高原严重烧伤延迟复苏大鼠脑损伤与兴奋性氨基酸水平变化

1、高原严重烧伤延迟复苏大鼠脑损伤与兴奋性氨基酸程度变化【摘要】目的：观察高原严重烧伤延迟复苏后早期大鼠脑损伤及兴奋性氨基酸含量的变化.方法：130只雄性istar大鼠随机分为烧伤即时复苏组(n=60)、烧伤延迟复苏组(n=50)和正常对照组(高原地区正常对照组n=10和兰州地区正常对照组n=10).前两组动物被制成高原海拔3800烧伤实验动物模型TBSA30，度.运用高效毛细管电泳法检测脑组织中兴奋性氨基酸谷氨酸，Glu含量，采用干、湿重比重法测定脑组织含水量，原位末端标记TUNEL观察脑皮质神经细胞凋亡.结果：从兰州地区急进高原后，大鼠脑组织Glu含量、脑组织含水量、脑皮质中TUNEL阳性细胞

2、数均未发生明显改变P0.05；高原严重烧伤后脑组织Glu程度于伤后1h即显著降低，持续至伤后24h，于伤后72h恢复至正常程度P0.05；延迟复苏组脑组织Glu程度在观察时限内均低于上述两正常对照组，延迟复苏组与即时复苏组相比除在伤后12h时相点无统计学差异外，其余时相点均低于即时复苏组P0.05.而脑组织含水量于伤后6h开场升高，于24h达顶峰，于伤后7d降至正常程度；高原烧伤延复组变化趋势同高原烧伤即复组，但伤后7d仍未恢复.脑皮质TUNEL阳性细胞在伤后1h即增多，也于伤后24h达顶峰，伤后7d仍高于正常程度.结论：由兰州地区急进到高原地区，并缺乏以导致大鼠脑组织中兴奋性氨基酸含量发生变

3、化及大鼠脑水肿的发生和脑皮质凋亡细胞数的增加；高原严重烧伤及延迟复苏后，细胞外兴奋性氨基酸减少，同时伴有受伤大鼠迅速出现脑水肿，脑皮质凋亡细胞显著增加.【关键词】烧伤；延迟复苏；兴奋性氨基酸类；脑水肿；细胞凋亡；大鼠0引言严重烧伤引起的脑损伤及脑水肿在平时和战时均很常见，已有大量文献报道1-3.大量研究显示兴奋性氨基酸exitatryainaids,EAAs的大量释放而产生的毒性作用，在加重继发性脑损伤中起重要作用.本研究利用大鼠严重烧伤后即时复苏与延迟复苏模型，初步观察高原严重烧伤延迟复苏后早期大鼠脑组织中兴奋性氨基酸含量变化及与脑损伤的关系.1材料和方法1.1材料1.2方法致伤前1k，置室

4、温1925.实验前24h用电推推去背部被毛，单笼饲养.实验前12h禁食、水.用含10g/L的戊巴比妥钠ip注射麻醉40g/kg后，除正常对照组外，于大鼠背部建立30%度烫伤模型病理证实.致伤条件为90，20s.正常对照组：模拟烫伤37水浴，20s.动物随机分为4组：高原烧伤即时复苏组高伤即复，n=60，伤后立即腹腔注射等渗盐水按Parkland公式4L/kg；设立观察与检测时间点：1hPB1h，6hPB6h，12hPB12h，24hPB24h，72hPB72h，7dPB7d；高原烧伤延迟复苏组高伤延复，n=50，伤后6h开场补液；设立观察与检测时间点：PB6h，PB12h，PB24h，PB72

5、h，PB7d；高原正常对照组高正常，n=10，不补液.兰州地区正常对照组兰正常，n=10，海拔1517，不补液.高伤即复组大鼠于伤后1，6，12，24，72h，7d6个时相点，高伤延复组大鼠于伤后6，12，24，72h，7d5个时相点分别取材，每个时相点各取10只动物，固定于实验台，于各时相点抽血后，将大鼠断头，迅速取脑，置0冰盐水冲洗，去除血液、大血管等结缔组织，吸干；用0.1l/L磷酸缓冲液冲洗后，用双面刀片于脑正中线将脑组织纵形剖开，将大脑左半球切取完好的薄片约0.5后置于40g/L的中性甲醛混合固定液，放于4冰箱，用于光镜检查及免疫组织化学检测.将上述剩余脑组织大脑皮质，用电子天平称重

6、后置于80烤箱36h再称重，利用组织干湿重比值，观察脑组织含水量，以检测脑水肿的变化.将大脑右半球迅速放置于冻存管中置于液氮中保存，用于兴奋性氨基酸的检测.谷氨酸含量采用高效毛细管电泳法4检测脑组织中谷氨酸含量.所得结果用l/g表示.脑组织含水量采用干湿比重法测定5：脑组织含水量=湿重-干重/湿重100%.细胞凋亡实验步骤按文献6及说明书并稍作改良进展.DAB显色，显微镜下观察，细胞核中出现棕黄色颗粒者为TUNEL阳性细胞，即凋亡细胞.统计学处理：所得数据以xs表示，采用SPSS统计软件对组间差异进展单因素方差分析及两两比拟，P0.05为有统计学意义.2结果2.1谷氨酸浓度变化急进高原高正常后

7、脑组织Glu程度较兰正常组稍降低，但统计学无差异P0.05；高原严重烧伤后，高伤即复组Glu程度于伤后1h即显著低于上述两正常对照组，于伤后6h开场上升，于12h再次下降，伤后24h又升高，伤后72h恢复至正常程度P0.05；高伤延复组脑组织Glu程度在观察时限内均低于上述两正常对照组，高伤延复组与高伤即复组相比除在伤后12h时相点无统计学差异外，其余时相点均低于高伤即复组P0.05,图1.P0.05.高原严重烧伤后，高伤即复组于伤后6h脑组织含水量开场升高，伤后24h达顶峰，随后下降，伤后7d降至正常程度；高伤延复组变化趋势同高伤即复组，也于伤后24h达顶峰，但伤后7d仍高于上述两正常对照组

8、，且两组间对应时相点相差无统计学意义P0.05,图2.2.3细胞凋亡兰正常组脑皮质中只检测到很少的TUNEL阳性细胞2个/高倍视野，高正常组脑皮质中TUNEL阳性细胞数较兰正常组稍增高3.67个/高倍视野，但两者无统计学差异；而高伤即复组脑皮质在各时相点均检测到的TUNEL阳性细胞较上述两正常对照组明显增多P0.01，随着受伤时间的延长，标本TUNEL阳性细胞逐渐增多，于伤后24h达顶峰233.67个/高倍视野，此后TUNEL阳性细胞数那么呈现下降趋势，伤后7d仍显著高于上述两正常对照组.高伤延复组脑皮质中TUNEL阳性细胞数变化趋势根本与高伤即复组一样，于伤后6h显著升高，但于12h有一个下

9、降过程，随后开场增加，也于24h达峰值(216个/高倍视野,图3)；但高伤即复组及高伤延复组在上述各时相点所检测到的凋亡细胞数无统计学差异P0.05).TUNEL标记阳性的细胞核被染成棕褐色，胞浆复染为淡蓝色.3讨论海拔3000，大多数人在静息状态下可出现不同程度的高原反响，随着海拔高度的增高，高原病的发病率逐渐增加7.脑组织对氧的需求量高，对缺氧的耐受性差，是机体对缺氧最敏感的组织8.脑缺血再灌注损伤的机制非常复杂，能量代谢、细胞内钙、细胞凋亡、兴奋性氨基酸毒性、细胞因子、氧自由基RS产生和炎症反响等可能与再灌注损伤有关9.本研究在高原海拔3800实地环境条件下研究高原大鼠严重烧伤延迟复苏后脑组织兴奋性氨基酸含量动态改变及与脑损伤的关系.黎海涛等10报道犬严重烧伤早期即有脑水肿形成，伤后12h已十清楚确.本研究结果显示，由兰州地区1517饲养的大鼠通过急进高原地区38