羊水基质金属蛋白酶与胎膜破裂的关系

1、羊水基质金属蛋白酶与胎膜破裂的关系分娩时胎膜自然破裂的机理尚不完全清楚，目前认为，胎膜中胶原的降解是其发生的重要基矗胶原的降解依赖基质金属蛋白酶(atrixetallprtEinase,P)的作用1。为讨论P与胎膜正常破裂及胎膜早破(preaturerupturefebrane，PR)发生的关系，我们检测了胎膜正常破裂及PR孕妇羊水中总P的活性及其成分，现报道如下。一、资料与方法2.方法：(1)标本采集：于剖宫产时抽取羊水3l，立即离心、过滤，-70保存。(2)酶活性的测定：羊水消化生物素标记明胶，用酶联免疫吸附(ELISA)法测定剩余明胶的含量，换算出酶的活性以37下每1l羊水12h消化的明

2、胶量表示，单位：ng/l*12h，用加乙二胺四乙酸(终浓度80l/L)的羊水作阴性对照。3羊水中P成分的酶谱分析：参照ll等2介绍的方法进展明胶电泳，电泳完毕将凝胶置于培养皿中，经2.5%Tritn-X100洗涤后，37下孵育18h，用考马斯亮蓝G-250染色1h，最后脱色48h；酶经电泳组分后，将该处的明胶消化，染色后形成不着色的透明带。3.统计学处理：实验结果作t检验。二、结果1.对照组羊水总P的活性变化：未临产时为(4915)ng/l*12h，埋伏期为(5815)ng/l*12h，活泼期为(10229)ng/l*12h。埋伏期高于未临产期，但差异无显著性，活泼期较埋伏期显著升高，差异有极

3、显著性(P0.01)。2.PR组羊水中总P的活性变化：PR组未临产时羊水中总P活性为(8510)ng/l*12h，埋伏期为(917)ng/l*12h，活泼期为(10423)ng/l*12h。埋伏期高于未临产期，但差异无显著性，活泼期较未临产期显著升高，差异有极显著性(P0.01)。在未临产期和埋伏期，PR组羊水中总P的活性均显著高于对照组，差异有极显著性(P0.01)。3.羊水中P的酶谱变化：羊水中较明确的P带有4条，相对分子质量分别为92000、83000、72000和66000。对照组未临产期羊水中以92000和72000的P条带为主，活泼期那么4条条带都有，其中相对分子质量为92000和

4、83000的P条带所消化的明胶带，较未临产期明显增宽。PR组羊水中P的成分与对照组根本一样，但在未临产时羊水中各P消化的明胶带较对照组宽。三、讨论1.P的特性：P是一类构造中含有锌和钙等金属离子的蛋白水解酶，能水解胶原、弹性蛋白、氨基葡聚糖等多种细胞外基质，目前已发现的有十几种，其构造相似，均以酶原的形式从细胞中分泌，活性都能被组织金属蛋白酶抑制因子和乙二胺四乙酸抑制。近年来的研究发现，P可能在胎膜破裂、分娩及产后子宫复旧等过程中发挥重要的生理功能。2.羊水中P的成分：Vadill-rtega等3在正常分娩产妇的羊水中，检测出了3条P条带，相对分子质量分别为183000、92000和83000

5、，分别是P-9的二聚体、酶原和活化形式。但我们发现，羊水中存在4种P成分，相对分子质量分别为92000、83000、72000和66000，未能发现183000的P-9二聚体，推测可能是人种的差异，也有可能是方法的差异。根据相对分子质量推测，92000和66000的P可能分别是P-9的酶原和活化形式，而72000和66000为P-2的酶原和活化形式。因此，羊水中P的主要成分为P-9，包括其酶原和活化形式，终究是否存在P-9二聚体和P-2有待进一步的研究证实。3.羊水中P活性变化与胎膜破裂的关系：胎膜完好性的保持依赖宫腔内压与胎膜强度的平衡。正常分娩活泼期宫内压增加和胎膜强度下降导致胎膜破裂。胶

6、原的合成缺乏和降解增加，引起胎膜强度下降。胎膜中胶原的大量降解可能与P活性升高有关。aj等4发现，分娩发动后胎膜组织中P的活性显著升高，并以P-9活性升高更明显；我们的研究结果说明，对照组羊水中总P的活性在产程的活泼期显著升高，从明胶酶谱来看，以P-9的升高更明显。因此活泼期羊水中总P，特别是P-9活性的增高，引起胎膜中胶原的大量降解，可能是胎膜破裂发生的重要生理基矗4.羊水中P活性异常与PR的关系：PR患者的胎膜中胶原的含量低于正常同孕周妇女，这与其胎膜中胶原合成减少和分解异常增加有关。我们发现PR组羊水中总P活性异常升高。另有研究说明，PR患者羊水中基质金属蛋白酶抑制因子的含量那么显著低于

7、正常孕妇5。因此，羊水中总P活性异常增高和其抑制因子的降低，从而引起胎膜中胶原的过度降解，可能是PR发生的主要原因之一。PR的发生与感染及炎症亲密相关6，感染或炎症过程中产生的细胞因子如白细胞介素1、8(IL-1、IL-8)及细菌产生的脂多糖等都能诱导P的合成和活化。因此我们推测羊水中P活性的异常升高，可能是多种因素诱发PR的共同环节之一。参考文献2，llU,YunglerbGL,RsinskiKB,etal.Turprter-stiulatedr93,000gelatinaseseretedbynralandalignanthuanells:Islatinandharaterizatinft

8、heenzyefrHT1080turells.anerResearh，1990，50:6162-6170.3，Vadill-rtegaF,Gnzalez-AvilaG,FuthEE,etal.92-KDtypeIVllagenase(atrixetallprtEinase-9)ativityinhuananihrininreasesithlabr.AJPathl，1995，146:148-156.4，ajJG,Kankfer.Ativityf72-KDand92-KDatrixetallprteinasesinplaentaltissuesfsithandithutretainedfetalebranes.Plaenta，1997，18:683-687.5，Vadill-rtegaF,HernanderzA,Gnzalez-AvilaG,etal.Inreasedatrixetallprteinaseativityandreduedtissueinhibitrfetallprteinase-1levelsinanitifluidsfrpregnaniespliatedbypreatur