药物化学等。二、实验动物的抓取固定方法 （一）小鼠抓取固定方法 （二）大鼠的抓取固定方法 （三）蛙类的抓取固定方法 （四）豚鼠的抓取固定方法 （五）兔的抓取固定方法 图1小鼠的抓取固定方法图3 蛙、蟾蜍抓取固定方法 图4豚鼠的抓取固定方法图5 家兔抓取方法 图6 家兔盒式固定法图7 家兔台式固定法三、实验动物编号标记方法 常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。 （一）颜料涂染 使用的颜料一般有3-5%苦味酸溶（黄），

12、2%硝酸银（咖啡色）溶液和0.5%中性品红（红色）等。 图8 颜色被毛涂擦标记法四、实验动物的随机分组方法 将实验单位随机分成三组 设有动物15只，随机等分成A、B、C三组。 将动物编号后，按上述方法，从随机数字表抄录15个数字，将各数一律以3除之，并以余数1、2、3代表A、B、C，结果归入A组，归入B组，归入C组。 动物号 随机数 除后余数 归组 动物号 随机数 除后余数 归组 分组结果A组6只： ，1 B组4只： ， ， C组5只： ， 要使三组的动物数相等，须把原归A组的6只动物中的1只改配到B组去。可以随机数字表继续按斜角线抄录一个数字，得60，以6除之，除尽（相当于余数为6），就可以

13、把第六个A（即12号）动物改为B组。调整后各组的动物编号如下：组： ， ， ， 组： ， ， ，组： ， ， 五、实验动物给药途径和方法(一）皮下注射 (二）皮内注射(三）肌肉注射 (四）腹腔注射 (五）静脉注射(六) 经口给药 图9小鼠腹腔注射方法 图10小鼠尾静脉注射方法 表7-6几种动物不同给药途径的常用注射量（ml）注射途径 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 狗 腹腔 0.2-1.0 1-3 2-5 5-10 5-15肌肉 0.1-0.2 0.2-0.5 0.2-0.5 0.5-1.0 2-5 静脉 0.2-0.5 1-2 1-5 3-10 5-15皮下 0.1-0.5 0.5-1.0 0.5-2

14、 1.0-3.0 3-10六、实验动物的麻醉 (一)常用的麻醉剂1挥发性麻醉剂:包括乙醚、氯仿等。 2非挥发性麻醉剂:包括苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。 3中药麻醉剂 :包括洋金花和氢溴酸东莨菪碱等中药麻醉剂。 表7-7常用麻醉剂的用法及剂量麻 醉 剂 动物 给药方法 剂量 常用浓度 维 持 时 间 （mg/kg） （%） （ 小时） 戊巴比妥纳 狗、兔 静脉 30 3 2-4 大、小鼠、腹腔 40-50 2 2-4 豚鼠 腹腔 40-50 2 2-4硫喷妥纳 狗、兔 静脉 15-20 2 15-30分钟 大白鼠 腹腔 40 1 15-30分钟 小

15、白鼠 腹腔 15-20 1 15-30分钟 氯 醛 糖 兔 静脉 80-100 2 3-4 大白鼠 腹腔 50 2 3-4乌 拉 坦 兔 静脉 750-1000 30 2-4 大、小白鼠 肌肉 800-1000 20 2-4 七、实验动物采血方法 采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。 表7-8不同动物采血部位与采血量的关系采血量 采血部位 动物品种 取少量血 尾静脉 大鼠、小鼠 耳静脉 兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊 眼底静脉丛 兔、大鼠、小鼠取中量血 后肢外侧皮下小隐静脉 狗、猴、猫 前肢内侧皮下头静脉 狗、猴、猫 中央动脉 兔 颈静脉 狗、猫、兔 心脏 豚鼠、大鼠、小鼠